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微囊化基质细胞对脐带血造血干/祖细胞扩增支持 被引量:1
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作者 刘洋 刘天庆 +3 位作者 范秀波 鲍春雨 马学虎 崔占峰 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期176-182,共7页
将脐带血单个核细胞与包埋有兔骨髓间充质干细胞的海藻酸钙微胶珠在3种不同的培养液中进行了7d的体外静态共培养.每24h进行总有核细胞计数,在0、72和168h进行流式CD34+细胞分析以及甲基纤维素集落检验.实验结果表明:经过7d的静态共培养... 将脐带血单个核细胞与包埋有兔骨髓间充质干细胞的海藻酸钙微胶珠在3种不同的培养液中进行了7d的体外静态共培养.每24h进行总有核细胞计数,在0、72和168h进行流式CD34+细胞分析以及甲基纤维素集落检验.实验结果表明:经过7d的静态共培养,在添加常规剂量造血生长因子的培养液中,总有核细胞扩增了(15±2.85)倍,CD34+细胞扩增了(5.33±0.32)倍,CFU-Cs扩增了(5.6±1.21)倍.微胶囊可以作为一种新的共培养隔离手段,微囊化兔骨髓间充质干细胞在添加适量血清或者造血生长因子组合的条件下对于脐带血造血干/祖细胞在静态下的扩增有明显的促进作用. 展开更多
关键词 脐带血造血干/祖细胞 CD34+细胞扩增 间充质细胞 海藻酸钙微胶珠
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脐带血造血干/祖细胞罗丹明123荧光染色及其意义 被引量:2
2
作者 章涛 方宁 +3 位作者 张潜 万卫红 祁莹 陈代雄 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期206-207,210,共3页
目的探讨人脐带血造血干/祖细胞(UCB-HSPC)罗丹明123(Rho123)荧光染色特点及其应用价值。方法采用密度梯度离心法获取脐带血单个核细胞(UCB-MNC),用含终浓度为0.1μg/mlRho123的2%胎牛血清-PBS液、37℃下孵育UCB-MNC细胞(细胞浓度为106/... 目的探讨人脐带血造血干/祖细胞(UCB-HSPC)罗丹明123(Rho123)荧光染色特点及其应用价值。方法采用密度梯度离心法获取脐带血单个核细胞(UCB-MNC),用含终浓度为0.1μg/mlRho123的2%胎牛血清-PBS液、37℃下孵育UCB-MNC细胞(细胞浓度为106/ml)20min,之后用Lin抗体(PE标记的CD19、CD13、CD2、CD8、CD3)及造血干/祖细胞(HSPC)标志抗体CD34-PerCP和CD38-APC标记UCB-MNC细胞,流式细胞仪分析HSPC亚群及其Rho123染色特点。结果流式细胞术检测结果表明,UCB-Lin-MNC中的HSPC比例高于MNC中约6倍;UCB-CD34+CD38+造血祖细胞(HPC)的Rho123染色平均荧光强度值为23.55±2.40,是UCB-CD34+CD38-造血干细胞(HSC)值10.22±1.03的2倍多(P<0.01)。结论UCB-Lin-MNC中富含HSPC;UCB-HSC的Rho123染料聚集能力明显低于UCB-HPC,提示Rho123拒染法可作为进一步纯化人UCB-HSC的新手段。 展开更多
关键词 脐带 造血细胞 造血祖细胞 罗丹明123 荧光激活细胞分选
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脐带血造血干/祖细胞关键细胞周期蛋白D亚型的鉴定
3
作者 孟凡凯 刘文励 +6 位作者 孙汉英 谭细友 周剑锋 吴宁 孙岚 刘丹 路武 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期143-145,共3页
目的 确定控制脐带血造血干 /祖细胞增殖的细胞周期蛋白D (CyclinD)关键亚型。 方法 用Midi MACS免疫磁珠阳性分选的方法分离出脐带血CD34+ 细胞 ,在体外扩增以后 ,用RT PCR和WesternBlot分别在mR NA水平和蛋白水平检测CyclinD不同亚... 目的 确定控制脐带血造血干 /祖细胞增殖的细胞周期蛋白D (CyclinD)关键亚型。 方法 用Midi MACS免疫磁珠阳性分选的方法分离出脐带血CD34+ 细胞 ,在体外扩增以后 ,用RT PCR和WesternBlot分别在mR NA水平和蛋白水平检测CyclinD不同亚型的表达。 结果 mRNA在CyclinD1无表达 ,CyclinD2、CyclinD3有表达 ;蛋白在CyclinD1无表达 ,CyclinD2弱表达 ,CyclinD3高表达。 结论 控制脐带血造血干 /祖细胞增殖的CyclinD关键亚型是CyclinD3。 展开更多
关键词 脐带 造血细胞 细胞周期蛋白D 造血祖细胞 鉴定 液病
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乙醛脱氢酶在检测脐带血造血干/祖细胞中的应用 被引量:2
4
作者 李莉 赵英新 +4 位作者 孟恒星 刘兰婷 何祎 李茜 韩俊领 《生物医学工程与临床》 CAS 2009年第4期324-327,共4页
目的通过比较乙醛脱氢酶(ALDH)与CD34、CD133及粒单核细胞集落形成单位(CFU-GM)在脐带血中含量的差异,探讨ALDH作为脐带血造血干/祖细胞(HSPC)检测指标的有用性。方法采集新鲜脐带血标本28份,用荧光底物法标记ALDH,流式细胞仪检测脐带... 目的通过比较乙醛脱氢酶(ALDH)与CD34、CD133及粒单核细胞集落形成单位(CFU-GM)在脐带血中含量的差异,探讨ALDH作为脐带血造血干/祖细胞(HSPC)检测指标的有用性。方法采集新鲜脐带血标本28份,用荧光底物法标记ALDH,流式细胞仪检测脐带血中低侧向角高表达ALDH活性(SSCloALDHbr)细胞、CD34+和CD133+含量,并进行CFU-GM的培养。结果脐带血SSCloALDHbr细胞表达率在ALDH反应后直接上机检测组(ALDH组)及在ALDH反应后进一步标记抗体再检测组(ALDH+抗体组)分别为(0.32±0.16)%和(0.30±0.17)%,两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。脐带血CD34+表达率在抗体组和ALDH+抗体组分别为(0.40±0.26)%和(0.36±0.19)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);脐带血CD133+表达率在抗体组和ALDH+抗体组分别为(0.18±0.16)%和(0.17±0.10)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。脐带血SSCloALDHbr细胞表达率和CD34+表达率、CD133+表达率及CFU-GM产率均呈正相关(r分别为0.87、0.69和0.54,P均<0.01)。结论ALDH反应后进一步标记抗体不影响脐带血SSCloALDHbr细胞的检测结果,ALDH反应亦不影响进一步标记抗体的检测结果;脐带血SSCloALDHbr细胞表达率和CD34+表达率、CD133+表达率及CFU-GM产率均呈正相关;ALDH活性检测可以作为检测脐带血HSPC的一个有用指标。 展开更多
关键词 脐带 /祖细胞 SSC^loALDH^br细胞 CD34^+ CD133^+
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黑枸杞花青素联合人脂肪源性血管外膜细胞支持脐血造血干/祖细胞的增殖
5
作者 申娅媚 牛云霞 +3 位作者 杨婷婷 马洁 胡代宏 郑波 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第1期58-64,共7页
背景:黑枸杞花青素(Anthocyanins in Lycium ruthenicum Murr,ALRM)是黑枸杞中重要的活性成分之一,具有抗氧化、免疫调节等功效。人脂肪源性血管外膜细胞(CD146^(+)hAD-PCs)是骨髓间充质干细胞的前体细胞,在体外具有促进造血干/祖细胞... 背景:黑枸杞花青素(Anthocyanins in Lycium ruthenicum Murr,ALRM)是黑枸杞中重要的活性成分之一,具有抗氧化、免疫调节等功效。人脂肪源性血管外膜细胞(CD146^(+)hAD-PCs)是骨髓间充质干细胞的前体细胞,在体外具有促进造血干/祖细胞增殖与分化的功能。ALRM联合CD146^(+)hAD-PCs对脐血造血干/组细胞的体外支持作用有待于研究。目的:探讨ALRM联合CD146^(+)hAD-PCs对脐血CD34^(+)造血干/祖细胞体外扩增的支持作用。方法:CCK-8法检测不同质量浓度ALRM(0,200,400,600,800,1000 mg/L)对CD146^(+)hAD-PCs增殖的影响;流式细胞术检测ALRM对CD146^(+)hAD-PCs细胞周期的影响。共培养实验分为空白组、ALRM组、CD146^(+)hAD-PCs组、ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组,分析ALRM联合CD146^(+)hAD-PCs对脐血CD34^(+)造血干/祖细胞的体外支持作用。共培养1,2,4周,比较扩增后细胞数量、集落形成单位数量,流式细胞仪检测细胞免疫表型,ELISA检测细胞因子水平。结果与结论:(1)ALRM质量浓度为200 mg/L时,CD146^(+)hAD-PCs活力最高,CD146^(+)hAD-PCs的G_(0)/G_(1)期细胞比例下降,S期、G_(2)/M期细胞比例上升(P<0.01)。(2)脐血CD34^(+)造血干/祖细胞数量变化:在共培养1,2,4周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组高于ALRM组(P均<0.05),在共培养2,4周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组高于CD146^(+)hAD-PCs组(P均<0.05),ALRM组与空白组随着共培养时间延长细胞数量逐渐减少。(3)集落形成能力及免疫表型分析:在共培养1,2周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组的集落形成单位数量高于CD146^(+)hAD-PCs组和ALRM组(P均<0.05);在共培养1,2,4周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组CD45^(+)、CD34^(+)CD33^(-)细胞比例高于CD146^(+)hAD-PCs组(P均<0.01)。(4)细胞因子变化:在共培养4周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组的白细胞介素2水平高于ALRM组、CD146^(+)hAD-PCs组(P<0.05);在共培养2,4周时ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组白细胞介素3水平高于CD146^(+)hAD-PCs组(P<0.05);在共培养1周时ALRM+CD146^(+)h AD-PCs组的粒细胞集落刺激因子水平高于CD146^(+)hAD-PCs组,在共培养2周时高于ALRM组、CD146^(+)hAD-PCs组(P<0.01);在共培养1,2,4周时ALRM组、ALRM+CD146^(+)hAD-PCs组的干扰素γ水平低于CD146^(+)hAD-PCs组(P<0.05)。(5)由于空白组无基质细胞,脐血CD34^(+)造血干/祖细胞在共培养1周之后就无法计数,未进行免疫表型、集落分析和细胞因子检测。(6)结果表明:ALRM可以通过促进CD146^(+)hAD-PCs增殖和细胞周期转化进而促进脐血CD34^(+)造血干/祖细胞的体外扩增,在造血干细胞移植研究方面具有重要价值。 展开更多
关键词 黑枸杞花青素 人脂肪源性管外膜细胞 造血/祖细胞 共培养 体外扩增
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人脐带血造血干/祖细胞在裸鼠体内的毒性
6
作者 陈云祥 卢觅佳 +4 位作者 吴友苹 杨红忠 郭春娟 宣尧仙 王金福 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期302-303,共2页
关键词 脐带血造血干/祖细胞 裸小鼠 急性毒性试验 致瘤试验
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铁过载对脐带血来源的造血干祖细胞及造血支持细胞的作用观察 被引量:2
7
作者 肖霞 赵明峰 +5 位作者 卢文艺 柴笑 穆娟 邓琦 李青 李玉明 《山东医药》 CAS 2013年第26期1-4,共4页
目的探讨铁过载对脐带血(UCB)来源的造血干祖细胞及造血支持细胞,尤其是间充质干细胞(MSCs)的损伤作用。方法体外培养脐带血单个核细胞(UCB-MNCs)和脐带血间充质干细胞(UCB-MSCs),向培养液中添加200μmol/L的枸橼酸铁胺(FAC)24 h建立铁... 目的探讨铁过载对脐带血(UCB)来源的造血干祖细胞及造血支持细胞,尤其是间充质干细胞(MSCs)的损伤作用。方法体外培养脐带血单个核细胞(UCB-MNCs)和脐带血间充质干细胞(UCB-MSCs),向培养液中添加200μmol/L的枸橼酸铁胺(FAC)24 h建立铁过载模型。分为MNCs-CTL组、MNCs-FAC组、MSCs-CTL组、MSCs-FAC组,每组设3个复孔,实验重复3次。检测细胞内活性氧物质(ROS)水平变化、细胞增殖、分化、凋亡以及造血支持作用。结果对UCB-MNCs进行铁过载,MNCs-FAC组造血集落形成单位(CFU-E、CFU-GM、BFU-E、CFU-mix)计数显著低于MNCs-CTL组(P<0.05),MNCs-FAC组造血干细胞(CD3+4)、髓系造血细胞(CD3+3)、红系造血细胞(GlyA+)比例及计数均显著低于MNCs-CTL组(P均<0.05);MNCs-FAC组的凋亡率高于MNCs-CTL组(P<0.05)。MSCs-FAC组的群体倍增时间明显长于MSCs-CTL组,且其凋亡率亦高于MSCs-CTL组(P<0.05)。结论铁过载可抑制造血干祖细胞的增殖、分化,诱导其凋亡,也可抑制MSCs的增殖能力,诱导其凋亡,降低其造血支持能力,且此过程中ROS升高。 展开更多
关键词 脐带 造血祖细胞 间充质细胞 铁过载 活性氧
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脐带血造血干祖细胞移植的基础 被引量:1
8
作者 唐佩弦 《基础医学与临床》 CSCD 2000年第6期1-4,共4页
Clinical analysis shows that the most cr itical factor pr edicting the stem cell engraftment is the high dose of progenitor cells infused. The number of nucleated cells in umbilical cord blood to be infused and requir... Clinical analysis shows that the most cr itical factor pr edicting the stem cell engraftment is the high dose of progenitor cells infused. The number of nucleated cells in umbilical cord blood to be infused and require d to obtain a successful engraftment is superior to 3.7×107/kg including 10 5/kg of CD34(+) cells or even more than 1×108/kg containing 106/kg of CD34( + ) cells as the most ideal dose for high engraftment. A ‘megadose’ of purified CD34(+) cells of 107/kg along with depleted CD3(+) cells from mobilized periph eral blood is recommended for allo-transplant to achieve a high rate of engraft ment and very low rate of GvHD. The problem for CD3(+) depleted allo-transplant is higher frequency of malignancy relapse. In that case, the cellular immunother apy of post-transplantation as donor-lymphocyte-infusion is efficacious. As H LA genotyping is increasingly defined to higher degree of resolution by DNA prob es, it is recommended to sheck by means of genotyping when matching for the dono r/host couples especially the unrelated couples before use. It is worthy to adop t the unrelated donors matched or mismatched for those high-risk acute leukemia patients who don’t have proper donor and need transplant urgently. 展开更多
关键词 脐带 造血祖细胞移植 CD34 树突细胞
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脐带血造血干/祖细胞生物技术药物的研究现状
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作者 王家雪 王琪 方翼 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期911-914,共4页
脐带血作为造血干/祖细胞的三大来源之一,在造血干/祖细胞移植方面具有来源广泛、配型概率高、移植后排异反应轻和复发率低等独特优势,提高了许多血液及免疫系统疾病治疗的有效率。本文对近几年脐带血造血干/祖细胞生物技术药物的临床... 脐带血作为造血干/祖细胞的三大来源之一,在造血干/祖细胞移植方面具有来源广泛、配型概率高、移植后排异反应轻和复发率低等独特优势,提高了许多血液及免疫系统疾病治疗的有效率。本文对近几年脐带血造血干/祖细胞生物技术药物的临床研究进行综述。 展开更多
关键词 脐带 造血/祖细胞 生物技术药物 临床研究
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骨髓间充质干细胞分化的成骨细胞支持脐血造血干祖细胞的研究 被引量:15
10
作者 黄晓兵 刘霆 +1 位作者 孟文彤 智伟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期552-556,共5页
本研究利用骨髓间充质干细胞诱导分化的成骨细胞构建二维培养体系,探讨其体外支持脐血干/祖细胞生存的作用。体外进行人骨髓间充质干细胞(MSC)原代培养后诱导为成骨细胞,构建二维培养体系。将免疫磁珠分选的CD34+脐血干/祖细胞接种于其... 本研究利用骨髓间充质干细胞诱导分化的成骨细胞构建二维培养体系,探讨其体外支持脐血干/祖细胞生存的作用。体外进行人骨髓间充质干细胞(MSC)原代培养后诱导为成骨细胞,构建二维培养体系。将免疫磁珠分选的CD34+脐血干/祖细胞接种于其中,在无外源性细胞因子情况下进行体外培养,进行CFU,HPP-CFU和LTC-IC测定并将其分别与MSC、成骨细胞,MSC/成骨细胞(1∶2)作为饲养细胞的二维培养体系实验结果相比较。结果发现:在所构建的造血干/祖细胞(HSPC)二维培养体系中,骨髓MSC诱导成骨细胞对于脐血造血干/祖细胞培养的支持作用显著优于其他各组培养体系,尤其对长期造血干细胞(longterm-HSC)体外生存有更为明显地支持作用。结论:骨髓间充质干细胞诱导成骨细胞构建的二维体系对于脐血干/祖细胞体外培养具有支持作用,进一步证实成骨细胞对造血干细胞生存与增殖具有重要调控作用。 展开更多
关键词 骨髓间充质细胞 成骨细胞 造血/祖细胞 二维培养体系
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凋亡在脐血造血干/祖细胞冷冻损伤中的作用及其机制研究 被引量:7
11
作者 肖娟 邹萍 +3 位作者 黄士昂 胡中波 刘凌波 游泳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期90-94,共5页
为探讨脐血造血干 /祖细胞冷冻损伤中凋亡的作用及其机制 ,应用流式细胞术检测脐血CD34+ 细胞冻存前后细胞凋亡率、线粒体膜势能和Fas抗原 ,用免疫组织化学法检测Bcl 2蛋白表达 ,用Westernblot和caspase 3蛋白活性分析检测caspase 3的表... 为探讨脐血造血干 /祖细胞冷冻损伤中凋亡的作用及其机制 ,应用流式细胞术检测脐血CD34+ 细胞冻存前后细胞凋亡率、线粒体膜势能和Fas抗原 ,用免疫组织化学法检测Bcl 2蛋白表达 ,用Westernblot和caspase 3蛋白活性分析检测caspase 3的表达 ,以甲基纤维素半固体培养进行造血祖细胞集落分析。研究结果显示 ,CD34+ 细胞在 - 196℃冻存 2周或 4周后凋亡率增加 ,电泳出现DNA梯形条带 ,CFUs分别下降了 2 5 .2 %和 30 .1%。冷冻过程中细胞内线粒体膜势能下降 ,Bcl 2蛋白表达下调 ,而Fas抗原表达无明显改变。新鲜分离的CD34+ 细胞中caspase 3以分子量为 32kD的非活性酶原形式存在 ,冷冻过程中caspase 3被激活 ,可检测到分子量为 2 0kD的裂解片段 ,cas pase 3蛋白活性分别增加了 1.2倍和 1.5倍。结论 :凋亡在脐血造血干细胞冷冻损伤中起着重要作用 ,其机制可能是通过线粒体介导的caspase依赖性途径执行 ,caspase 3是其中一个重要的效应蛋白酶。 展开更多
关键词 细胞凋亡 造血/祖细胞 CD34^+细胞 冷冻保存 Caspase-3
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妊娠期齐多夫定干预对新生儿、新生鼠造血干/祖细胞活性的影响 被引量:5
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作者 陈悦 邝晓聪 +3 位作者 李慕军 曾雅畅 罗敏玲 盘兰姣 《广西医科大学学报》 CAS 2018年第3期306-310,共5页
目的:探讨齐多夫定(AZT)对新生儿、新生鼠造血干/祖细胞活性的影响。方法:取孕期接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART,AZT+3TC+LPV/r)的HIV感染孕产妇新生儿脐带血15份,以及正常新生儿脐带血12份,分离脐血单个核细胞,流式细胞术检测CD34^+... 目的:探讨齐多夫定(AZT)对新生儿、新生鼠造血干/祖细胞活性的影响。方法:取孕期接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART,AZT+3TC+LPV/r)的HIV感染孕产妇新生儿脐带血15份,以及正常新生儿脐带血12份,分离脐血单个核细胞,流式细胞术检测CD34^+细胞比例,培养粒单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(BFU-E)以及巨核系祖细胞(CFU-Meg),计算克隆形成集落数。取脐血造血干/祖细胞、新生小鼠骨髓单个核细胞,在CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg体系和造血干/祖细胞悬浮培养体系中,进行体外AZT干预,计算成集落数及凋亡率。取Balb/c孕小鼠,进行宫内AZT(5 mg、10 mg)干预,检测新生小鼠骨髓CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg成集落数。结果:HAART暴露的脐血单个核细胞中,CD34^+造血干/祖细胞比例、CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg集落数均显著低于正常脐血(P<0.05)。脐血造血干/祖细胞和新生小鼠骨髓细胞在1.0μmol/L AZT干预下,CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg成集落数显著降低(P<0.05);AZT浓度>0.5μmol/L时,脐血造血干/祖细胞和新生小鼠骨髓细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。宫内不同剂量AZT暴露的新生小鼠骨髓CFU-GM、BFU-E和CFU-Meg集落数明显低于正常对照组(P<0.01)。结论:妊娠期AZT干预可明显抑制造血干/祖细胞的活性。 展开更多
关键词 齐多夫定 脐带 骨髓造血/祖细胞 活性 凋亡
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造血干/祖细胞的体外扩增培养研究 被引量:2
13
作者 范秀波 鲍春雨 +4 位作者 刘洋 刘天庆 孙相玉 葛丹 马学虎 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第4期870-875,共6页
利用旋转壁式生物反应器(Rotating wall vessel,RWV)体外培养脐带血干细胞,使其大量扩增。以满足临床应用对造血干/祖细胞的数量与质量要求。从脐带血分离得到的单个核细胞(Mononuclear cells,MNC)在T—flask中培养24h,之后接种... 利用旋转壁式生物反应器(Rotating wall vessel,RWV)体外培养脐带血干细胞,使其大量扩增。以满足临床应用对造血干/祖细胞的数量与质量要求。从脐带血分离得到的单个核细胞(Mononuclear cells,MNC)在T—flask中培养24h,之后接种到RWV反应器中。培养200h。每24h细胞计数,测量培养基的pH和渗透压变化;在144h和197h测CD34^+细胞含量并做CFU—GM半固体培养。有核细胞(Nucleated cells,NC)与CD34^+细胞在第197h,分别扩增了435.5±87.6倍和32.7±15.6倍,CFU—GM(Colony—forming unit—granuloeyte/maerophage)细胞扩增了21.7±4.9倍。整个培养过程中。RWV反应器中的pH和渗透压都保持在造血细胞最佳的扩增条件内,pH基本保持在7.2~7.4之间,渗透压基本保持在290-310mmol/kg之间。由于旋转壁式生物反应器(RWV)结构上的特殊性,可以保证细胞在悬浮流动的状态下生长,很好地模拟了脐带中的造血微环境。使脐带血造血干细胞在该反应器中短期内得到大量扩增。 展开更多
关键词 造血/祖细胞 旋转壁式生物反应器 脐带 体外扩增
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脐血造血干/祖细胞与脂肪干细胞共培养的作用距离研究 被引量:1
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作者 宋克东 刘天庆 +7 位作者 武爽 郭文华 郝永杰 方美云 石芳鑫 朱丽丽 马学虎 崔占峰 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第5期809-815,共7页
设计了一种细胞间距可调的trans well共培养方法,以研究脐带血来源的造血干/祖细胞(HS/PCs)和人脂肪干细胞(human-adipose derived stem cells,h-ADSCs)体外共培养时细胞间作用距离对造血干细胞扩增能力和脂肪干细胞在共培养后... 设计了一种细胞间距可调的trans well共培养方法,以研究脐带血来源的造血干/祖细胞(HS/PCs)和人脂肪干细胞(human-adipose derived stem cells,h-ADSCs)体外共培养时细胞间作用距离对造血干细胞扩增能力和脂肪干细胞在共培养后干细胞特性的影响。采用不同规格的砂纸打磨孔板的上壁面,经高精度游标卡尺测量,使两种细胞之间的有效接触间距为10--450μm不等。然后以h-ADSCs为基质细胞,分别考察HS/PCs和h-ADSCs在不同的作用距离下的共培养情况。其间每24小时对细胞进行计数,观察细胞形态。培养7天后对MNCs表面抗原CD34+、CFU-GM集落扩增倍数进行了检测;同时也对h.ADSCs表面抗原(CD13、CD29、CD34、CD44、CIM5、CD73、CD105、CD166、HLA-DR)及其多向分化潜能(成骨、成软骨、成脂肪)进行分析以鉴定其干细胞性能。结果表明,通过transwell共培养,细胞之间在作用距离为350gm时HS/PCs的扩增效果最好,其中造血MNCs扩增了15.1±0.2倍,CD34+扩增了5.0±0.1倍:扩增的h-ADSCs表达CD29、CD44、CD166,而不表达CD34、CD45,且在适当诱导条件下可以向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞分化。 展开更多
关键词 脂肪细胞 造血 祖细胞 TRANSWELL 共培养 脐带
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脐血CD34^+造血干/祖细胞基因表达图谱的研究 被引量:3
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作者 李群良 蔡海波 +1 位作者 刘启威 谭文松 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期59-62,共4页
目的通过脐血CD34+造血干/祖细胞的基因表达分析,理解造血干/祖细胞生物学特性。方法利用Min-iMACS免疫磁珠法从脐血细胞中分离CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用SMART-PCR技术从微量RNA中扩增产生足够量的cDNA用于高密度点阵膜分析检测C... 目的通过脐血CD34+造血干/祖细胞的基因表达分析,理解造血干/祖细胞生物学特性。方法利用Min-iMACS免疫磁珠法从脐血细胞中分离CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用SMART-PCR技术从微量RNA中扩增产生足够量的cDNA用于高密度点阵膜分析检测CD34+造血干/祖细胞表达的基因。结果在所检测的588个基因中,发现63个基因具有显著的表达水平,其中18个基因强表达。这些基因主要涉及造血干细胞增殖、分化、应激响应、凋亡、转录调节以及细胞周期等。结论对理解脐血干/祖细胞生物学性质以及指导造血干细胞体外培养提供了分子生物学基础。 展开更多
关键词 CD34^+造血/祖细胞 SMART—PCR 高密度点阵膜
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差异显示法分析不同生长环境中造血干/祖细胞基因表达的研究 被引量:1
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作者 李群良 刘启威 +1 位作者 蔡海波 谭文松 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期11-14,共4页
目的对比分析不同生长环境中的脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达变化。方法采用静态和动态培养系统培养脐血单个核细胞,1周后收获CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用差异显示法对比分析在不同生长环境中造血干/祖细胞基因表达的差异。结果... 目的对比分析不同生长环境中的脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达变化。方法采用静态和动态培养系统培养脐血单个核细胞,1周后收获CD34+造血干/祖细胞,提取总RNA,用差异显示法对比分析在不同生长环境中造血干/祖细胞基因表达的差异。结果在所使用的差异显示条件下,得到30个差异表达基因片段,其中一个差异表达片段为RAN基因,该基因属于RAS癌基因家族,可能与造血细胞增殖有关。结论不同生长环境影响CD34+造血干/祖细胞的基因表达,这些差异表达的基因可为优化体外培养环境,扩增造血细胞提供分子基础。 展开更多
关键词 CD34^+造血/祖细胞 培养环境 差异显示
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脐血造血干/祖细胞体外扩增后端粒酶活性的表达 被引量:1
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作者 刘会兰 孙自敏 +5 位作者 汪渊 戴海明 汪健 翟志敏 任学雷 倪世良 《安徽医科大学学报》 CAS 2003年第4期261-264,共4页
目的 探讨脐血造血干 /祖细胞在不同细胞因子支持的体外扩增过程中端粒酶活性的表达及意义。方法 应用PCR ELISA方法检测脐血造血干 /祖胞体外扩增前后的端粒酶活性、细胞扩增倍数及免疫表型的变化。结果 新分离的脐血CD34+细胞表达... 目的 探讨脐血造血干 /祖细胞在不同细胞因子支持的体外扩增过程中端粒酶活性的表达及意义。方法 应用PCR ELISA方法检测脐血造血干 /祖胞体外扩增前后的端粒酶活性、细胞扩增倍数及免疫表型的变化。结果 新分离的脐血CD34+细胞表达弱的端粒酶活性 ,体外培养 7d ,细胞端粒酶活性达最高 ,干 /祖细胞扩增倍数也明显增高 ,随着培养时间的延长 ,细胞分化成熟 ,端粒酶活性减低。结论 端粒酶的活性的升高与造血干 /祖细胞的扩增相一致 ;从临床应用价值来看 ,脐血CD 34+细胞体外扩增时间应以 7d内为宜 ;IL 3促分化能力大于G CSF。 展开更多
关键词 造血/祖细胞 体外扩增 端粒酶活性 PCR—ELISA方法
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用悬浮搅拌培养体系体外大量扩增人脐血造血干/祖细胞 被引量:1
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作者 熊福银 陈昭烈 +2 位作者 刘红 胥照平 刘兴茂 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第5期29-32,37,共5页
目的 :建立一种简便、有效的脐血造血干 /祖细胞体外大量扩增培养体系。方法 :淋巴细胞分离液分离的脐血单个核细胞在SCF ,IL - 3,IL - 6三种细胞因子的作用下 ,于悬浮搅拌培养体系中培养 ,分析其总细胞数、CFU -GM、CD34+ 细胞的扩增... 目的 :建立一种简便、有效的脐血造血干 /祖细胞体外大量扩增培养体系。方法 :淋巴细胞分离液分离的脐血单个核细胞在SCF ,IL - 3,IL - 6三种细胞因子的作用下 ,于悬浮搅拌培养体系中培养 ,分析其总细胞数、CFU -GM、CD34+ 细胞的扩增倍数。结果 :脐血单个核细胞在悬浮搅拌培养体系中培养 12天后 ,其总细胞数、CFU -GM、CD34+ 细胞的扩增倍数分别为 6 .31± 1.5 2 ,2 0 .6 3± 1.5 4和 7.11± 1.12。结论 :悬浮搅拌培养体系是脐血造血干 /祖细胞体外大量扩增的有效培养体系。 展开更多
关键词 悬浮搅拌培养体系 体外大量扩增 人脐造血/祖细胞 造血细胞密度
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脐带血造血干细胞移植 被引量:1
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作者 孙自敏 吴竞生 王祖贻 《临床输血与检验》 CAS 1999年第1期58-60,共3页
异基因骨髓移植或外周血干细胞移植(AlloBMT,Allo-PBSCT)是当前根治造血系统恶性肿瘤、骨髓衰竭性疾病、部分遗传性疾病疗效最好的方法.但最大的问题是HLA相符供体来源困难,使临床应用受到限制。脐血因含“高质量”造血干、祖细胞,... 异基因骨髓移植或外周血干细胞移植(AlloBMT,Allo-PBSCT)是当前根治造血系统恶性肿瘤、骨髓衰竭性疾病、部分遗传性疾病疗效最好的方法.但最大的问题是HLA相符供体来源困难,使临床应用受到限制。脐血因含“高质量”造血干、祖细胞,故已成为良好的干、祖细胞供源来替代骨髓进行造血干细胞移植。随着对脐血基础研究的不断深入,脐血造血干细胞移植(Cord Blood Transplantaon.CBT)的临床应用也在不断地扩大。 展开更多
关键词 临床应用 造血细胞移植 祖细胞 脐带 根治 PBSCT 限制 扩大 困难
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微囊微环境体外扩增人脐血造血干/祖细胞
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作者 李双月 王华 +4 位作者 郭昕 孙志杰 吕国军 王为 马小军 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第36期7063-7067,共5页
背景:由于单份脐血所含的造血细胞数量有限,目前只能用于儿童或低体质量成人血液病和急性辐射损伤等疾病患者,有效扩增脐血造血干/祖细胞已成为研究热点。目的:观察微囊微环境对脐血造血干/祖细胞扩增的影响,以及此过程中可否使造血干/... 背景:由于单份脐血所含的造血细胞数量有限,目前只能用于儿童或低体质量成人血液病和急性辐射损伤等疾病患者,有效扩增脐血造血干/祖细胞已成为研究热点。目的:观察微囊微环境对脐血造血干/祖细胞扩增的影响,以及此过程中可否使造血干/祖细胞在扩增的同时仍维持其未分化状态。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-06/2007-09在中国科学院大连化学物理研究所完成。材料:正常足月产新生儿脐带血由大连市妇产医院提供,提供者知情同意。方法:Ficoll法梯度分离人脐血单个核细胞,采用静电液滴法在生理条件下进行微囊化包封和体外培养。以同条件平面培养的脐血单个核细胞作为对照。主要观察指标:观察微囊化脐血细胞的生长特点及脐血细胞总数的变化;流式细胞仪检测培养过程中CD34+细胞扩增情况;应用甲基纤维素半固体培养法观察扩增细胞的集落形成能力。结果:脐血细胞在微胶囊内持续增殖,并以聚集成团的三维方式生长,两种培养方式对脐血细胞总数均无明显影响(P>0.05)。对比CD34+细胞扩增和细胞集落的生成发现,微囊化培养脐血细胞的CD34+细胞数量和集落密度均在培养第6天达到高峰,明显高于平面培养3d时所达到的峰值;之后逐渐下降,至12d后平面培养细胞的CD34+细胞和集落形成能力几乎检测不到,而此时微囊化培养的CD34+细胞数量和集落密度仍与平面培养的扩增高峰相近。结论:微囊化培养能有效扩增人脐血造血干/祖细胞,并显著减缓造血干/祖细胞的分化进程,维持其多分化潜能,提示微囊为造血干/祖细胞维持未分化状态的扩增提供了特殊的微环境。 展开更多
关键词 造血 祖细胞 扩增 微胶囊 微环境
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