蜕皮甾酮对TNF所致脐静脉内皮细胞损伤的保护作用的初步观察

目的 观察肿瘤坏死因子 (TNF)对体外培养的脐静脉内皮细胞 (HUVEC)分泌功能及能量代谢的影响 ,及应用植物药物成分蜕皮甾酮 (EDS)进行防治的效果。方法 ①MTT法检测TNF对培养内皮细胞琥珀酸脱氢酶活性的影响。②内皮细胞培养上清液ET、NO、MDA、LDH、SOD测定。③采用反相高效液相色谱分析法测定内皮细胞ATP、ADP、AMP及能荷。结果 TNF与内皮细胞孵育后低浓度、早期内皮细胞被激活 ,随着TNF浓度增高MTT明显降低 ;TNF刺激后培养上清液ET、MDA、LDH、NO明显升高 ,EDS治疗后降低。TNF低浓度刺激VEC培养上清液SOD明显降低 ,EDS治疗后SOD升高 ;TNF同一浓度刺激后 ,随刺激时间延长HUVEC能量负荷降低 ,与正常比较 12h后明显降低 ,而用EDS治疗后各时相点能量负荷明显增加。结论 TNF在无血清状态下刺激后 ,培养HUVECs分泌功能、能量代谢出现紊乱 ,EDS治疗后上述紊乱得到一定程度的改善 ;提示TNF对体外培养的HUVECs可以直接损伤 ,EDS有一定的抗损伤作用。

川芎嗪调控PKCβ_1减轻波动高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的实验研究

目的观察川芎嗪对波动高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤及蛋白激酶Cβ_1(PKCβ_1)表达的影响。方法分离、鉴定并培养人脐静脉内皮细胞,实验共分为7组:正常低糖(N)组、稳定高糖(W)组、波动高糖(B)组、稳定高糖+LY333531(WL)组、波动高糖+LY333531(BL)组、波动高糖+川芎嗪(TMP)组和波动高糖+二甲双胍(MH)组。8d后检测各组细胞凋亡率、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)和总抗氧化能力(T-AOC)水平及细胞PKCβ_1蛋白表达情况。结果与N组相比,W组和B组HUVECs总凋亡率、TNF-α、sICAM-1、AOPP含量、PKCβ_1蛋白表达均显著升高(P<0.01),T-AOC显著降低(P<0.01),且W组和B组间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。应用TMP和MH干预具有与LY333531阻断相似的效应,可显著降低细胞的总凋亡率、TNF-α、sICAM-1、AOPP含量及PKCβ_1蛋白表达(P<0.01),同时可显著升高T-AOC水平(P<0.01)。结论波动性高糖状态具有显著加重人脐静脉内皮细胞损伤的效应,且该效应与PKCβ_1表达水平显著升高密切相关;川芎嗪对波动性高血糖状态下的血管内皮功能具有明显的保护作用,其作用机制与其显著抑制PKCβ_1的过表达进而减轻氧化应激和炎症反应密切相关。

叶酸对同型半胱氨酸所致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:通过培养的人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC),研究不同浓度的同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞损伤的影响,并观察叶酸的干预是否能够削弱Hcy对HUVEC的细胞毒作用。方法:将培养的HUVEC细胞分成8组,将其与不同浓度的Hcy(100,200,500,1000,2000μmol/L)和叶酸(100μmol/L)共同培养20h,分别利用MTT、苏木精-伊红染色和流式细胞仪技术观察HUVEC细胞的生长及凋亡情况。结果:HUVEC与不同浓度的Hcy培养20h后,细胞活力A值呈现剂量依赖性的降低,超过500μmol/L的Hcy对HUVEC已经形成了显著的抑制和毒性效应,滞留于G1期的细胞比例增加,由于对照组的56.3%上升至60.0%(Hcy100μmol/L),63.1%(Hcy200μmol/L),64.4%(Hcy1000μmol/L),73.9%(Hcy2000μmol/L);100μmol/L的叶酸能够在一定程度上抑制Hcy诱导凋亡的作用。结论:高浓度的Hcy具有内皮细胞毒作用,可以抑制细胞的生长并促进其凋亡,而叶酸则具有保护性。

辛伐他汀纳米粒降低脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的初步研究

脓毒症是导致危重症的常见原因，它严重威胁着人类的健康。在脓毒症发生起始，内皮细胞极易成为炎症因子的攻击目标，出现内皮细胞骨架改变、细胞间链接破坏，甚至凋亡和坏死，而内皮细胞损伤同时又加剧了炎症反应。如此恶性循环，导致多脏器功能不全发生，内皮细胞功能障碍是脓毒症发展恶化的中心环节，而内皮细胞保护是目前脓毒症研究的重点。

血小板活化因子对培养人脐静脉血管内皮细胞损伤作用的探讨

目的 :观察在培养条件下血小板活化因子 (PAF)能否直接损伤原代人血管内皮细胞 (HVEC)和ECV - 30 4细胞系。方法 :利用光镜和结晶紫比色的方法 ,观察HVEC、ECV - 30 4细胞系与PAF孵育前后形态和生物活性变化。结果 :PAF与HVEC孵育 30min即发生细胞形态改变 ,生物活性则未见显著下降 ,与ECV - 30 4细胞系孵育后的细胞形态和生物活性未见明显变化。结论 :在培养条件下PAF可致HVEC损伤 ,对ECV - 30 4细胞系则未见明显损伤。

人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗细胞模型的建立及胰岛素抵抗脐静脉内皮细胞内皮功能损伤机制的研究

目的分析高浓度胰岛素对血管内皮细胞急性时相蛋白表达的影响,为探讨胰岛素抵抗对血管内细胞损伤的可能机制及筛选改善胰岛素抵抗（IR）药物提供依据;方法采用高浓度胰岛素体外诱导培养法建立人脐静脉内皮细胞IR模型,应用ELISA法检测C-反应蛋白以及血浆vWF 因子的表达,应用化学比色法检测培养液中 NO的浓度,应用流式细胞仪检测各组细胞胰岛素受体的表达;结果当胰岛素浓度为10U/L 时,C-反应蛋白以及vWF 表达上升,而细胞活性下降,NO产生减少,胰岛素受体表达降低,但均不具有统计学意义.随着胰岛素浓度的增加,C-反应蛋白以及vWF 表达明显增加,而细胞活性、NO的产生以及胰岛素受体表达则明显下降,P〈0.05,具有统计学意义;结论胰岛素抵抗能够降低血管内皮细胞炎性蛋白的表达平衡,进而降低了血管内皮生物学的活性,证明其在血管疾病的发生、发展过程中有着重要的病理意义.

氯离子通道-3在黄芪甲苷降低高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤中的作用

目的探究氯离子通道-3(CIC-3)在黄芪甲苷(ASI)降低高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤中的作用。方法体外培养HUVECs,使用MTT实验检测不同剂量ASI对HUVECs的影响;并将HUVECs分为正常对照组、高糖损伤组、低剂量黄芪甲苷组、中剂量黄芪甲苷组和高剂量黄芪甲苷组;通过高糖诱导制成HUVECs损伤模型;以高糖损伤模型为基础,低、中、高剂量黄芪甲苷组再分别加入1、2、4μmol/ml的ASI处理;采用流式细胞仪检测HUVEC的凋亡率;采用蛋白质印迹实验(WB)检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况;采用WB和实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测黄芪甲苷处理24 h和48 h后氯离子通道(CIC3)蛋白和mRNA表达情况。结果随ASI使用剂量增加,HUVECs的存活率升高(P<0.05),但培养24h和培养48h存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,高糖损伤组细胞凋亡率和Bcl-2蛋白相对表达水平、24h和48hCIC3蛋白和mRNA相对表达水平均显著升高,Bax蛋白相对表达水平显著降低(均P<0.05);与高糖损伤组比较,低、中、高剂量黄芪甲苷组细胞凋亡率和Bcl-2蛋白相对表达水平、24h和48hCIC3蛋白和mRNA相对表达水平均升高,且呈浓度依赖性(均P<0.05);与高糖损伤组比较,低、中、高剂量黄芪甲苷组Bax蛋白相对表达水平均降低,且随着剂量增加显著降低(均P<0.05);正常对照组、高糖损伤组、低剂量黄芪甲苷组培养24h和培养48hCIC3蛋白和mRNA相对表达水平均差异均无统计学意义(均P>0.05);中剂量黄芪甲苷组和高剂量黄芪甲苷组培养48hCIC3蛋白和mRNA相对表达水平均高于培养24h(均P<0.05)。结论 ASI可以通过抑制CIC-3的表达,调节HUVECs的凋亡并缓解其损伤。

白藜芦醇联合间充质干细胞改善损伤内皮细胞的代谢记忆效应

背景:白藜芦醇联合间充质干细胞是否能够进一步改善高糖诱导内皮细胞产生的不良记忆目前鲜有报道。目的:验证不同浓度的白藜芦醇联合间充质干细胞对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤代谢记忆效应的保护作用。方法:将人脐静脉内皮细胞分为10组:正常对照组、甘露醇对照组、高糖组、白藜芦醇低剂量组(0.1μmol/L)、白藜芦醇中剂量组(1μmol/L)、白藜芦醇高剂量组(10μmol/L)、干细胞组、白藜芦醇低剂量+干细胞组、白藜芦醇中剂量+干细胞组及白藜芦醇高剂量+干细胞组。分别于5.5 mmol/L葡萄糖培养第1,4,6天收集细胞培养上清液、提取细胞核蛋白,应用ELISA法检测细胞培养上清中血管细胞黏附分子1、单核细胞趋化蛋白1、纤溶酶原激活剂抑制剂1的表达水平,以Western blot法检测细胞内核因子κB的蛋白水平。结果与结论:与正常对照组相比,高糖可诱导内皮细胞核因子κB表达上调,同时血管细胞黏附分子1、单核细胞趋化蛋白1和纤溶酶原激活剂抑制剂1水平升高,且在糖浓度恢复正常后仍持续上升。与高糖组相比,白藜芦醇及其联合干细胞干预后可以使内皮细胞核因子κB表达及血管细胞黏附分子1、单核细胞趋化蛋白1和纤溶酶原激活剂抑制剂1水平呈白藜芦醇剂量依赖性降低。干细胞组上述指标与高糖组比差异无显著性意义,甘露醇组与正常对照组相比差异无显著性意义。结果提示白藜芦醇可能通过核因子κB通路降低血管细胞黏附分子1、单核细胞趋化蛋白1和纤溶酶原激活剂抑制剂1水平,改善高糖代谢记忆效应介导的内皮细胞损伤。而间充质干细胞发挥内皮细胞保护作用可能不仅有赖于核因子κB通路。