接种密度对人脐静脉间充质干细胞原代培养的影响

目的：探讨不同接种密度对人脐静脉间充质干细胞（hUV-MSCs）原代培养的影响,从而确定原代培养hUV-MSCs的适宜条件。方法：分离人脐静脉内皮及内皮下层细胞,按不同接种密度分组进行原代培养,记录原代培养时间,然后进行传代和成骨诱导培养,并检测细胞钙结节的表达情况。结果：hUV-MSCs原代分离培养消化30min,种植细胞密度为5×10^5×10^6/cm^2的方法较合理。经化学药物（如地塞米松、β-甘油磷酸、维生素C）成骨诱导后,可形成钙结节。结论：合理hUV-MSCs原代培养方法,可以快速获得最大量的自体种子细胞,从而为组织工程化骨的体外构建创造条件。

血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞生长增殖的影响

背景:在体外构建组织工程材料的过程中,快速获得足够数量且纯度高的种子细胞极为重要,但目前人脐静脉间充质干细胞原代培养的增殖率仍较低。目的:观察血管内皮细胞生长因子对人脐静脉间充质干细胞原代生长、增殖的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/07在辽宁医学院解剖学实验室完成。材料:正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带20条,由锦州市凌河区妇幼保健院及辽宁医学院附属第一医院提供。方法:采用胶原酶消化法分离人脐静脉间充质干细胞,以1×108L-1的密度接种于24孔培养板,设立2组,实验组加入150g/L血管内皮细胞生长因子,对照组不加入任何细胞因子。主要观察指标:观察细胞形态变化,MTT法检测细胞生长曲线,免疫细胞化学法鉴定细胞CD166的表达。结果:接种后6h细胞开始贴壁,48h后细胞完全贴壁生长,出现呈椭圆形、多角形的内皮细胞,以及呈梭形的成纤维样细胞,有的形成漩涡状生长集落;原代培养1周后细胞以梭形为主;传代后24h细胞基本完成贴壁,48h细胞开始分裂增殖,5～7d可见多核的成纤维样细胞贴壁,呈长杆状、三角形、梭形等。与对照组比较,实验组细胞生长状态较好,增殖较快,单位时间内获得的细胞数量明显增加(t=2.235,P<0.05),CD166阳性细胞率显著升高(t=1.638,P<0.01)。结论:血管内皮细胞生长因子可促进人脐静脉间充质干细胞贴壁,且更有利于间充质干细胞的增殖和纯化。

酒精对人脐静脉间充质干细胞治疗肾虚血瘀型骨质疏松症大鼠的影响

目的:探讨酒精对人脐静脉间充质干细胞(hUV-MSCs)治疗肾虚血瘀型骨质疏松症(OP)大鼠的影响。方法:取雄性SD大鼠30只,采用酒精腹腔注射法制备肾虚血瘀型OP模型,造模成功后将SD大鼠随机分为酒精组、治疗组和对照组,每组10只。酒精组给予酒精[浓度20%,10 ml/(kg·次),1次/周]治疗,对照组在酒精组基础上给予hUVMSCs(1次/周,10^(7)个细胞/次)治疗,治疗组停止酒精注射但给予hUV-MSCs(1次/周,10^(7)个细胞/次)治疗,取SD大鼠10只腹腔注射法生理盐水作为假手术组,给予生理盐水[1次/周,10 ml/(kg·次)]治疗,均连续治疗8周。HE染色检测大鼠骨组织病理损伤(骨小梁面积),TUNEL染色检测观察骨组织细胞凋亡(TUNEL阳性细胞数),µCT检测骨体积分数(BVF)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁分离距离(Tb.Sp),ELISA检测血清碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)水平。结果:酒精组、对照组、治疗组大鼠骨组织骨小梁面积、BVF、Tb.Th均低于假手术组(P<0.05),骨组织TUNEL阳性细胞数、Tb.Sp及血清ALP、TRAP水平均高于假手术组(P<0.05);治疗组与对照组大鼠骨组织骨小梁面积、BVF、Tb.Th均高于酒精组(P<0.05),骨组织TUNEL阳性细胞数、Tb.Sp及血清ALP、TRAP水平均低于酒精组(P<0.05);治疗组大鼠骨组织骨小梁面积、BVF、Tb.Th均高于对照组,骨组织TUNEL阳性细胞数、Tb.Sp及血清ALP、TRAP水平均低于对照组(P<0.05)。结论:酒精能明显降低hUV-MSCs治疗肾虚血瘀型OP大鼠的效果。