艾灸抑制NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡减轻脑缺血再灌注损伤

背景:研究发现,艾灸能抑制脑缺血/再灌注损伤大鼠血清中的炎症因子,对抗氧化应激,抑制细胞凋亡,有效减轻脑缺血/再灌注损伤。目的:观察艾灸干预不同时间后脑缺血/再灌注损伤模型大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体、半胱氨酸天冬氨酸酶1(cysteine aspartase,caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、消皮素D(GSDMD)及白细胞介素1β、白细胞介素18表达的变化,并探讨其作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组9只和造模组36只,造模组制备大脑中动脉栓塞大鼠模型。造模成功后将造模组大鼠进一步分为模型组、艾灸10 min组、艾灸15 min组、艾灸30 min组,每组9只。艾灸10 min、15 min和30 min组大鼠分别给予艾灸悬灸“百会、大椎、足三里”穴,均干预1次/d,共干预7 d。采用LONGA法评估大鼠神经功能缺损情况,TTC法观察脑组织梗死情况,苏木精-伊红染色观察脑组织病理改变,ELISA法检测血清中白细胞介素1β、白细胞介素18水平,免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法测定脑皮质缺血区组织NLRP3、caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白、消皮素D蛋白的表达。结果与结论:(1)与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P <0.01),与模型组比较,艾灸各组大鼠神经功能缺损评分明显降低(P <0.01);(2)与假手术组比较,模型组大鼠脑梗死体积明显增大(P <0.01),与模型组比较,艾灸各组大鼠脑梗死体积明显减少(P <0.01),艾灸30 min组脑梗死体积最小(P <0.05);(3)与模型组比较,艾灸各组大鼠血清白细胞介素1β、白细胞介素18水平下降(P <0.01),与艾灸10 min组比较,艾灸30 min组血清中的炎症因子水平明显下降(P <0.05);(4)与模型组比较,艾灸各组大鼠皮质缺血区NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白、Caspase-1、消皮素D蛋白表达显著降低(P <0.01),艾灸30 min组蛋白表达明显低于艾灸10 min组和艾灸15 min组(P <0.05);(5)结论:艾灸百会、大椎、足三里可减轻脑缺血/再灌注损伤,其中艾灸30 min疗效最佳,其机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1通路介导的细胞焦亡有关。

NLRP3-Caspase-1-IL-1β通路在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中作用研究

目的:探讨NLRP3炎症小体通路在新生大鼠缺氧缺血性脑病中的作用,为临床靶向治疗新生儿缺氧缺血性脑病提供实验依据。方法:将7d龄新生SD大鼠随机分组为正常对照组(Control组)、假手术组(Sham组)及缺氧缺血性脑损伤组(HIE组);造模后6h、48h、72h和7d时间点进行取材,采用免疫组化技术检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达水平。结果:脑组织免疫组织化学检测,与Sham组及Control组比较,HIE组不同时间点的NLRP3、Caspase-1和IL-1β水平均明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),且NLRP3、Caspase-1和IL-1β在HIE组6h均可见水平增高,随着时间延长表达逐渐增加,7d表达最明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:新生SD大鼠缺氧缺血后脑损伤随时间演变逐渐加重,与炎症小体通路的NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达上调有关。新生大鼠缺氧缺血性脑病可能与NLRP3炎症小体通路的启动激活有关。

中风活心软胶囊通过PPARγ受体上调STAT3磷酸化激活PI3K/AKT通路抑制脑缺血再灌注损伤内质网应激的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊介导过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)受体上调信号传导转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化诱导磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(BAKT serine/threonine kinase,AKT)信号通路参与脑缺血再灌注损伤内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激和神经保护的作用机制研究,阐明中风活心软胶囊对脑缺血后神经损伤修复的调控机制。方法选取30只SPF级雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组和治疗组,采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(middle cerebral artery ischemia,MCAI)大鼠模型,采用改良神经功能损伤评分(modified neurological severity score,mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,以mNSS评分2~18分为造模成功。仅治疗组给予中风活心软胶囊。Western blot法分别检测缺血半暗区皮质PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K/AKT信号通路蛋白的表达,检测ER应激标记分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)及真核翻译起始因子2α激酶3(PKR-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)-激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)-C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)通路蛋白表达水平。结果模型组大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元显著减少,提示右侧MCAI大鼠模型构建成功。模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠缺血区PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K及AKT蛋白表达均低于对照组与治疗组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组与对照组各指标比较差异无统计学意义。治疗组、模型组大鼠缺血区GRP78、PERK、ATF4和CHOP蛋白表达均高于对照组,但治疗组均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K/AKT信号通路蛋白表达,其作用机制可能是通过介导PPARγ受体上调STAT3磷酸化诱导PI3K/AKT信号通路参与脑缺血再灌注损伤ER应激和神经保护,从而发挥脑保护效应。

姜黄素通过调控NLRP3/Caspase-1信号通路改善脑缺血大鼠神经功能障碍

目的:探讨姜黄素对局灶性脑缺血大鼠神经保护作用的机制。方法:将24只健康雄性SD大鼠,按随机数字表法分为假手术组(Sham)、脑缺血组(MCAO)和姜黄素干预组(CUR),每组8只。采用Zea Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型。在建立MCAO模型后即刻,姜黄素组大鼠接受第1次腹腔注射姜黄素(100mg/kg),随后连续每天接受1次腹腔注射姜黄素(100mg/kg),共7天。假手术组和脑缺血组大鼠在相同时间点接受腹腔注射等体积生理盐水。采用Longa法在造模后第1、7、14天对大鼠进行神经功能学评分,2~3分者纳入实验。在第14天,将大鼠处死后取出脑组织,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)对脑组织染色。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠脑组织中IL-18、IL1β及NLRP3含量。采用Western blot法检测TNF-α及Caspase-1及磷酸化的Caspase-1表达。结果:与Sham组相比,MCAO组大鼠神经功能评分显著升高(P<0.05),脑梗死体积显著增多(P<0.05);MACO组大鼠脑组织IL-18、IL-1β、NLRP3的含量显著升高(P<0.05),TNF-α、caspase-1、P-caspase-1的蛋白表达显著增多(P<0.05);与MCAO组相比,CUR组大鼠神经功能评分在第1d、7d无明显变化(P>0.05),在第14d时明显降低(P<0.05);CUR组大鼠脑梗死灶体积明显减少(P<0.05);CUR组大鼠IL-18、IL-1β、NLRP3的含量明显降低(P<0.05),TNF-α、caspase-1、P-caspase-1的蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论:姜黄素可以减少大鼠脑梗死体积并改善大鼠神经功能,这可能与姜黄素能减轻脑梗死后大脑的炎症反应有关;姜黄素的抗炎机制可能与其阻断NLRP3/Caspase-1信号轴,抑制NLRP3炎症小体的功能,减少炎症因子的合成与释放有关。

miR-27a-3p介导TLR4/TRIF信号通路对脑出血大鼠神经的保护作用

目的分析miR-27a-3p介导Toll样受体(TLR)4/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)信号通路对脑出血大鼠神经的保护作用。方法选取80只SD级雄性大鼠,20只作为正常组,其余60只建立大鼠脑出血模型后随机分为模型组、上调组、下调组各20只,做miR-27a-3p转染,鉴定miR-27a-3p转染率、脑组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β含量、神经功能缺损情况、TLR4/TRIF信号通路蛋白表达情况。结果与模型组相比,上调组miR-27a-3p表达量升高,下调组miR-27a-3p表达量降低,具有统计学差异(P<0.05),证明miR-27a-3p转染成功。相比于正常组,模型组、上调组、下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量升高,具有统计学差异(P<0.05);相比于模型组,下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量升高,上调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量降低,具有统计学差异(P<0.05);且下调组TNF-α、IL-1β含量、神经功能缺损评分、TLR4、TRIF、TRAM含量高于上调组,具有统计学差异(P<0.05)。结论miR-27a-3p可介导TLR4/TRIF信号通路对脑出血大鼠神经起到保护作用。减少大鼠脑内炎症反应。

奥拉西坦对脑出血大鼠的脑保护作用及对Caspase-3表达的影响

目的观察奥拉西坦对大鼠急性脑出血(ICH)血肿周围Caspase-3表达的影响,探讨奥拉西坦对脑出血大脑的保护作用。方法采用立体定位钻孔自体血注入法制备大鼠内囊出血模型,对照组只切开头皮,不做任何处理;模型组及奥拉西坦高、低剂量组分别给予相应药物腹腔注射,在6 h、12 h、24 h 3个时间点分别取材,通过免疫组化的方法检测Caspase-3蛋白的表达变化。结果手术组的大鼠较对照组Caspase-3蛋白的表达明显增多,其中奥拉西坦高、低剂量组Caspase-3蛋白表达较模型组明显减少(P均<0.01),奥拉西坦高、低剂量组Caspase-3蛋白表达比较有显著性差异(P均<0.05)。结论奥拉西坦可通过调节Caspcase-3免疫阳性细胞的表达,抑制脑出血周围神经细胞凋亡,促进细胞代谢,从而对脑出血大鼠大脑起保护作用。

针刺调控自噬蛋白Beclin-1对脑缺血再灌注损伤大鼠海马区Caspase-9的影响

目的 探讨针刺调控细胞自噬对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠海马区细胞凋亡的影响及机制。方法 110只SD大鼠随机分为正常组22只、假手术组22只和造模组66只,造模组使用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,成功后随机均分为模型组、针刺组、药物组,每组各22只。针刺组捆绑并针刺“大椎”“百会”“人中”,药物组注射依达拉奉。Garcia神经功能评分评定大鼠神经功能,TTC染色观察脑梗死情况,透射电镜观察海马区自噬小体,TUNEL检测患侧脑组织细胞凋亡率,免疫组化检测海马区半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达,Western blot检测海马区苄氯素-1 (Beclin-1)、Caspase-9表达。结果 干预前后与正常组比较,假手术组各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。干预前,与假手术组比较,造模组神经功能评分下降(P<0.01)。针刺72 h后,与假手术组比较,模型组神经功能评分下降(P<0.01)、脑梗死面积比上升(P<0.01)、缺血侧脑组织细胞凋亡率、海马区Caspase-9、Caspase-3表达量增加(P<0.01)、Beclin-1表达量下降(P<0.05);与模型组比较,药物组、针刺组神经功能评分显著上升(P<0.01)、梗死面积比缩小(P<0.01)、患侧脑组织细胞凋亡率及海马区Caspase-9、Caspase-3下降(P<0.01)、Beclin-1表达量上升(P<0.05)。透射电镜下模型组细胞器肿胀,大多数线粒体变大,见少量溶酶体;针刺组、药物组神经细胞轻度水肿,线粒体轻度肿胀,可见初级溶酶体、自噬小体、自噬溶酶体存在。结论 针刺可调控大鼠自噬关键蛋白抑制CIRI后细胞凋亡,其机制可能与调整自噬影响Caspase-9表达相关。

黄连解毒汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注后的保护作用及其对caspase-3表达的影响

目的观察黄连解毒汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的保护作用及其对caspase-3表达的影响。方法雄性Wistar大鼠104只随机分为假手术组、手术对照组和黄连解毒汤组及阳性对照组。后3组又根据再灌注时间的不同各分为1 h2、4 h4、8 h、7 d 4个小组。线栓法制作脑缺血-再灌注损伤模型。缺血2 h分别再灌注1 h、24 h4、8 h7、d后断头取脑,应用TUNEL染色及SP免疫组织化学方法观察并测定梗死灶体积、凋亡细胞数及caspase-3的表达。结果假手术组未发现脑梗死灶和凋亡细胞及caspase-3阳性表达。黄连解毒汤组较手术对照组脑梗死体积显著缩小(P<0.05),凋亡细胞数减少(P<0.05),caspase-3表达减弱(P<0.05)。结论黄连解毒汤通过下调caspase-3的表达抑制脑细胞凋亡,具有脑保护作用。

Caspase-3抑制剂对大鼠脑缺血的神经保护作用

目的 探讨半胱天冬酶 - 3(Caspase- 3)抑制剂 (Ac- DEVD- CHO)对大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用及其机制。方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,利用 Bederson法评价神经体征 ,免疫组化检测 CPP32蛋白表达 ,利用 TUNEL染色和梗死面积来评价神经细胞损害。结果 脑室内给予 Ac- DEVD- CHO(1 60 ng)可明显减少 CPP32蛋白的表达 ,减少 TUNEL阳性细胞数 ,减少脑梗死面积 ,并可显著促进大鼠脑缺血后神经功能缺失的恢复。结论 Ac- DEVD- CHO可能通过减少 CPP32蛋白的表达 ,减少神经细胞凋亡 ,对缺血性神经元起到保护作用。

肾脑复元汤对MCAO大鼠脑保护作用及cyt-C,Caspase-9,Caspase-3的影响

目的探究肾脑复元汤对MCAO大鼠脑保护作用,探讨其脑保护机制与cyt-C,Caspase-9,Caspase-3表达的关系。方法 72只SD大鼠造模成功后随机分为假手术组、模型组、中药组,根据治疗后处死时间每组再随机分为3、7、14 d 3个亚组,比较各组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积,并采用Western blot法检测各组脑组织cyt-C,Caspase-9,Caspase-3的蛋白表达。结果各时间点神经功能缺损评分比较显示,中药组较模型组有明显下降(P<0.05或P<0.01);脑梗死体积比较显示,中药组在各时间点脑梗死体积均明显小于模型组(P<0.01);中药组3、7、14 d脑组织cyt-C、Caspase-9、Caspase-3表达均低于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论肾脑复元汤能促进MCAO大鼠神经功能恢复,减小脑梗死体积,其机制可能通过抑制线粒体cyt-C释放,减少Caspase-9、Caspase-3表达发挥对MCAO大鼠脑保护的作用。

葛根素衍生物对局灶性脑缺血再灌注的保护作用及对caspase-3表达的影响

目的:观察葛根素衍生物(G20)对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠是否具有保护作用,并探讨其作用机制,其保护作用是否与caspase-3的表达具有相关性。方法:以Longa发明的线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,大鼠被随机分为6组,分别为假手术组、模型组、G(25.0 mg·kg^(-1))组、G20(12.5、25.0、50.0 mg·kg^(-1))组,给药组于缺血后1.5 h及6 h两次尾静脉给药。通过评价大鼠缺血后神经行为学、脑梗死面积及脑含水量的变化,HE染色观察脑组织神经元病理学改变,以观察G20是否具有脑缺血再灌注损伤保护作用;并以原位末端标记法检测大脑神经元凋亡数目的改变及免疫组化法检测其caspase-3的表达来探讨其作用机制。结果:G20能改善脑缺血后4 h、24 h的神经肌肉运动和前庭运动功能,减少脑缺血再灌注后脑梗死面积及降低脑含水量,减轻脑组织的病理形态学改变,与G组比较,未见大鼠尿液变红等不良反应。G20明显减少了脑组织凋亡细胞的数目,减少了caspase-3的表达。结论:G20对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能是通过抑制caspase-3的表达发挥抗神经元凋亡作用。

大鼠局灶性脑缺血再灌注后雌二醇的保护作用及其对caspase-3表达的影响

目的观察雌二醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡与caspase-3表达的影响。方法雄性Wistar大鼠72只随机分为假手术组(n=8)、手术对照组和雌二醇组。后两组又根据再灌注时间的不同各分为3、6、12、24h四个小组,每小组8只。线栓法制作脑缺血-再灌注(I/R)损伤模型。缺血2h分别再灌注3、6、12、24h后断头取脑,应用TUNEL染色及SP免疫组织化学方法观察并测定梗死灶体积、凋亡细胞数及caspase3的表达。结果假手术组未发现脑梗死灶和凋亡细胞及caspase-3阳性细胞。雌二醇组较手术对照组脑梗死体积显著缩小(P<0.05),凋亡细胞数减少(P<0.05);caspase-3表达减弱(P<0.05)。结论雌二醇通过下调caspase-3的表达抑制脑细胞凋亡,具有脑保护作用。

保护素D1对大鼠全脑缺血再灌注损伤海马Caspase-3表达及神经元凋亡的影响

目的评价保护素D1(PD1)对大鼠全脑缺血再灌注损伤海马Caspase-3蛋白表达及神经元凋亡的影响。方法将108只健康成年雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(S组,n=36)仅游离双侧椎动脉和颈总动脉;脑缺血再灌注损伤组(IR组,n=36)和保护素D1组(P组,n=36)采用四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。P组于再灌注即刻经侧脑室注入PD1 100 ng,S组和IR组注入等容量生理盐水。各组分别于再灌注2、6、12、24、48、72 h(T1-T6)随机取6只大鼠处死,取海马组织,采用Western-blot法和RT-PCR法检测海马Caspase-3蛋白和Caspase-3 mRNA表达,采用流式细胞仪检测海马神经元凋亡情况。结果与S组比较,IR组、P组海马Caspase-3蛋白和Caspase-3 mRNA表达均上调(P<0.05);与IR组比较,P组海马Caspase-3蛋白和Caspase-3 mRNA表达均下调(P<0.05)。S组各时点均未见神经元凋亡,IR组和P组于T1时凋亡率开始上升,T4时达峰值,T5时开始下降,且P组各时点凋亡率均明显低于IR组(P<0.05)。结论 PD1可抑制大鼠全脑缺血再灌注损伤海马神经元凋亡,其机制可能与下调Caspase-3蛋白和Caspase-3 mRNA表达有关。

右美托咪定通过激活PI3K/AKT信号通路对前列腺素诱导分娩窒息子鼠氧化应激和炎症水平的影响及脑保护机制

目的探讨右美托咪定通过激活PI3K/AKT信号通路对前列腺素诱导分娩窒息子鼠氧化应激和炎症水平的影响及脑保护机制。方法将孕鼠随机分为对照组、模型组、右美托咪定低剂量组、右美托咪定高剂量组、右美托咪定+LY294002组。对照组孕鼠自然分娩,模型组与给药组孕鼠构建分娩窒息模型,分组处理孕鼠后分娩,每组选出12只子鼠检测其学习记忆能力、海马神经元损伤凋亡、脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、环氧化酶-2(COX-2)及白细胞介素-6(IL-6)水平、脑组织自噬及PI3K/AKT通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组子鼠海马神经元发生严重损伤,神经元凋亡率、脑组织MDA、COX-2及IL-6水平、LC3-II/LC3-I及Beclin-1、P62表达明显升高(P<0.05),目标象限停留时间、穿越原平台位置次数、神经元数量、脑组织SOD水平及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt明显降低(P<0.05);与模型组相比,右美托咪定给药组子鼠海马神经元发生损伤均减轻,神经元凋亡率、脑组织MDA、COX-2及IL-6水平、LC3-II/LC3-I及Beclin-1、P62表达均降低(P<0.05),目标象限停留时间、穿越原平台位置次数、神经元数量、脑组织SOD水平及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均升高(P<0.05),且高剂量的右美托咪定作用更强;与右美托咪定高剂量组相比,右美托咪定+LY294002组子鼠各指标变化趋势发生逆转。结论右美托咪定可通过激活PI3K/AKT信号降低前列腺素诱导的分娩窒息新生子鼠氧化应激及炎症水平,抑制自噬,减轻子鼠海马神经元损伤及凋亡,改善其学习记忆功能,发挥脑保护作用。

Caspase-3抑制剂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用(英文)

目的:观察Caspase-3特异性肽类抑制剂AC-DEVD-CHO(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-aldehyde)对新生鼠缺氧缺血脑损伤(hypoxia-ischemiabraindamage,HIBD)的疗效。方法:建立HIBD模型后予新生鼠不同剂量AC-DEVD-CHO脑室注射,24h后用四肽荧光底物法检测鼠脑Caspase-3活性,确定最佳剂量。通过病理学、原位细胞凋亡检测等考察AC-DEVD-CHO对HIBD的疗效。结果:HIBD新生鼠患侧脑组织Caspase-3活性随注射AC-DEVD-CHO剂量增加而递减。至300-400ng时,差别已不明显。AC-DEVD-CHO300ng治疗组HIBD新生鼠脑皮质、海马神经细胞凋亡百分率(30.2±11.2)%较生理盐水组(44.6±12.4)%明显降低。结论:Caspase-3抑制剂对新生鼠HIBD具有脑保护作用。

高含S-腺苷甲硫氨酸饮食通过TET3介导的DNA去甲基抑制小鼠脑卒中后神经元细胞凋亡及活性氧蓄积

目的 明确高含S-腺苷甲硫氨酸(SAM)饮食是否通过激活10-11易位蛋白3(TET3)促进DNA去甲基化,抑制脑卒中后小鼠神经元细胞的凋亡及活性氧(ROS)产生。方法 将C57BL/6J小鼠分为Sham组、大脑中动脉栓塞(MCAO)组和SAM组。术后行Morris水迷宫实验评价小鼠神经功能状态,对小鼠脑组织进行取材、切片、苏木精-伊红染色、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色及免疫荧光染色。将PC-12细胞分为Control组、缺氧/复氧(H/R)组和SAM组。流式细胞仪检测细胞ROS水平及凋亡水平;Western blot检测细胞中TET3相对表达量;Dot blot检测细胞内5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)水平。结果 在动物实验中,与Sham组相比,MCAO组小鼠神经功能缺损加重,脑梗死区域明显,脑组织结构排列紊乱且存在大量空洞,神经细胞数量减少,脑切片中TET3蛋白表达减少,5hmC水平降低;而与MCAO组相比,SAM组小鼠神经功能缺损情况减轻,脑梗死区域体积减小,脑组织中的空洞减少,存活神经细胞增多,TET3蛋白表达增多,5hmC水平升高。在细胞实验中,与Control组相比,H/R组缺氧处理可促使细胞内产生大量ROS,诱导细胞发生凋亡,胞内TET3蛋白表达减少和5hmC水平下降;而与H/R组相比,SAM组细胞ROS产生减少,细胞凋亡减少,TET3表达增多和5hmC水平上升。给予TET3抑制剂可消除SAM减少细胞凋亡的作用。结论 高含SAM饮食通过促进TET3介导的DNA去甲基化减轻小鼠脑卒中后神经元损伤,从而发挥保护作用。

灯盏细辛注射液通过调节JAK2/STAT3信号通路抗脑卒中大鼠神经损伤的研究

[目的]探讨灯盏细辛注射液(EBI)对脑卒中大鼠的神经保护作用及在该过程中对Janus激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路的调节机制。[方法]通过大脑中动脉闭塞(MCAO)建立缺血性脑卒中大鼠模型,然后将造模成功的大鼠随机分为模型组、尼莫地平组、EBI组、JAK2抑制剂组(AG490组)和EBI+JAK2激动剂组(EBI+CA1组),每组20只,另外选取20只大鼠只暴露颈动脉不进行结扎作为假手术组。利用神经功能缺损评分评估大鼠神经功能;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠脑梗死面积;苏木精-伊红(HE)和尼氏(Nissl)染色检测大鼠脑组织的病理性形态;TUNEL染色检测大鼠脑组织中神经细胞凋亡情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠脑组织中Bax、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达。[结果]与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死面积增大,神经元细胞凋亡率增加,神经缺损评分、MDA水平、Bax蛋白表达及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均升高(P<0.05),同时脑组织中神经元退化,神经元数量减少,SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,EBI组、尼莫地平组和AG490组大鼠脑梗死面积减小,神经元细胞凋亡率减少,神经缺损评分、MDA水平、Bax蛋白表达及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均降低(P<0.05),同时脑组织中神经元损伤减轻,神经元数量增加,SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);进一步利用JAK2激动剂进行回补实验发现,EBI对大鼠神经损伤的保护作用被逆转(P<0.05)。[结论] EBI能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脑卒中大鼠的神经损伤。

注射用丹参多酚酸对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的探讨注射用丹参多酚酸(SAFI)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法将100只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及丹参多酚酸低、中、高剂量组(5、10、20 mg·kg^(-1)),每组20只。采用改良线栓法复制大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)大鼠模型。于MCAO/R手术前按照上述剂量腹腔注射给药,每日1次,连续给药3 d;末次给药1 h后,进行MCAO/R模型复制。采用Longa五级评分方法进行神经功能缺失评分;采用TTC染色后测量脑梗塞体积;ELISA法检测血清中氧化应激指标NADPH氧化酶(NOX)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)及炎症反应指标单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、IL-6、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的水平;HE及尼氏染色法观察脑组织病理损伤情况;TUNEL染色法检测脑组织神经元细胞凋亡情况;免疫荧光法测定大鼠脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况;Western Blot法检测脑组织中NLRP3、Caspase1蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P<0.01),脑梗死体积显著增加(P<0.01),脑组织病理损伤明显,神经元密度显著降低(P<0.01),皮层细胞凋亡率显著升高(P<0.01);血清NOX、4-HNE、8-OHd G、MCP-1、TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-6、ICAM-1水平均显著升高(P<0.05,P<0.01);脑组织中GFAP、NLRP3、Caspase1蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,SAFI中、高剂量组大鼠的神经功能缺失评分显著降低(P<0.01),脑梗死体积显著缩小(P<0.01),神经元损伤有不同程度好转,神经元密度显著增加(P<0.05,P<0.01),皮层细胞凋亡率显著降低(P<0.01);血清NOX、4-HNE、8-OHd G、MCP-1、TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-6、ICAM-1水平明显降低(P<0.05,P<0.01);脑组织中GFAP、NLRP3、Caspase1蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论SAFI预防性给药可明显降低脑缺血再灌注损伤大鼠的炎症反应和氧化应激水平,改善脑组织病理损伤,发挥神经保护作用,其机制可能与抑制星型胶质细胞活化及NLRP3/Caspase-1通路激活有关。

桑黄素通过抑制TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡的影响

目的探讨桑黄素(Morin)通过调控硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶1(Caspase-1)信号通路,对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡的影响。方法将60只大鼠随机均分为假手术组、模型组、Morin低剂量(Morin-L,10 mg/kg)组、Morin高剂量(Morin-H,40 mg/kg)组、Morin-H+pLVXNC组(40 mg/kg Morin+pLVX-NC)、Morin-H+pLVX-TXNIP组(40 mg/kg Morin+pLVX-TXNIP)。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型(除外假手术组),给药1 h后再灌注。再灌注72 h后,进行神经功能缺损评分;取出全脑进行脑含水量测定;苏木精-伊红(HE)染色观察脑皮质半暗带病理损伤情况;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)检测脑组织梗死面积;酶联免疫吸附试验检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量;Western blot检测脑皮质中TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分,IL-1β、IL-18水平,脑含水量,梗死面积,TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达均增加(P<0.05);与模型组比较,Morin-L组、Morin-H组神经功能缺损评分,IL-1β、IL-18水平,脑含水量,梗死面积,TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达均降低(P<0.05);与Morin-H+pLVX-NC组比较,Morin-H+pLVX-TXNIP组神经功能缺损评分,IL-1β、IL-18水平,脑含水量,梗死面积,TXNIP、NLRP3、Caspase-1蛋白表达增加(P<0.05)。结论Morin可以减轻脑缺血再灌注大鼠脑损伤,抑制神经元凋亡,作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路活化有关。