CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液病的影响

背景:单倍体造血干细胞移植与较高的植入功能不良相关,因此经常要求更高的CD34^(+)细胞数量,但现有研究关于异基因造血干细胞移植CD34+细胞剂量和研究终点关系的结论是有争议的。目的:探究CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液疾病临床结果的影响。方法:纳入2019年1月至2021年12月期间于郑州大学第一附属医院造血干细胞移植中心行单倍体造血干细胞移植的恶性血液病患者,总计135例。结合既往研究结果及移植中心经验,以CD34+细胞数5.0×10^(6)/kg为截止点,将队列分为2组。评估两组的移植物植入情况、复发率及非复发死亡率、总生存期和无进展生存期等相关临床指标。结果与结论:①CD34+细胞剂量与血小板的植入相关,高剂量组血小板的植入时间早于低剂量组(14 d vs.16 d,P=0.013)。②两组患者3年总生存期无显著差异(67.5%vs.53.8%,P=0.257);两组间的无进展生存期也无显著性差异(65.6%vs.44.2%,P=0.106),但根据疾病风险指数(DRI)进行分层分析后发现低危患者高剂量组的3年无进展生存期较低剂量组升高(72.0%vs.49.3%,P=0.036)。③高剂量组3年累积复发率小于低剂量组(16.0%vs.33.5%,P=0.05)。④两组100 d内非复发死亡率高剂量组大于低剂量组,但无显著差异(17.3%vs.6.7%,P=0.070);进行分层分析发现,高危患者中高剂量组100 d内非复发死亡率明显高于低剂量组(20.0%vs.3.3%,P=0.046)。⑤综上所述,输注>5.0×10^(6)/kg的CD34^(+)细胞可促进血小板早期植入,可改善移植中低危风险患者的3年无进展生存期,并且降低移植后累积复发率;但在高危患者中,高剂量CD34+细胞导致移植后100 d内的非复发死亡率增高,考虑可能与移植后早期重度急性移植物抗宿主病的发生增多相关,因此考虑对回输高剂量CD34+细胞的患者应加强移植物抗宿主病的监测。

不同时相移植人骨髓间充质干细胞对人脐血CD34^+细胞植入NOD/SCID小鼠的影响

为了观察不同时相移植人骨髓间充质干细胞(MSC)对脐血(UCB)CD34+细胞移植的NOD/SCID小鼠造血重建的影响,明确最佳的移植时机,将体外培养扩增的人骨髓MSC分别于c细胞移植同时、移植前48小时及移植后48小时输入经60Coγ射线照射的NOD/SCID小鼠,观察共移植后42天内小鼠外周血白细胞和血小板变化,并于移植后42天处死小鼠,用FACS检测外周血、骨髓和脾脏人源细胞含量。结果表明:(1)MSC和UCB CD34+细胞同时输注可明显降低外周血白细胞和血小板下降幅度,缩短白细胞和血小板恢复时间;二者不同时输注均不降低白细胞和血小板下降幅度,且输注UCB CD34+细胞后48小时输注MSC时外周血血小板恢复时间明显晚于同时输注者。(2)与单纯UCB CD34+细胞移植相比较,不同时相输注MSC均可促进UCB CD34+细胞的植入,三个共输注组间促进骨髓各系造血植入效应无明显差异。结论:人骨髓MSC与UCB CD34+细胞共移植时,以同时移植效果最佳,此结果为MSC的临床应用提供了实验依据。

人骨髓间充质干细胞体外支持脐血CD34^+细胞增殖的研究

为了研究人骨髓间充质干细胞(MSC)作为滋养层细胞体外支持脐血CD34+细胞扩增的作用,将MSC和胎儿骨髓来源的成纤维细胞样骨髓基质细胞系(HFCL)经60Coγ线照射后分别制备细胞滋养层,比较不同滋养层细胞和添加或不加细胞因子对脐血CD34+细胞增殖数及LTC-IC数的影响。结果表明,无论有无添加细胞因子(rhFL、rhSCF、rhTPO),HFCL滋养层组培养12天扩增细胞数明显高于MSC滋养层组,以第0天细胞数为100%(下同),有细胞因子组为(9797±361)%vs(7061±418)%,无细胞因子组为(5305±354)%vs(1992±247)%,均P<0.01。MSC滋养层组CD34+细胞扩增数与HFCL滋养层组相比无显著差异[(825±305)%vs(820±191)%,P>0.05],但在细胞因子存在时低于HFCL滋养层组[(939±212)%vs(1617±222)%,P<0.01]。MSC滋养层组维持脐血中LTC-IC的能力明显优于HFCL滋养层组[第5周CFU-GM数(129.95±8.73)个/105接种细胞数vs(89.81±10.29)个/105接种细胞数,P<0.05];细胞因子存在时,其作用更为明显[第5周CFU-GM数(192.93±4.95)个/105接种细胞数vs(90.47±14.28)个/105接种细胞数,P<0.01]。MSC与HFCL按一定比例混合,可提高扩增效率。当MSC与HFCL之比为4∶1时,集落形成数量最高,达(186.89±11.11)个/105接种细胞数,明显高于比例为3∶2(131.45±13.02)个/105接种细胞数和二者单用组[前者(138.92±14.84)个/105接种细胞数,后者(64.63±6.11)个/105接种细胞数;均P<0.01]。结论:MSC维持脐血中LTC-IC集落形成的能力优于基质细胞系HFCL,HFCL支持脐血CD34+细胞的增殖能力优于MSC,MSC加上适量HFCL可显著提高CD34+细胞扩增效率。

GDNF基因真核表达载体的构建及其在脐血CD34^+干细胞的表达

目的构建人胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因的新型真核表达载体,为进行GDNF基因修饰的脐血干细胞移植治疗脑梗死奠定基础。方法将GDNF基因克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达载体中,进行酶切鉴定及DNA测序分析,并将携带有GDNF基因的该真核表达载体,通过脂质体介导,转染人脐血CD34+细胞,荧光显微镜、ELISA检测转基因脐血干细胞GDNF的表达与释放。结果经双酶切鉴定和测序证实已将GDNF基因DNA片段正确插入到真核表达载体中,并能在脐血CD34+干细胞中表达、分泌有活性的GDNF。结论成功构建pEGFP/GDNF基因新型真核表达载体。

人CD34^+脐血干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

目的探讨人脐血来源的CD34+干细胞治疗脊髓损伤的可行性,为脊髓功能障碍性疾病的临床治疗打下基础。方法用密度梯度离心及免疫磁珠法分离出人CD34+脐血干细胞,在含有B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人重组干细胞因子(rhSCF)的营养液中培养,用核荧光染色剂Hoechst33258标记细胞;制作大鼠脊髓横断模型,造成大鼠下肢瘫痪,在脊髓损伤3d移植荧光标记的CD34+脐血干细胞,观察移植后的动物行为变化、脊髓组织形态学变化等。结果脊髓损伤大鼠移植CD34+脐血干细胞5~6d可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复,10~15d后可出现爬行,3~4周后后肢活动活跃;对照组瘫痪的肢体未见恢复。脊髓移植区肉眼可见有增生的组织充填,镜下有大量神经胶质原纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶阳性的细胞,移植区Hoechst33258荧光标记阳性细胞增生。结论移植的CD34+脐血干细胞可在移植部位增殖,并使脊髓横断大鼠运动功能恢复,有望成为治疗脊髓损伤的有效手段。

人脐带间充质干细胞对脐血CD34^+细胞在NOD/SCID小鼠体内造血重建的影响

目的探讨人脐带间充质干细胞对脐血CD34^+细胞在NOD/SCID小鼠体内造血重建的影响。方法将3.5×10~5个脐血CD34^+细胞单独(单移植组)或与5.0×10~6个人脐带间充质干细胞共同(共移植组)输入经^(137)Cs 3.0Gy照射后的NOD/SCID小鼠体内,观察移植后6周内小鼠外周血象的变化情况。于移植后第6周处死小鼠,采用流式细胞术检测小鼠骨髓、脾脏及外周血人源细胞(hCD45^+)含量,并分别检测小鼠骨髓中人源淋巴系(CD3/CD19)、粒系(CD33)、单核系(CD14)、血小板(CD61)、红系(CD235a)等各系血细胞比例,比较间充质干细胞共移植对CD34^+细胞植入率的影响。结果移植后3周,两组小鼠外周血象开始有不同程度恢复;移植后6周,共移植组外周血白细胞和血小板计数均已达高峰,明显高于单移植组(P<0.05),两组小鼠的红细胞计数差异无统计学意义(P>0.05)。移植后6周,共移植组骨髓及外周血中人源细胞hCD45^+CD34^+比例分别为(42.66±2.57)%和(4.74±1.02)%,明显高于单移植组的(25.27±1.67)%和(1.19±0.54)%(P=0.006)。移植后6周,共移植组小鼠骨髓内的CD19^+、CD33^+、CD14^+、CD61^+和CD235a^+细胞比例均明显高于单移植组(P<0.05),CD3^+T淋巴细胞比例明显低于单移植组(P=0.003);CD19^+ B淋巴细胞得到优势扩增,明显高于其他各系血细胞比例(P<0.05)。结论脐带间充质干细胞与脐血CD34^+细胞共移植可促进造血干细胞的植入,缩短CD34^+细胞移植后造血恢复时间。

脐血CD34^+造血干细胞来源的树突状细胞体外培养体系的优化

目的:优化脐血CD34+造血干细胞(HPC)来源的树突状细胞(DCs)诱导培养方法,为体外研究CD34+HPC诱导产生功能性树突状细胞(DCs)的影响因素奠定基础。方法:淋巴细胞分离液(Ficoll)分离获得脐血单个核细胞,免疫磁珠阳性分选CD34+HPC,并用流式细胞术鉴定CD34+HPC纯度;比较GT(GM-CSF+TNF-α)方案和GTI(GM-CSF+TNF-α+IL-4)方案及GTI方案中TNF-α和IL-4不同时段加入对诱导培养产生的DCs成熟的影响;通过激光共聚焦显微镜观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞表型及3H-TdR检测DCs激发异体T细胞增殖能力。结果:免疫磁珠阳性分选CD34+HPC纯度可达90%以上;将CD34+HPC按GT方案和GTI方案进行培养,均可诱导产生DCs,但经GT方案诱导的DCsCD14表达较高,CD80、CD86、CD83、CD1a表达不如经GTI方案诱导的高;而GTI方案中,以TNF-α0h加入、IL-448h加入诱导培养的DCs各表型表达相对较佳,并具有激发异体T细胞增殖能力。结论:CD34+HPC经过合适的培养体系能够诱导分化为功能性DCs,以GM-CSF与TNF-α0h加入、IL-448h加入的GM-CSF+TNF-α+IL-4方案更为可取。

脐血CD 34^+造血干细胞体外扩增的研究

目的：探讨在体外液体培养中，多种细胞因子联合应用对脐血 Ｃ Ｄ３４＋ 造血细胞的扩增作用。方法：用 Ｉｓｏｌｅｘ ５０ 免疫磁珠法分离纯化脐血 Ｃ Ｄ３４＋ 细胞，在液体培养中，经不同细胞因子组合的诱导，检测有核细胞和集落形成细胞（ Ｃ Ｆ Ｃ）的增殖倍数。结果：干细胞生长因子、白细胞介素 Ｉ Ｌ３、 Ｉ Ｌ６、粒细胞集落刺激因子和红细胞生成素５ 种细胞因子联合对脐血 Ｃ Ｄ３４＋ 细胞扩增效果最好，其增殖高峰在第３～４ 周，单个核细胞数和 Ｃ Ｆ Ｕ Ｇ Ｅ Ｍ Ｍ 增殖倍数最高分别达３２６８±１０２４ 倍和８５±３１ 倍。结论：以干细胞生长因子、 Ｉ Ｌ３、 Ｉ Ｌ６ 为主的不同细胞因子组合，能维持脐血 Ｃ Ｄ３４＋ 细胞在体外长期造血达６ 周，使 Ｃ Ｆ Ｃｓ 大量扩增。

胎儿骨髓间质干细胞与细胞因子对脐血CD34^+细胞扩增作用

目的 探讨胎儿骨髓间质干细胞对CD34+ 细胞体外扩增的造血支持作用。方法 体外分离、纯化胎儿骨髓间质干细胞 ;Mini MACS免疫磁珠分选 3份脐血CD34+ 细胞 ;建立胎儿骨髓间质干细胞与CD34+ 细胞共培养体系 :第 1组为单独CD34+细胞培养 ,第 2组为胎儿骨髓间质干细胞 +CD34+ 细胞共培养 ,第 3组为细胞因子 (干细胞因子 ,白细胞介素 3,Flt3配体 ,血小板生成素 ) +CD34+ 细胞共培养 ,第 4组为胎儿骨髓间质干细胞 +细胞因子 +CD34+ 细胞共培养。用流式细胞仪检测不同培养时间的CD34+ 细胞。结果 胎儿骨髓间质干细胞表达CD2 9,CD4 4 ;免疫磁珠分选CD34+ 细胞的平均纯度为 97.4 % ;胎儿骨髓间质干细胞 +CD34+ 细胞共培养 2 8d ,有核CD34+ 细胞仍占有核细胞的 6 .4 3% ;CD34+ 细胞在胎儿骨髓间质干细胞、细胞因子作用下培养 2 8d ,有核细胞总数、CD34+ 细胞数分别被扩增 1.6 5× 10 5倍、788倍。结论 胎儿骨髓间质干细胞可有效扩增脐血造血干 /祖细胞。

肿瘤坏死因子α和白细胞介素4对脐血CD34^+造血干细胞来源的树突状细胞体外培养体系的影响(英文)

背景:造血干细胞是构筑免疫系统的最早的细胞,能分化为多种细胞,其中具有包括免疫应答调控树突状细胞。树突状细胞的诱导培养因前体细胞来源不同,所采用的细胞因子,及最佳的细胞因子配伍、应用顺序、实验室培养条件亦不相同,树突状细胞的发育、各种表型的表达及成熟度也不尽相同。目的:观察肿瘤坏死因子α和白细胞介素4对脐血CD34+造血干细胞来源的树突状细胞诱导培养体系的影响,探寻该培养体系优化方法。设计、时间及地点:观察性实验,于2005-03/11在南京医科大学微生物与免疫学实验室完成。材料:健康新生儿脐血为南京市八一医院产妇同意捐赠。CD34单克隆抗体-磁珠分离系统为德国MiltenyiBiotec公司产品;重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、重组人白细胞介素4和重组人肿瘤坏死因子α为美国PeproTech公司产品。方法:淋巴细胞分离液分离获得脐血单个核细胞,免疫磁珠阳性分选CD34+造血干细胞,并用流式细胞术鉴定CD34+造血干细胞纯度;比较GT(GM-CSF+肿瘤坏死因子α)方案和GTI(GM-CSF+肿瘤坏死因子α+白细胞介素4)方案及GTI方案中肿瘤坏死因子α和白细胞介素4不同时段加入对诱导培养产生的树突状细胞成熟的影响;通过激光共聚焦显微镜观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞表型及3H-TdR检测树突状细胞激发异体T细胞增殖能力。结果:免疫磁珠阳性分选CD34+造血干细胞纯度可达90%以上。将CD34+造血干细胞按GT方案和GTI方案进行培养,均可诱导产生树突状细胞,CD34的阳性表达率逐渐下降,HLA-DR的表达下降(P<0.05),树突状细胞的相关分化抗原CD80,CD86,CD83和CD1a的表达均相应增加,培养13~15d的细胞各表型表达较7~9d,10~12d充分。但经GT方案诱导的树突状细胞CD14表达较高,CD80,CD86,CD83,CD1a表达不如经GTI方案诱导的高;而GTI方案中,以肿瘤坏死因子α0h、白细胞介素448h加入诱导培养的树突状细胞各表型表达相对较佳,其细胞表达CD80,CD86均较其他组高,尤以CD86表达为著,并具有激发异体T细胞增殖能力。结论:CD34+造血干细胞经过合适的培养体系能够诱导分化为功能性树突状细胞,以GM-CSF与肿瘤坏死因子α0h加入、白细胞介素448h加入的GM-CSF+肿瘤坏死因子α+白细胞介素4方案更为可取。

间充质干细胞及其培养上清与融冻产物对脐血CD34^+细胞扩增及分化的作用

【目的】探讨人骨髓间充质干细胞(MSC)及其培养上清、融冻产物对脐血CD34+细胞扩增及分化的作用。【方法】分离纯化人骨髓MSC,收集纯化三代的MSC培养上清,采用反复冻融法获得MSC融冻产物,采用免疫磁珠分选系统纯化脐血CD34+细胞。实验分为4组,分别为含MSC滋养层组、MSC上清组、MSC融冻产物组及单纯造血生长因子(HGFs)对照组。流式细胞仪检测人脐血CD34+细胞在这四种培养体系中第6天和第12天有核细胞数及CD34+、CD34+CD38-、CD41+、CD19+、CD3+细胞含量。【结果】①MSC滋养层组对脐血有核细胞和对脐血CD34+、CD34+CD38-的扩增能力最强,MSC培养上清组和MSC滋养层相比具有类似的作用,但其作用强度减弱(P<0.05)。②MSC培养上清和MSC均具有抑制脐血CD34+细胞分化为CD3+和CD19+细胞的作用,差异无显著性(P>0.05)。③MSC培养上清和MSC均具有促进脐血CD34+细胞向CD41+细胞分化的作用,MSC滋养层的作用强于MSC培养上清(P<0.05)。④MSC融冻产物已完全丧失对脐血CD34+细胞扩增和分化作用,与单纯因子对照组相似(P>0.05)。【结论】MSC培养上清对脐血CD34+、CD34+CD38-细胞均具有扩增作用,而且可促进脐血CD34+细胞向CD41+细胞分化。

抗CD40抗体联合诱导人脐血CD34^+造血干细胞向DC2分化的作用

目的探讨从脐血CD34+造血细胞诱导DC2的方法及CD40分子在DC2分化诱导中的作用。方法运用磁珠从脐血中分离出CD34+造血干细胞,以rhIL3(10ngmL)、rhFlt3L(100ngmL)和rhGMCSF(100ngmL)诱导其向DC2分化,采用流式细胞仪分析DC2表型,并观察抗人CD40单克隆抗体诱导DC2分化成熟的作用。结果人脐血CD34+造血细胞在rhIL3、rhFlt3L和rhGMCSF联合诱导培养12d,获得具有DC2样(淋巴样DC)形态的细胞,然后分别加入rhIL3+抗人CD40mAb(Ⅰ组)或rhIL3+TNFα(Ⅱ组)诱导DC2的分化成熟,流式细胞仪分析细胞表型,发现Ⅰ组和Ⅱ组Lineage-(CD3、CD14、CD16、CD19、CD56)CD123+细胞的HLADR、CD83、CD86、CD80表达率分别为88.78%、37.38%、32.83%和99.08%;78.87%、32.29%、29.57%和98.86%。结论体外联合多种细胞因子从CD34+造血细胞成功地诱导出富集DC2表型的细胞,抗人CD40mAb可以促进DC2的分化成熟。

bFGF诱导脐血CD_(34)^+干细胞基因表达变化的研究

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外诱导脐血CD34+造血干细胞分化的基因表达变化,理解脐血CD34+造血干细胞的生物学特性,为体外诱导分化和临床应用打下基础。方法利用MiniMACS免疫磁珠法从脐静脉血单个核细胞中分离出CD34+造血干细胞,经含干细胞因子(SCF)、bFGF、B27的DMEM/F12细胞营养液培养10～15d,提取培养前后细胞总RNA,利用Oligo GEArray芯片和GEArray表达分析软件进行芯片数据分析。结果在所检测的263个基因中,发现10个基因培养后比培养前显著上调,20个基因显著下调。这些基因主要涉及干细胞特异性标志、细胞周期、干细胞分化标志、以及与干细胞相关的信号转导、细胞因子及其受体等。结论bFGF通过一些特定基因的变化影响脐血CD34+干细胞增殖分化,有助于从基因水平理解bFGF对CD34+干细胞增殖分化的影响,促进bFGF诱导的CD34+细胞在临床上的应用。

不同标记法及去红细胞法对检测微量脐血CD34^+造血干细胞含量的影响

目的 采用 ISHAGE(international society of hematotherapy and graft engineering)法和常用的 CD34+造血干细胞流式检测方法对同一脐血样品进行比较实验 ,确定更适用于微量脐血 CD34+造血干细胞含量检测的方法。方法 分别采用 ISHAGE造血干细胞计数协会推荐方法、低渗 NH4 Cl去红细胞 CD4 5 / CD34双色标记法 (NH4 Cl双标法 )、Optilyse C溶血剂去红细胞 CD34单色标记法 (Optilyse C单标法 )、低渗 NH4 Cl去红细胞 CD34单色标记法 (NH4 Cl单标法 )、羟乙基淀粉沉淀去红细胞 CD4 5 / CD34双色标记法 (HES双标法 )检测脐血造血干细胞含量 ,并比较不同方法测得数据的差异。结果 8份脐血标本用 ISHAGE方法测得 CD34+造血干细胞含量的中位数为 0 .2 78% ,NH4 Cl双标法测得结果为 0 .2 97% ,与 ISHAGE方法相比差异无显著性。用 HES双标、Optilyse C单标法和 NH4 Cl单标法测得的结果分别为 5 .715 % ,0 .391%和 0 .74 1% ,与ISHAGE方法相比差异有显著性。结论 ISHAGE方法是一种公认的准确性高 ,重复性好的检测造血干细胞方法。Optilyse C单标法、NH4 Cl单标法和 HES双标法测定结果比实际值偏高。

GM-CSF诱导人脐血CD34^+造血干细胞上CXCR3的表达

目的 研究GM CSF诱导人脐血CD34 + 造血干细胞上CXCR3的表达。方法 采用流式细胞仪 ,实时定量逆转录PCR(RT PCR)分析 ,及其配体γIP 10和Mig诱导的趋化和粘附作用分析。结果 CXCR3也表达在受GM CSF刺激后的CD34 + 造血干细胞上 ,但它在新鲜分离的CD34 + 造血干细胞上不表达。应用实时定量逆转录PCR技术检测新鲜分离的CD34 + 造血干细胞有较低水平的CXCR3mRNA表达 ,而GM CSF能上调CXCR3的表达。用抗CXCR3单克隆抗体 (mAb)能阻断γIP 10和Mig诱导的造血干细胞趋化作用 ,证实γIP 10和Mig是通过CXCR3而发挥作用的。γIP 10和Mig通过CXCR3不仅可诱导趋化作用而且还可诱导GM CSF刺激后的CD34 + 造血干细胞粘附和聚集作用 ,而抗CXCR3mAb能阻断γIP 10和Mig这些功能 ,但不能阻断SDF 1α的作用。γIP 10和Mig能提高整合素(CD49a和CD49b)的表达 ,这在GM CSF刺激后CD34 + 造血干细胞的粘附作用中发挥重要作用。结论 在细胞因子 /趋化因子微环境中 ,CXCR3 γIP 10和 Mig受体配体复合物及GM CSF对CD34 + 造血干细胞分化成淋巴干细胞和髓系干细胞以及后来的免疫 /炎症细胞的生理和病理过程起特别重要作用。这些过程包括CD34 + 造血干细胞的迁移、再定位、分化和成熟。

1例自体纯化CD_(34)^+细胞联合脐血间充质干细胞移植治疗类风湿性关节炎病人的护理

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种病因不明的慢性、消耗性、反复发作、以关节症状为主的自身免疫性疾病.典型的临床表现为反复发作的对称多发性小关节炎,以手、腕、足、膝等关节受累较明显,早期可有红、肿、热、痛和关节功能障碍,晚期关节可出现不同程度的强直和畸形,并有骨腐蚀和骨骼肌的萎缩,是一种致残率较高的疾病[1].间充质干细胞（MSCs）来源于早期的中胚层和外胚层,最早在骨髓中发现,具有多向分化的潜能、造血支持和促进干细胞的植入、免疫调控和自我扩增等特点[2].Gao等[3]报道了利用MSCs构建骨、软骨联合移植物的可行性,证实了在固体支撑物中加入MSCs可以促进缺损软骨的修复.Bouffi等[4]研究表明,通过注射自体或异体的间充质干细胞治疗该病取得了较好疗效.2011年9月-2012年1月我科采用自体纯化CD34＋细胞联合脐血间充质干细胞移植治疗1例经激素及免疫抑制剂抗风湿治疗效果不佳的类风湿性关节炎病人,通过精心护理,取得了较好的近期疗效.现报告如下.

脐带间充质干细胞对脐血CD_(34)^+祖细胞免疫反应的影响

目的探讨脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)是否能有效抑制脐血CD34+祖细胞的免疫反应,影响反应过程中免疫调节细胞因子的分泌。方法从脐带中分离、培养MSCs,观察其生长形态,流式细胞术检测表面标志;将不同数量的UC-MSCs加入脐血CD34+祖细胞、外周血单个核细胞(PBMC)共培养体系中作为实验组,不加UC-MSCs的CD34+祖细胞、PBMC共培养体系为阴性对照;另设用Transwell将UC-MSCs和脐血CD34+祖细胞、外周血单个核细胞共培养体系分隔培养,分别收集各组上清液,ELISA检测IFN-γ和IL-10水平。结果UC-MSCs高表达CD105、CD90、CD29、CD49;不表达CD40、CD80、CD86、HLA-DR;加UC-MSCs组与阴性对照组相比,IFN-γ的分泌量减少(19.30±0.78)vs(27.00±1.11),(P<0.05);IL-10的分泌量增多(50.28±1.29)vs(31.68±3.08),(P<0.05),而且具有数量依赖性;Transwell分隔培养组与阴性对照组相比,IFN-γ的分泌量减少(18.33±0.47)vs(27.00±1.11),(P<0.05);IL-10的分泌量增多(48.47±1.18)vs(31.68±3.08),(P<0.05);与接触培养组相比,IFN-γ的分泌量增多(18.33±0.47)vs(7.14±0.13),(P<0.05),IL-10的分泌量减少(85.19±2.36)vs(48.47±1.18),(P<0.05)。结论UC-MSCs能抑制脐血CD34+祖细胞的免疫反应中IFN-γ的分泌,同时促进IL-10分泌,并且这种作用部分依赖于细胞间的相互接触。UC-MSCs和CD34+祖细胞共移植可作为干细胞移植治疗缺血性心肌病的有效方式。

成人骨髓间充质干细胞对脐血CD34^+细胞的体外扩增作用

目的 :探讨骨髓间充质干细胞 (MSCS)对脐血CD34+细胞体外扩增作用 .方法 :分离培养成人MSCS 作为滋养层 ,联合SCF ,IL 11和GM CSF分别组成对脐血CD34+ 细胞的不同扩增体系 ,培养 3wk后观察脐血有核细胞、CFCs以及CD34+ 细胞扩增倍数的变化 .结果 :MSCS 联合细胞因子组较其他组培养体系对有核细胞总数、CFCs含量及CD34+ 细胞含量均具有明显的扩增作用 ,分别扩增了 114 .2± 2 .4 ,4 0 .5± 8.6 ,11.3± 0 .4倍 .结论 :成人MSCS 协同其他细胞因子可增强脐血CD34+ 细胞的体外扩增作用 .

CD34^+脐血造血干细胞的体外培养及其生物学特性研究

目的:建立稳定的CD34+脐血造血干细胞(CD34+UHSC)的体外分离、培养扩增体系,并研究其生物学特性。方法:密度梯度离心及免疫磁珠法从脐血中分离CD34+UH-SC,加入细胞因子SCF、IL-3和IL-6进行体外培养扩增,观察细胞形态及其生长特性。应用流式细胞仪测定细胞周期及其CD34分子的表达,研究其增殖、生长和分化特性。以RT-PCR法检测干细胞高表达基因ABCG2的转录表达。结果:在体外培养条件下,CD34+UHSC悬浮生长,约1周后易形成克隆球,增殖旺盛,呈现指数生长期;细胞增殖周期随体外培养时间延长而逐渐趋缓;CD34+UHSC表面标志亦随体外培养时间延长而表达下降,同时ABCG2基因的表达亦逐步下调。结论:体外获得纯化的CD34+UHSC,生长稳定、增殖能力强,但随体外培养时间的延长,CD34+分子标志逐步丢失,提示在增殖旺盛的指数生长期7～21d内最适用于各项相关实验研究。

EPO上调人CD34^＋脐血干细胞CD26的表达

目的研究EPO对人CD34+脐血干细胞表面CD26表达的影响。方法应用流式细胞仪法检测经MACS-CD34+免疫磁珠分选并采用EPO处理后培养的人CD34+脐血干细胞,通过与酶底物反应检测人CD34+脐血造血干细胞表面CD26的表达情况。结果与对照组相比,经EPO 100 U/ml和EPO 200 U/ml 18h培养后的CD34+脐血造血干细胞群中CD26+细胞比例明显上升,其酶活性亦明显升高。结论EPO可上调CD34+脐血干细胞表面CD26的表达并增强其生物学功能。