猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建的调节效应

目的:人脐血造血干细胞得以移植于小鼠体内,其理论基础是放射线照射使小鼠骨髓枯竭,龛位腾出,为移植的脐血造血干细胞提供空间,而猪苓多糖是从中药猪苓中提取的多糖成分,具有免疫调节抗肿瘤作用,也是一种非T细胞促有丝分裂素,对放射线照射有一定的防护作用。观察猪苓多糖对脐血造血干细胞体外扩增及干细胞移植后免疫重建效应。方法:实验于2004-06/2006-05在兰州大学基础医学院免疫研究所完成。①实验材料:清洁级BALB/c小鼠由兰州生物制品研究所提供,8周龄,体质量约20g,雌雄各半,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。脐血样本由兰泰医院妇产科提供,产妇及家属对实验知情同意,并经医院伦理委员会批准。猪苓多糖由兰州大学第一医院提供。②实验方法:应用20,17.5,12.5,7.5mg/L猪苓多糖体外扩增培养脐血造血干细胞,并测定细胞增殖率及CD34+细胞数。将BALB/c小鼠分为正常对照组:尾静脉、腹腔注射等量生理盐水;照射空白组:3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合尾静脉、腹腔注射等量生理盐水;照射药物组:3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合尾静脉注射等量生理盐水、腹腔注射猪苓多糖;照射移植组(n=15):3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射等量生理盐水;照射移植药物组:3.5Gy经^(60)Coγ放射线照射联合脐血造血干细胞移植、腹腔注射猪苓多糖。③实验评估:观察小鼠生存状况及血常规变化,流式细胞仪测定CD3、CD4、CD8、CD19水平。结果:57只小鼠均进入结果分析。①12.5mg/L猪苓多糖增殖效率最为显著(P<0.01),流式细胞仪测定显示CD34+细胞数扩增了6.33倍。移植药物组小鼠死亡率最低,死亡高峰集中在照射移植后7~14d左右。②移植药物组小鼠血象恢复正常,并且时间明显短于其他实验组(P<0.05)。③细胞及体液免疫恢复情况,移植药物组小鼠各项指标水平与正常小鼠无差别(P>0.05),与其他各组小鼠比较,除CD4、CD19水平与照射移植小鼠无差别外均有差别(P<0.05)。结论:猪苓多糖对脐血造血干细胞有明显扩增作用,并能促进脐血造血干细胞移植小鼠免疫造血重建。

脐血造血干细胞短期冻存效果的评价

为了探讨脐血造血干细胞在液氮中短期冻存复苏后的效果 ,分别将各自为 8例冻存 6个月、1年、2年的脐血干细胞进行复苏 ,观察造血干细胞活性。有核细胞 (NC)计数采用自动血细胞分析仪测定 ,CD34+ 细胞采用流式细胞技术测定 ,用体外造血细胞培养技术分析粒 巨噬细胞集落生成单位 (CFU GM )产率 ,台盼蓝染色法判断造血细胞存活率。结果表明 :脐血造血干细胞在液氮中冻存 6个月、1年、2年后解冻 ,其有核细胞、CD34+ 细胞、细胞活率、CFU GM产率在 3个不同冻存时间的差异无显著性。结论 :脐血干细胞于液氮中短期冻存 ,其干细胞数量和细胞活性没有明显的变化 ,冻存效果较好。

简易法冻存脐血造血干细胞的研究

目的 :为脐血造血干细胞 (CBHSC)的冻存建立简便、经济且有效的方法。方法 :采用 5 %二甲基亚砜 (DMSO)加6 %羟乙基淀粉 (HES)为冷冻保护剂 ,不用程控降温装置 ,直接置 CBHSC于 - 80℃冰箱中降温 ,后分 - 80℃冰箱组和液氮组保存 1周至 3个月。结果 :冻存 3个月后 ,单个核细胞 (MNC)和粒 -单系造血祖细胞 (CFU- GM)的回收率及台盼兰拒染率在 - 80℃冰箱保存组分别为 (92 .9± 0 .8) % ,(82 .2± 19.6 ) % ,(82 .1± 1.4) % ;在液氮保存组分别为 (93.0± 1.2 ) % ,(93.6± 2 2 .2 ) % ,(85 .6± 1.5 ) %。结论 :这两种简便、经济的方法能很好地保存 CBHSC的造血潜能 ,能为脐血移植冻存CBHSC。

D183．49壳聚糖对脐血造血干细胞移植小鼠免疫重建的研究

目的:探讨D183.49壳聚糖对脐血造血干细胞的体外扩增作用及其对脐血造血干细胞移植小鼠的免疫重建并初步探索对脐血造血干细胞移植有调控作用的药物筛选方法。方法:分离脐血中单个核细胞体外扩增培养,测定细胞增殖率及CD34+细胞数。60Coγ射线亚致死量照射小鼠,尾静脉注射扩增培养后的单核细胞,每日腹腔注射D183.49壳聚糖,28天。观察记录生存状况;测定血象及CD3、CD4、CD8、CD19水平;脾脏病理切片观察。结果:①体外研究:D183.49壳聚糖10μg组体外增殖效率最显著,48小时达峰值;流式细胞仪测定CD34+细胞扩增8倍,P<0.01。②体内研究:移植药物小鼠血象恢复明显短于其他实验组;CD3、CD4、CD8、CD19水平基本恢复正常,P<0.05。小鼠脾脏病理切片显示亦恢复正常。结论:D183.49壳聚糖对脐血造血干细胞有明显扩增作用,其能够促进脐血造血干细胞移植小鼠免疫造血重建。

白消安、环磷酰胺联合抗胸腺细胞球蛋白预处理用于儿童血液病异基因脐血造血干细胞移植——附9例报告

目的:评价白消安、环磷酰胺联合抗胸腺细胞球蛋白(ATG)作为预处理方案用于儿童血液病异基因脐血造血干细胞移植的疗效。方法:对9例因血液病进行异基因脐血造血干细胞移植的患儿应用白消安、环磷酰胺联合ATG作为预处理方案。其中人类白细胞抗原(HLA)全匹配同胞异基因脐血移植(RD-UCBT)治疗β-重型珠蛋白生成障碍性贫血2例,HLA全匹配非同胞异基因脐血移植(UD-UCBT)治疗β-重型珠蛋白生成障碍性贫血1例,HLA不全匹配非同胞脐血移植治疗急性淋巴细胞性白血病(ALL)3例、急性非淋巴细胞白血病(ANNL)3例。输入脐血有核细胞(NC)中位数7.13×107/kg。结果:全供者植入8例,全供者植入率8/9。合并症:急性移植物抗宿主病(GVHD)Ⅳ度1例,Ⅲ度1例,Ⅱ度3例,Ⅰ度3例,0度1例。晚发性出血性膀胱炎4例。预处理时多伴腹泻、发热、寒颤、皮疹等反应,但未发现肝静脉栓塞综合征、间质性肺炎及继发肿瘤。结论:该预处理方案用于儿童血液病异基因脐血造血干细胞移植效果较好,且较安全。

54例非亲缘脐血造血干细胞移植回顾性分析

本研究对广州市脐血库1998年6月至2003年7月提供的54例非亲缘脐血移植进行回顾性分析,以研究 脐血移植的相关影响因素。脐血均采自广州市妇婴医院正常分娩的足月顺产孕妇,脐血分离、冻存、复温方法参照 纽约脐血库标准及相关文献;选择脐血的依据是HLA相合程度及有核细胞数量。结果表明:1998年6月至2003 年7月间,库存脐血3475份,与21家移植中心合作提供脐血99份,治疗患者85例。其中同胞脐血移植11例。时 54例非亲缘关系脐血移植病例进行统计分析显示,在54例受者中,恶性病患者43例,占79.6％,非恶性病患者11 例,占20.4％,受者中位年龄9.5(1.2-33)岁,中位体重27(10-60)公斤,TNC中位输入量6.82×107／k异,移植后 60天植入43例(ANC>500／μl的中位时间为17天),植入率为79.6％。脐血移植有核细胞重建时间与输入的有 核细胞数以及疾病类型相关,同HLA相合程度不相关。急性Ⅲ-Ⅳ度GVHD发生率为21.6％,慢性GVHD发生率 为5.4％。6例患者出现自体恢复(11.1％)。存活率42.6％。结论:非亲缘性脐血造血干细胞移植尤其在治疗小 儿白血病方面具有良好的应用前景。

HGFs联合对体外人脐血造血干细胞及SCID小鼠体内扩增作用的研究

本实验应用外源性重组人多种造血生长因子(rhHGFs)处理人HSC/SCID小鼠模型,以体外半固体培养法及FCAS检测CFU-GM、CFU-GEMM及CD34^+细胞。从而评价HGFs对受鼠体内人造血干细胞的扩增作用。结果:人脐血及骨髓MNC经孵育24小时后CD34^+细胞含量,CFU-GM、CFU-GEMM产率皆得到明显扩增(P<0.01),且脐血组优于骨髓组(P<0.01)。输脐血MNC+HGFs组小鼠骨髓MNC中人CD34^+细胞含量、CFU-GM及CFU-GEMM产率皆明显高于单输脐血MNc组(P<0.01)及输骨髓MNC+HGFs组(P<0.01),表明脐血造血干细胞对HGFs作用更敏感,扩增潜能更强。

非血缘异基因脐血造血干细胞移植现状、问题与对策

非血缘异基因脐血移植(UCBT)自1988年第一例发展至今已经经历了20年。全世界报道脐血移植的病例已经累积10 000例以上。大量的临床研究报告和统计学处理结果已有力地证实非血缘异基因脐血移植是有显效的,HLA0-1位点不合的UCBT的临床TRM、复发率和无复发生存率等数据和HLA全相合骨髓移植的相仿,但UCBT的重度GVHD发生率明显减少。已经公认:异基因脐血无疑是一个造血干细胞随时可取到的新来源,尤其当病人不能及时找到合适的HLA全相合非血缘骨髓供者,也没有单倍体相合的外周血供者时。近年来,异基因脐血移植的两大新发展,一是脐血双份移植,一是脐血移植用于非恶性的难治性疾病治疗(如重症免疫缺损、地中海贫血、骨髓衰竭综合症和代谢障碍病等等)。脐血双份移植用于大体重儿童或成人病例并获得成功报告越来越多,其发展势头超过了儿童单份UCBT病例。双份异基因脐血移植的临床成功实践给有关基础研究提出许多令人困惑而又饶有兴趣的问题,例如HLA互不相合的双份脐血在体内的'斗争'究竟是什么,为什么不破坏整个移植,反而提高了植入率?双份脐血有核细胞剂量之和并不高于单份脐血移植成功的剂量,而每单份的细胞剂量都低于单份脐血移植成功需要的剂量,这样反而提高了植入率,为什么?双份脐血之间,受者之间的HLA都互不相合,为什么受者可以在第一阶段容纳双份脐血同时植入,以后双份脐血中只有一份可长期植入,又为什么?那一份脐血细胞能优胜而长期植入的因素是什么?本文参考国际UCBT文献,就如何评价非血缘性异基因UCBT存在的问题,采取对策及其发展前景,加以讨论。

脐血造血干细胞低温保存方法的探讨

目的 探讨脐血造血细胞的低温保存方法。 方法 分别用程控降温液氮保存法、非程控降温液氮保存法和-80℃非程控降温保存法保存脐血有核细胞。结果 3种方法保存脐血有核细胞均获得较满意的结果。结论 用羟乙基淀粉 ( HES)自然沉淀法和低速离心法分离脐血有核细胞 ,获得较满意的回收率 ;用 -80℃非程控降温保存法保存脐血有核细胞 ,可降低二甲基亚砜 ( DMSO)对细胞的毒性作用 ,适用于短期保存造血细胞。

小儿非血缘脐血造血干细胞移植术后并发急性皮肤移植物抗宿主病的护理

目的探讨小儿非血缘脐血造血干细胞移植术后发生急性皮肤移植物抗宿主病(GVHD)的护理措施,寻求有效的护理方法。方法对10例小儿非血缘脐血造血干细胞移植后并发急性皮肤GVHD时皮肤不同程度损害的护理及心理护理。结果10例患儿经过正确的治疗和精心的护理,3～7d后皮疹减退,20～30d后均痊愈。结论早期明确的诊断并实施正确有效地治疗护理措施,可以降低皮肤受损的程度,使脐血造血干细胞移植顺利进行。

儿童异基因脐血造血干细胞移植期间的巨细胞病毒感染

目的 研究儿童异基因脐血造血干细胞移植期间巨细胞病毒 (CMV)感染与移植疗效的关系及治疗效果。方法 12例儿童异基因脐血造血干细胞移植患者均在移植前检测CMV -IgM ,阳性者检查CMV -Ag ,均应用阿昔洛韦口服或联合更昔洛韦静滴进行预防及治疗 ,待CMV -Ag阴转后进行移植。移植后CMV活动性感染 (CMV -IgM或CMV -Ag阳性 ) ,应用更昔洛韦或膦甲酸钠治疗。结果 10例患者移植前CMV -IgM阴性 ,2例患者移植前CMV -IgM及CMV -Ag阳性。移植后 9例在 + 4～ + 3 80d初次发现活动性CMV感染 ,+ 180d以内发生者共 8例 ,7例伴急性移植物抗宿主病(aGVHD) ,经更昔洛韦或膦甲酸钠治疗 ,7例CMV -Ag阴转 ,治疗期间未发现严重毒性。 + 180d以后伴CMV活动性感染者 5例 ,定期监测 ,未予治疗 ,暂未发现CMV相关疾病。结论 CMV感染与aGVHD发生可能有关 ;移植后应用更昔洛韦或膦甲酸钠治疗CMV感染是较安全的 ;对于经济困难的患者 ,若移植 180d后CMV -Ag阳性 。

脐血造血干细胞移植治疗小儿慢性粒细胞白血病

目的 :研究脐血造血干细胞移植治疗小儿慢性粒细胞白血病的疗效及特点。方法 :给一例 12岁男性慢性粒细胞白血病慢性期的患儿移植HLA配型基本相合的同胞脐血。预处理选用BU CY方案 (马利兰 4mg·kg- 1 × 4d ,环磷酰胺 6 0mg·kg- 1 × 2d)。预防移植物抗宿主病 (GVHD)采用环孢霉素A(CsA)。移植有核细胞数为 2 0× 10 7·kg- 1 。结果 :移植后 2 2d(+2 2d)微卫星位点分析显示移植物植入成功 ,+2 5d骨髓显示造血开始重建 ,+42d中性粒细胞 >0 .5× 10 9·L- 1 ,+91dBCR ABL融合基因表达转阴 ,且受者血型由O型转为供者血型B型。随访 15 0d ,未发生急、慢性GVHD。结论 :脐血造血干细胞移植对小儿慢性粒细胞白血病有根治性治疗作用 ,它具有GVHD发生率低、程度较轻、重建造血慢等特点。

脐血造血干细胞移植治疗儿童罕见病短期疗效评价

目的评价脐血造血干细胞移植(UCBT)治疗罕见病的短期疗效。方法回顾性分析2016年8月-2016年12月在本中心接受UCBT治疗的4例罕见病的临床资料、分子诊断及移植结果。结果 4例罕见病分别接受了HLA全相合或2~4位点不合的脐血,采用以"白消安+环磷酰胺+兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白"为基础的经典清髓预处理方案。脐血移植中位年龄10(5.7~41)个月,诊断至移植中位时间4.5(3~14)个月。输注脐血有核细胞中位数17.5(13.7~21)×10~7/kg,CD34^+细胞中位数6.9(4 5~16.5)×10~5/kg。粒细胞植活中位时间为14(10~22)d,血小板植活中位时间为42(17~67)d,移植后+1个月起短串联重复序列持续完全供者嵌合状态,无1例发生植入失败或者混合嵌合。短期随访内未发生Ⅲ~Ⅳ度急性移植物抗宿主病,巨细胞病毒感染率高达100%。移植后T淋巴细胞亚群分析CD8^+细胞绝对值中位数0.412(0.375~0.534)×10~9/L,总体有上升趋势,但未达正常标准(0.54~1.36)×10~9/L;CD4^+细胞绝对值中位数0.188(0.038~0.479)×10~9/L,远低于正常标准(0.71~1.84)×10~9/L;CD4^+/CD8^+比例明显倒置。+30d复测所有患儿致病基因消失,且原发病缓解,无1例发生治疗相关死亡。结论 UCBT治疗罕见病对原发病控制有显著疗效,但免疫重建缓慢、病毒感染率高。进一步研究需要优化与改进移植预处理方案,促进免疫重建,以期获得更好的生存及生活质量。

脐血造血干细胞移植治疗帕金森病5例综合护理干预

目的:探讨综合护理干预对脐血造血干细胞移植治疗帕金森病(PD)的作用。方法:对5例PD患者采用脐血造血干细胞移植治疗,整个过程护士要密切配合医生完成相关检查、移植和移植后支持治疗,给患者提供全方位的护理,如心理护理、并发症的预防、观察护理,健康教育等。结果:采用脐血造血干细胞治疗5例PD,患者面部表情、吞咽功能、肌张力等症状得到改善,无并发症发生,达到治疗效果。结论:综合护理干预对保证PD患者脐血造血干细胞移植成功、治疗效果满意、改善患者生活质量起着重要作用。

脐血造血干细胞移植对肿瘤化疗病人骨髓功能的影响

1目的 探讨脐血造血干细胞移植对因化疗所致骨髓功能抑制的恶性肿瘤病人骨髓造血功能重建的临床意义。 2方法 从健康人脐血中纯化制备造血干细胞 ,每例病人每天静脉输注 2× 10 9个造血干细胞 ,连续5 d.以治疗前后自身对照进行疗效评价。 3结果 治疗前白细胞计数为 (2 .78± 1.72 )× 10 9/ L,治疗后第 7天为(4.5 5± 1.0 1)× 10 9/ L,两组比较有显著性差异 (F=18.5 0 ,q=6 .95 ,P<0 .0 1) ;治疗前血红蛋白含量为 (12 1.5 6±11.2 7) g/ L,治疗后第 14天为 (130 .72± 12 .5 8) g/ L,治疗前后比较差异有极显著意义 (F=14.0 2 ,q=4.90 ,P<0 .0 1) ,且治疗后第 2 1天比治疗后第 7天增高 (F=14.0 2 ,q=6 .2 6 ,P<0 .0 1) ;治疗前血小板计数为 (192 .38±18.2 1)× 10 9/ L,治疗后第 2 1天为 (2 0 1.5 7± 17.86 )× 10 9/ L,治疗前后比较差异有极显著意义 (F=9.0 1,q=3.99,P<0 .0 1)。 4结论 脐血造血干细胞移植对于重建或改善骨髓造血功能有一定疗效。提升白细胞速度较血红蛋白及血小板为快。

人脐血造血干细胞体外诱导朗格汉斯细胞的研究

目的采用人脐血CD34+细胞,经不同细胞因子组合诱导方案体外诱导培养朗格汉斯细胞(CD1a+细胞)并观察其产量及相关表型特点。方法联合应用人淋巴细胞分离试剂和CD34+磁珠分离和筛选人脐血CD34+细胞,以5种不同的细胞因子组合诱导方案,对分选出的CD34+细胞进行体外诱导培养,观察其生长形态变化、集落的形成,并对诱导培养第12天的CD34+细胞进行CD1a、HLA-DR等LC表型分子,以及CD40、CD80等共刺激分子表型检测。筛选出最佳的朗格汉斯细胞(Langerhans cells,LC)体外诱导方案。结果流式细胞术分析5种细胞因子方案体外诱导培养LC的结果显示,方案IV、V诱导培养12 d的CD1a+细胞百分率和CD1a+细胞数量均明显多于方案Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ;方案Ⅳ诱导培养12 d的HLA-DR+细胞百分率显著高于方案Ⅴ。结论利用细胞因子组合方案IV体外诱导磁珠分选的CD34+细胞,可以获得高产量的LC细胞,为研究其功能和发生机制提供足够的细胞。