LINC00926通过募集ELAVL1促进低氧诱导的人脐静脉血管内皮细胞焦亡

目的探讨长链非编码RNA LINC00926对低氧诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)焦亡的调控作用及分子机制。方法低氧(5%O_(2))处理HUVECs细胞体外模拟冠心病。实验将HUVECs细胞分为常氧对照组(Normal)、转染空载质粒组(OENC)、转染LINC00926过表达质粒组(OE-LINC00926)、低氧处理组(Hypoxia)、Hypoxia+OE-NC对照组、Hypoxia+OELINC00926组、Hypoxia+si-Ctrl对照组、Hypoxia+si-ELAVL1组、Hypoxia+si-ELAVL1+OE-LINC00926组。应用RT-qPCR及Western blot检测LINC00926和ELAVL1的表达情况。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,ELISA法检测炎性因子IL-1β水平,Western blot检测焦亡相关蛋白caspase1、cleaved-caspase1和NLRP3的蛋白表达水平。应用RIP实验验证LINC00926与ELAVL1的结合情况。结果与Normal组相比,低氧处理上调了HUVECs中LINC00926的mRNA表达和ELAVL1的蛋白表达(P<0.05),但不影响ELAVL1的mRNA表达。与Normal组相比,过表达LINC00926可抑制HUVECs细胞增殖(P<0.05),提高了HUVECs中炎性因子IL-1β水平(P<0.05)以及焦亡相关蛋白(caspase1、cleaved-caspase1和NLRP3)的表达(P<0.05)。在低氧处理的HUVECs中,过表达LINC00926可以进一步提高低氧处理上调的ELAVL1蛋白水平。RIP实验结果证实了LINC00926与ELAVL1蛋白的结合关系。在低氧诱导的HUVECs中,敲低ELAVL1可降低IL-1β水平和焦亡相关蛋白(caspase1、cleavedcaspase1、NLRP3)的表达(P<0.05),而LINC00926过表达可部分逆转敲低ELAVL1的影响。结论在低氧处理的HUVECs中,LINC00926通过募集ELAVL1促进HUVECs细胞焦亡。

三棱、莪术含药血清对培养的人脐静脉血管内皮细胞生长和VEGF表达的影响

目的探讨三棱、莪术含药血清对血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)诱导的血管内皮细胞增殖和VEGF表达影响。方法以三棱、莪术含药血清作用于VEGF诱导的人脐静脉血管内皮细胞(humanumbili-calveinendothelialcell-1,HUVEC-1),倒置相差显微镜观察细胞形态学改变,MTT法观察细胞增殖情况,Westernblot和RT-PCR方法分别检测内皮细胞VEGF蛋白和mRNA的表达。结果三棱、莪术5.0g·kg-1·d-1、2·5g·kg-1·d-1大鼠含药血清可使正常人脐静脉血管内皮细胞排列紊乱,明显梭形化。5.0g·kg-1·d-1大鼠10%、5%、2.5%含药血清组和2.5g·kg-1·d-1大鼠10%含药血清组HUVEC-1细胞的增殖显著低于空白血清相同浓度组(P<0·05)。5.0g·kg-1·d-1、2.5g·kg-1·d-1大鼠5%的含药血清使HUVEC-1细胞VEGF蛋白、VEGFmRNA表达均显著降低。结论三棱、莪术含药血清可抑制VEGF诱导的血管内皮细胞增殖,其机制与抑制血管内皮生长因子表达密切相关。

黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞的增殖作用

目的 观察黄芪注射液对人血管内皮细胞的作用。方法 黄芪注射液与人脐静脉血管内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcellline ,ECV30 4 )共同培养后 ,采用MTT法及形态学方法观察黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用。结果人脐静脉血管内皮细胞在黄芪注射液浓度为 3 .12 5mg时产生增殖效应 ,增殖率为 3 .10 % ;浓度为 12 5mg时 ,增殖率为12 . 10 % (P <0 .0 5 ) ;浓度为 5 0mg时 ,增殖率为 4 8 .31% (P <0 . 0 1)。结论 黄芪注射液对人脐静脉血管内皮细胞无细胞毒性 ,有显著的增殖效应 ,且具有剂量依赖性 ,成正相关。

六堡茶多糖理化性质、体外抗氧化及其对人脐静脉血管内皮细胞的保护作用

以六堡茶为原料,利用水提醇沉法制得茶多糖粗品,经脱蛋白纯化后用30%、50%、70%的乙醇溶液进行分段,得到3种六堡茶多糖LTPS-30、LTPS-50和LTPS-70,并分析了其化学组成、分子量分布等理化性质;以自由基清除法(ABTS)和铁离子还原法(FRAP)评价其抗氧化活性;并以Na2S2O3损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为模型,探讨了它们对HUVEC氧化损伤的保护作用。结果表明,3种六堡茶多糖样品均为主要含有2个组分的非均一酸性多糖,平均分子量和总糖含量均为LTPS-70<LTPS-50<LTPS-30;而在蛋白质和总酚含量及两种抗氧化体系下的抗氧化活力均为LTPS-70>LTPS-50>LTPS-30,且LTPS-70表现出最强的细胞保护作用。说明茶多糖粗品经70%乙醇纯化后具有较强的生物活性,具有良好的应用前景。

前列腺素E_2对大鼠巨噬细胞株NR8383合成血管内皮生长因子促进人脐静脉血管内皮细胞成管、迁移的影响

目的探究前列腺素E_2(PGE_2)对大鼠巨噬细胞株NR8383细胞合成血管内皮生长因子(VEGF)的调控作用以及对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)趋化成管的影响。方法分别采用0.1 nmol/L PGE_2、1 nmol/L PGE_2、1 nmol/L PGE_2+10 nmol/L EP2受体抑制剂AH6809+10 nmol/L EP4受体抑制剂AH23848处理的NR8383细胞作为各实验组,选择未经PGE2以及其特异性受体抑制剂处理的NR8383细胞作为对照组,采用Western blot和qPCR方法检测各组NR8383细胞内VEGF蛋白以及m RNA的表达水平;收集以上各处理组的细胞培养上清液分别刺激HUVECs,运用TRANSWELL小室、Matrigel胶细胞成管实验等实验方法,观察PGE_2调控巨噬细胞对HUVEC迁移效应和成管能力的影响。结果随着NR8383细胞培养液中加入PGE_2浓度增高,其VEGF蛋白表达和VEGF mRNA的表达水平显著升高(P<0.05);0.1 nmol/L、1 nmol/L PGE_2处理过的NR8383细胞培养上清液可以显著增加HUVEC细胞形成的小管面积,形成小管面积随着PGE_2处理浓度的增加而增加(P<0.05);HUVECs的迁移运动也随着PGE_2处理浓度的升高不同程度的增强,HUVECs趋化的数量显著升高(P<0.05);研究发现PGE_2特异性的EP2/EP4受体拮抗剂AH6809/AH23848,可以显著抑制PGE_2增强NR8383细胞内VEGF mRNAs表达的作用并且也显著抑制PGE2增强NR8383细胞促进HUVECs成管和趋化能力的效应(P<0.05)。结论 PGE2可以通过作用NR8383细胞表面对应的EP2/EP4受体调控VEGF的合成,促进HUVEC趋化和成管效应。

川芎嗪抑制肿瘤坏死因子α诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子表达的机制研究

目的探讨川芎嗪(TMP)抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子(TF)表达的胞内信号转导机制。方法胰酶消化法分离培养人脐静脉血管内皮细胞,以一期凝固法、ELISA、RT-PCR分别测总的细胞促凝活性、TF抗原和mRNA;放射免疫法测PKC(蛋白激酶C)活性;免疫组织化学染色观察NF-κB的变化。结果TMP和Staurosporine(Sta)可显著减少PMA与TNFα刺激的TF活性、抗原及mRNA的表达(P<0.01);PMA、TNFα使胞浆中PKC活性明显降低(P<0.05),胞膜PKC活性显著增高(P<0.01),而TMP与Sta均能降低胞膜PKC活性(P>0.05);TNFα引起内皮细胞NF-κB从胞浆移入核内,TMP及吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)均可抑制NF-κB的活化。结论TNFα诱导HUVEC TF的表达中,PKC及NF-κB的活化发挥着重要的作用;TMP通过影响PKC途径及NF-κB的活化而抑制TNFα诱导TF的表达。

麦冬正丁醇提取部位调控人脐静脉血管内皮细胞凋亡相关基因与信号转导通路研究

目的:研究麦冬正丁醇提取部位对H_2O_2造模的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)凋亡相关基因和信号转导通路调控,探讨其对HUVEC保护作用的分子机制。方法:用H_2O_2构建HUVEC凋亡模型,运用MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测凋亡相关基因Bc1-2表达,免疫组化方法观察NF-kB表达情况。结果:麦冬正丁醇提取部位可以减少H_2O_2造模的HUVEC的凋亡,促进Bc1-2的表达,并能降低NF-kB的表达。结论:麦冬正丁醇提取部位可以通过NF-kB路径,促进凋亡抑制基因Bc1-2的表达,从而起到抗HUVEC凋亡的作用。

高糖环境下趋化因子8促进间充质干细胞旁分泌功能提高人脐静脉血管内皮细胞归巢

背景:趋化因子具有促进干细胞旁分泌血管活性因子,加速血管新生的重要作用。目的:观察高糖环境下,趋化因子8(CXCL-8)刺激的人骨髓间充质干细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞归巢的影响,并分析Sonic Hedgehog信号通路在CXCL-8刺激骨髓间充质干细胞的机制。方法:(1)细胞体外实验:在细胞高糖环境模型下,将质量浓度100μg/L趋化因子8刺激的间充质干细胞设为高糖CXCL-8组,预先以5μmol/L的shh抑制剂辛基马来酰亚胺处理45 min,再用质量浓度100μg/L CXCL-8刺激间充质干细胞者为高糖Shh抑制剂组,高糖环境下培养的间充质干细胞为高糖对照组。提取各组细胞上清液为条件培养基培养人脐静脉血管内皮细胞,其分组按条件培养基而定。使用CCK8细胞增殖实验、细胞划痕实验或Transwell细胞小室实验分别观察各条件培养基(CM)对人脐静脉血管内皮细胞增殖、凋亡、趋化等能力的影响;(2)动物体内实验:建立C57BL/6J小鼠糖尿病皮肤溃疡模型,分别以各组间充质干细胞条件培养基进行处理,验证CXCL-8刺激的间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞归巢和溃疡愈合的影响。结果与结论:(1)体外实验结果:与高糖对照条件培养基相比,高糖CXCL-8组条件培养基能够促进人脐静脉血管内皮细胞增殖、降低人脐静脉血管内皮细胞凋亡率,并且细胞划痕面积闭合率、细胞迁移率均明显提高(P<0.01),高糖CXCL-8组条件培养基中血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子水平明显提高(P<0.01);与高糖CXCL-8组相比,高糖Shh抑制剂组上述结果指标呈反向变化(P<0.01);(2)体内实验结果:与Shh抑制剂-CM组和间充质干细胞-CM组相比,CXCL-8-CM组糖尿病皮肤溃疡的愈合效果和绿色荧光蛋白标记的人脐静脉血管内皮细胞数均显著升高(P<0.01);(3)结果提示,在高糖环境下,CXCL-8能够通过Shh通路,刺激间充质干细胞旁分泌血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子,提高了对脐静脉血管内皮细胞招募的能力。

高糖环境对人脐静脉血管内皮细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的探讨高糖环境对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响,及其与Caspase-3表达的相关性。方法将培养成功的HUVEC以不同浓度的葡萄糖培养48 h,TUNEL法观察细胞凋亡情况;流式细胞仪(Annexin V-FITC及PI双荧光)检测细胞存活、凋亡和坏死情况;Western blotting法观察细胞中活性Caspase-3的表达。结果光学显微镜观察高糖组(33 mmol/L)内凋亡细胞明显多于正常糖浓度组(5.5 mmol/L);随机选择3个视野,高糖组TUNEL阳性的细胞数多于正常糖浓度组。流式细胞仪结果显示:正常糖浓度组细胞凋亡率为(4.10±2.16)%,细胞坏死率为(0.47±0.05)%,存活细胞率为(94.44±2.13)%;高糖组细胞凋亡率为(16.13±1.51)%,细胞坏死率为(1.09±0.27)%,存活细胞率为(81.99±1.13)%,凋亡细胞百分率与正常糖浓度组相比差异有统计学意义(P<0.05);Western blotting法显示正常糖浓度组Caspase-3/β-actin为0.062±0.005,高糖组Caspase-3/β-actin为0.125±0.05,差异有统计学意义(P<0.05),高糖组活性Caspase-3表达量增强。结论高糖环境培养下的HUVEC凋亡增加,可能与活性Caspase-3表达增强有关。

绿豆皮黄酮对H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究绿豆皮黄酮对H2O2诱导损伤人脐静脉血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法:用体积分数70%的乙醇提取绿豆皮中黄酮,采用高效液相色谱法测定其有效成分;通过H2O2诱导HUVEC细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型。试验被分为正常对照组、H2O2组、维生素C组、绿豆皮黄酮低、中、高剂量组(20,60,80μg/m L),通过MTT法测定细胞增殖能力,生化比色法检测各组细胞及培养液中的超氧化物酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量。结果:H2O2呈剂量依赖性降低内皮细胞活力,并引起细胞凋亡。其中1 000μmol/L H2O2处理HUVEC后,与正常组相比,细胞存活率明显受到抑制,而绿豆皮各剂量组能显著提高细胞和细胞培养液中的GSH-Px、SOD、GSH活性,降低MDA含量,同时降低细胞中LDH活性并增强细胞培养液中的LDH含量。结论:绿豆皮黄酮能抑制H2O2诱导的内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,其机制是:绿豆皮黄酮抑制损伤细胞脂质过氧化,提高机体抗氧化酶活性,清除自由基。

PI3K/Akt抑制剂CCT128930抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖与血管生成的实验研究

目的探讨一类新的PI3K/Akt抑制剂CCT128930对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖与血管生成的影响。方法采用MTT法检测CCT128930对HUVEC存活的影响;流式细胞术分析细胞周期变化;AnnexinⅤ-FITC试剂盒检测细胞凋亡;体外小管形成实验观察CCT128930对HUVEC体外小管形成的影响;免疫印迹法检测蛋白表达水平。结果CCT128930可通过阻滞细胞于G1期而抑制HUVEC的增殖,且抑制作用呈剂量依赖性,但对HUVEC的凋亡无影响;HUVEC经CCT128930处理后,体外小管形成能力受到明显抑制;低浓度的CCT128930抑制内皮细胞中VEGF的表达,但对Akt的磷酸化水平无影响。结论 CCT128930能够抑制HUVEC的增殖与血管生成,其抑制血管生成活性可能与其调控VEGF的表达水平相关。

过表达人端粒酶逆转录酶促进人脐静脉血管内皮细胞增殖

人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶的催化亚基,专司在染色体末端添加端粒重复序列,与维持端粒长度与功能有关.为探索hTERT的生物学功能,本研究以人脐静脉血管内皮细胞(hUVEC)为研究对象,观察了hTERT基因过表达对hUVEC细胞增殖作用和端粒酶活性的影响.利用构建的pEGFP-C1-hTERT融合基因表达载体转染hUVEC,结果显示,转染后的细胞可见GFP表达,提示转染细胞有GFP-hTERT融合蛋白表达.RT-PCR、免疫组化和TRAP-PCR-ELISA法显示,与未转染细胞比较,转染细胞的hTERT mRNA、蛋白质表达水平明显升高,端粒酶活性明显增强.MTT实验显示,转染hTERT基因的细胞在72 h后细胞增殖速率明显大于未转染细胞及空载体转染细胞.结果提示,过表达hTERT基因可提高血管内皮细胞端粒酶的活性和增殖能力.实验结果证明,端粒酶活性与细胞增殖活性密切相关.

血小板活化因子对培养人脐静脉血管内皮细胞损伤作用的探讨

目的 :观察在培养条件下血小板活化因子 (PAF)能否直接损伤原代人血管内皮细胞 (HVEC)和ECV - 30 4细胞系。方法 :利用光镜和结晶紫比色的方法 ,观察HVEC、ECV - 30 4细胞系与PAF孵育前后形态和生物活性变化。结果 :PAF与HVEC孵育 30min即发生细胞形态改变 ,生物活性则未见显著下降 ,与ECV - 30 4细胞系孵育后的细胞形态和生物活性未见明显变化。结论 :在培养条件下PAF可致HVEC损伤 ,对ECV - 30 4细胞系则未见明显损伤。

鞣花酸体外抗人脐静脉血管内皮细胞血管生成

目的观察鞣花酸体外抗人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管生成作用,以及对PDGFB,JAK/STAT表达的影响。方法采用SRB法、划痕法及Matrigel体外成管实验分别考察鞣花酸对HUVEC增殖、迁移及小管形成的影响;采用逆转录-聚合酶链(RT-PCR)法、酶联免疫法(ELISA)法、免疫印迹法(Western blot)分别观察鞣花酸对HUVEC细胞PDGFB mRNA表达、对细胞上清中PDGFB分泌及对细胞中PDGFB、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平的影响。结果鞣花酸能显著抑制HUVEC增殖、迁移和小管形成(P<0.01或P<0.05),其增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性,迁移和小管形成抑制作用呈剂量依赖性。同时,鞣花酸能显著降低PDGFB基因和蛋白表达水平(P<0.01或P<0.05),降低STAT3蛋白的磷酸化水平(P<0.01或P<0.05),而对STAT3蛋白表达总量无变化。结论鞣花酸可能通过下调内皮细胞中PDGFB的表达并进一步抑制下游STAT3蛋白磷酸化来抑制血管生成。

活化蛋白C对脂多糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响研究

目的:观察不同剂量活化蛋白C(APC)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡的作用。方法:将培养成功的HUVECs通过LPS(1 mg/L)孵育诱导细胞凋亡模型,并给予APC(10μg/L)或APC(50μg/L)建立药物治疗组,同时设立正常对照细胞组和单独LPS(1 mg/L)诱导细胞凋亡组。应用电镜观察细胞超微结构;DNA ladder与TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡情况;Annexin-Ⅴ/PI双标记行流式细胞仪测定定量观察细胞凋亡率。同时采用MTT法测定细胞存活率和Western blotting测定增殖细胞核抗原(PCNA),以观察细胞的增殖变化。结果:通过细胞形态,DNA ladder和TUNEL荧光染色发现单独LPS诱导组的细胞可见明显的凋亡现象,而通过APC治疗组的细胞凋亡改变明显减轻和细胞凋亡率下降,同时细胞存活率和PCNA表达率增高,尤其在50μg/L时,与单独LPS诱导组细胞比较差异显著(P<0.05)。结论:APC拮抗LPS诱导的血管内皮细胞凋亡并促进细胞的增殖,发挥保护细胞的作用。

雌激素对人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响

目的目前认为内质网是心血管疾病治疗的新靶点,其应激反应在高血压心血管重塑中具有重要作用。文中通过建立衣霉素及二硫苏糖醇诱导人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡模型,探讨17-β雌二醇对衣霉素/二硫苏糖醇诱导HUVECs ERS凋亡的影响。方法实验前期已确定10μmol/L衣霉素处理细胞10 h或2 mmol/L二硫苏糖醇处理细胞8 h为诱导细胞ERS凋亡最佳浓度和时间。浓度为10-8mol/L的17-β雌二醇对ERS的保护作用最明显。根据是否用衣霉素/二硫苏糖醇,17-β雌二醇,雌激素受体拮抗剂(ICI182,780和G15)处理进行如下分组:1空白对照A、B组;2衣霉素/二硫苏糖醇组;3衣霉素/二硫苏糖醇+17-β雌二醇组;4衣霉素/二硫苏糖醇+17-β雌二醇+ICI组;5衣霉素/二硫苏糖醇+17-β雌二醇+G15组;6衣霉素/二硫苏糖醇+17-β雌二醇+ICI+G15组。Western blot检测ERS诱导凋亡的标志分子GRP78、剪切的caspase 12及CHOP的表达,及Hochest染色检测凋亡细胞数的变化。结果与空白对照A、B组比较,衣霉素/二硫苏糖醇组GRP78、caspase-12和CHOP的表达升高(P<0.05);与衣霉素组比较,衣霉素+17-β雌二醇组GRP78、caspase-12和CHOP的表达均下降(6.80±1.07 vs4.01±0.46,1.54±0.32 vs 0.88±0.10,1.91±0.37 vs 0.91±0.02,P<0.05);与衣霉素+17-β雌二醇组比较,衣霉素+17-β雌二醇+ICI组CHOP表达升高(0.91±0.02 vs 0.96±0.02,P<0.05),衣霉素+17-β雌二醇+G15组GRP78、caspase-12表达升高(4.01±0.46 vs 5.25±0.80,0.88±0.10 vs 1.02±0.07,P<0.05),衣霉素+17-β雌二醇+ICI+G15组GRP78、caspase-12和CHOP的表达升高(P<0.05)。与二硫苏糖醇组比较,二硫苏糖醇+17-β雌二醇组GRP78和CHOP表达均下降(1.81±0.08 vs 1.30±0.14,1.00±0.13 vs 0.51±0.01,P<0.05);与二硫苏糖醇+17-β雌二醇组比较,二硫苏糖醇+17-β雌二醇+ICI组GRP78和CHOP的表达下降(P<0.05),二硫苏糖醇+17-β雌二醇+G15组GRP78表达升高(P<0.05),二硫苏糖醇+17-β雌二醇+ICI+G15组GRP78、caspase-12和CHOP的表达升高(P<0.05)。Hochest染色检测细胞凋亡数目的变化与Western blot的结果一致。结论 17-β雌二醇可抑制衣霉素/二硫苏糖醇诱导的人脐静脉内皮细胞ERS引起的凋亡,雌激素通过调节雌激素受体保持ERS的稳态,进而保护心血管。

苦参碱对U937细胞及人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察苦参碱（Matrine，Mat）对U937细胞及人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）增殖的影响。方法：采用体外培养技术，通过细胞形态、MTT实验、细胞周期测定观察Mat对U937细胞及HUVECs增殖的影响。结果：Mat（0．2～0．5mg／mL）作用24h后对U937细胞均有增殖抑制作用（P〈0．05或P〈0．01），在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性，其作用U937细胞48h的半数抑制浓度（IC50）约为0．4mg／mL，有效作用时间为1d；Mat（0．1～0．5mg／mL）作用24、48、72h后对HUVECs增殖无明显抑制作用，亦无剂量和时间依赖性（P〉0．05）；Mat（0．2～0．5mg／mL）作用U937细胞48h后，S期细胞比例增加，细胞发生S期阻滞（P〈0．05或P〈0．01）；Mat（0．1～0．5mg／mL）作用HUVECs 48h后，对细胞周期无明显影响（P〉0．05）。结论：一定浓度Mat对U937细胞具有增殖抑制作用，呈时间-剂量依赖关系。Mat在一定浓度和时间下不能抑制HUVECs增殖，对其细胞周期亦无明显影响。

中波紫外线辐照对人脐静脉血管内皮细胞JAK-STAT信号通路和IL-6、IL-8表达的影响

为探究JAK-STAT信号通路与炎症因子白细胞介素6、8(interleukn6、8,IL-6、IL-8)是否参与中波紫外线诱导人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的辐射损伤,使用不同剂量中波紫外线(10、20、40 J/m^2)照射血管内皮细胞,照射后24 h通过实时荧光定量PCR检测IL-6 mRNA和IL-8mRNA的表达水平;Western-blot检测JAK1、JAK2、STAT1、STAT3和p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3的表达情况。结果发现,与对照组(0 J/m^2)相比,细胞经不同剂量紫外线(10、20、40 J/m^2)照射24 h后,IL-6 mRNA和IL-8 mRNA表达水平均升高,且与受照剂量呈剂量依赖性;JAK1、STAT1、p-JAK1、p-STAT1、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均升高,且上调程度与受照剂量呈剂量依赖性;JAK2和STAT3蛋白表达变化不明显。结果提示,JAK-STAT信号通路及炎症因子IL-6、IL-8参与中波紫外线照射HUVECs细胞损伤的调控。

同型半胱氨酸对人脐静脉血管内皮细胞tPA及PAI-1基因表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对纤溶系统的影响,观察Hcy在转录水平对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)表达组织型纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI1)的影响。方法将体外培养的HUVEC分为生理浓度(10μmol/LHcy)组,病理浓度(50、200、500μmol/L)Hcy组及单纯培养基组(0μmol/LHcy),培养24h后,提取RNA,反转录聚合酶链反应分析(RTPCR)法分析各组tPA及PAI1基因表达水平。结果500μmol/LHcy组与10μmol/LHcy组相比,tPAmRNA基因表达明显下调(P<0.05),PAI1mRNA表达则明显上调(P<0.05)。而与单纯培养基组相比,10μmol/LHcy组tPAmRNA表达明显增高(P<0.05)。结论生理浓度Hcy可以增加纤溶系统活性,减少血栓性疾病的发生。高Hcy(病理浓度)则抑制纤溶系统活性,促进缺血性心脑血管疾病的发生。

牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞表达IL-8和MCP-1 mRNA的影响

目的 :在转录水平上观察牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞 (humanumbilicalveinen dothelialcells,HUVECs)表达白细胞介素 - 8(IL - 8)和单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP - 1)的影响。方法 :厌氧培养Pg ,原代培养HUVECs,RNA抽提 ,逆转录 -聚合酶链式反应 (RT -PCR)和mRNA比色定量法检测IL - 8和MCP - 1基因表达。结果 :HUVECs基础表达IL - 8和MCP - 1mRNA ,Pg以剂量依赖的方式增强IL - 8和MCP - 1mRNA的表达 ,Pg感染后 1hIL - 8mRNA开始增高 ,3h达到高峰 ,并持续到 5h。而MCP - 1的mRNA从Pg感染后 1h开始增高 ,3h达到高峰 ,5h出现下降趋势。结论 :Pg在转录水平上增强HUVECs表达IL - 8和MCP - 1,这种上调作用可能是牙周病早期基因水平调控炎症细胞募集的重要因素 ,可能是牙周疾病的炎症反应和免疫反应中主要调控机制之一。