二乙酰二脱水卫矛醇抗瘤作用的实验研究

目的 探讨二乙酰二脱水卫矛醇 (1 ,2 :5 ,6 -Dianhydro - 3 ,4-diacetylgalactitol,DADAG)的体内外抗肿瘤作用。方法 用MTT法观察DADAG对人肿瘤细胞株的抗增殖作用 ;以小鼠脑内移植艾氏腹水癌 (Ehrlichascitescarcinoma,EAC)和DBA/ 2小鼠脑内移植白血病L1 2 1 0为移植瘤模型 ,观察DADAG的体内抗瘤效果。结果 DADAG对HL60细胞和K562细胞有较强的抑制作用 ,IC50 值分别为 3 .7μg·ml- 1 和 2 5 .5μg·ml- 1 。DADAG的高剂量(1 0 .0mg·kg- 1 )对小鼠脑内移植EAC有一定的抑制作用 ,对小鼠的生存期延长率 (increaseoflifespan ,ILS)是 30 % (P <0 .0 5) ;而DADAG的低剂量 6 .4mg·kg- 1 、中剂量 8.0mg·kg- 1 和高剂量 1 0 .0mg·kg- 1 对小鼠脑内移植白血病L1 2 1 0均有明显的抑制作用 ,ILS分别为 35 %、47%和 55 % (P值均 <0 .0 1 )。

对鸡、驼鸟新城疫毒株毒力与血凝素的测定

两株新城疫 (ND)病毒分别分离自发病鸡群与鸵鸟群 ,本实验室对两株病毒的最小致死量致死鸡胚的平均死亡时间 (MDT)、3日龄雏鸡脑内接种指数、6周龄鸡静脉接种指数 (IVPI)、血凝解脱速率和血凝素热稳定性进行了测定。结果表明 ,源于发病鸡群的分离物是一株中发型的ND病毒 ,属快速解脱型 ,血凝素对热的抵抗力较强 ;而源于鸵鸟的分离物是一株缓发型的ND病毒 ,属慢速解脱型 ,血凝素对热的抵抗力较差。

禽流感H5N1病毒不同途径感染BALB/c小鼠的临床和病理比较

我们将禽流感H5N1病毒通过鼻腔、尾静脉和脑内接种方式接种BALB/c小鼠,观察小鼠在感染过程中临床症状和各个组织器官的病理变化。感染1天后,小鼠打堆、猥琐、毛色混乱、眼角有分泌物;感染第2天的小鼠均出现死亡;感染4天后,小鼠从临床症状上表现恢复。收集各种方式感染的小鼠的主要脏器进行组织病理学检查,结果显示,小鼠不同接种途径感染H5N1流感病毒后,所产生的病理变化相似;从各个脏器的病变程度来看,病毒最先到达的器官损伤最严重。感染第2天各组织器官的病变最严重,随着感染时间增长,肺脏和肾脏等器官有不同程度的恢复,心脏和肝脏等器官的病变在感染过程中未见明显恢复。

GIF基因在小鼠中枢神经系统中的表达

本实验目的是探索G IF接种在脑内进行中枢神经系统疾病基因治疗的可行性.方法是用适量的G IF-GFP融合蛋白腺病毒载体直接注入c57小鼠脑内,3天、7天、28天、60天后分别用显微镜观察脑切片,结果发现G IF-GFP融合蛋白在脑中有表达且安全稳定.实验结果表明利用G IF进行中枢神经系统疾病的基因治疗是可行的.

徐州地区9株新城疫病毒的分离鉴定

为了解徐州地区鸡新城疫流行现状及防治效果,采集该地区鸡新城疫疑似病料,通过血凝试验和血凝抑制试验,对病料进行病毒分离与鉴定,为鸡新城疫病防治提供参考。结果表明,疑似病料经分离培养、血凝试验和血凝抑制试验,获9株鸡新城疫病毒;1日龄雏鸡脑内接种致病指数表明,其中6株病毒为强毒株(SN 03-2012、SN 12-2012、SN 05-2012、SN 01-2012、LB 05-2012、SN 04-2010)。

如何提高病毒外源因子检测中小鼠和乳鼠检查法的成功率

随着生物制品在临床上的应用日益广泛,其安全性也备受关注。根据国家规定,拟上市的生物制品需依照2015版药典要求进行病毒外源因子检测以控制其质量,但其中较为关键的小鼠、乳鼠检查法在实际操作中存在一定的困难,导致检测结果易出现假阴性或假阳性,有鉴于此,本文以广东省医学实验动物中心丰富的检测经验为依据,对小鼠及乳鼠检查法的关键点进行归纳总结,拟提供高效实用的操作方法并提高该检查法的成功率。

肉鸡新城疫强毒感染的诊断

取某大型肉鸡场疑似新城疫的病死鸡的脑组织和泄殖腔粘膜病料，接种于１０日龄左右ＳＰＦ鸡胚，记录其死亡时间和ＨＡ滴度，并取其尿囊液进行１日龄ＳＰＦ雏鸡脑内致病指数（ＩＣＰＩ）测定。结果，鸡胚平均死亡时间（ＭＤＴ）在４８ｈ左右，其ＩＣＰＩ为１．５１，对照于中监所标准强毒株为１．３６。其尿囊液ＨＡ效价在２．９左右，并可被标准阳性血清阻断，血凝完全被抑制。以琼扩试验排除了禽流感，证明该鸡场发病为新城疫强毒所致。即急性典型新城疫，可发生于免疫过的肉鸡群。

实验感染小鼠可长期保有仓鼠痒病病原因子

脑内接种仓鼠痒病病原因子（263k株）1×107 ID50的PrP+/+小鼠临床不发病,但在接种后204—782天其脑和脾含能感染仓鼠而不感染小鼠的仓鼠痒病病原因子,按潜伏期推算感染滴度为102ID50/g组织。以同样方法接种的PrP％小鼠则不能将痒病传送给仓鼠。

人巨细胞病毒小鼠脑内感染的病理变化

采用人巨细胞病毒直接注入小鼠大脑，通过组织化学及ＨＥ染色，光镜观察结果显示：ＢＡＣＢ／Ｃ鼠病变显现率６０．６９％，昆明鼠是３０．３０％。小鼠脑组织以海马区，侧脑室病变明显，病变特点是脑内血流循环障碍而导致脑软化。提示：人巨细胞病毒严重感染的新生儿在发育过程中出现一系列神经系统障碍可能与病毒损害患儿海马区，侧脑室神经细胞有关。

骨形成蛋白能抑制人类脑肿瘤起始细胞的致瘤潜能

人类脑肿瘤研究证实．变异的致癌前体不仅能决定神经干细胞特性还能引发脑肿瘤。研究报道骨形成蛋白（bone morphogenetic proteins。BMPs）中的骨形成蛋白4（BMP4）能在很大程度上减少人脑恶性胶质瘤（glioblastomas，GBMs）的干细胞样肿瘤起始细胞。移植的胶质瘤细胞在体外短暂性接触BMP4将失去其发展为脑GBMs的能力。更重要地是，在移植了人胶质瘤细胞的小鼠大脑内接种BMP4，其脑内的肿瘤生长被有效地阻断了，小鼠也未再出现死亡；而单纯植入人胶质瘤细胞的小鼠则100％死亡。研究人员证实BMPs激活了其同源受体（BMPRs），并触发了从人类GBMs分离出的细胞Smad信号级联放大反应的发生，从而减少了胶质瘤细胞的增殖并上调了神经分化标记物的表达，但细胞活性未受影响。

一株西尼罗病毒株的生物学特征研究

目的 对引进的西尼罗病毒 (WNV)毒株的形态学、致病性、细胞敏感性、免疫原性等生物学性状进行探讨 ,为进一步开展WNV的相关研究奠定基础。方法 选择Vero E6与C6 36细胞观察WNV的细胞病变效应 (CPE) ,并制作电镜负染标本和组织切片标本进行病毒形态学鉴定 ;通过乳鼠脑内接种WNV确认其致病性 ;以灭活的感染乳鼠脑悬液免疫BALB c小鼠 ,以间接免疫荧光试验(IFA)测定其血清WNVIgG抗体 ;用RT PCR检测病毒核酸 ,扩增的核苷酸序列通过BLAST作同源性比较。结果 WNV所致Vero E6与C6 36细胞的CPE分别以细胞圆缩和融合为主要特征 ;电镜下所见病毒体为有包膜、直径约 30～ 5 0nm的球形颗粒 ;脑内接种WNV可致全部乳鼠死亡 ;灭活病毒可诱导小鼠产生WNV抗体 ;经RT PCR扩增 ,在WNV培养液及感染乳鼠脑组织中均检测到目的基因片段 ,且仅与WNV有较高的同源性 (94 %～ 1 0 0 %)。结论 本研究使用的WNV毒株可供进一步开展WNV的相关研究。

小鼠原代神经元细胞狂犬病病毒滴度测定

目的探索利用小鼠原代神经元细胞测定狂犬病病毒(rabies virus,RV)滴度的可行性。方法分离培养小鼠大脑皮质原代神经元细胞,接种100小鼠脑内接种半数致死量(MICLD50)的标准攻击强毒(CVS)毒株,通过免疫荧光和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其感染性,并在此基础上在原代神经元细胞上进行了该毒株的细胞半数感染量(CCID50)测定。结果成功制备了小鼠大脑皮质原代神经元细胞;原代神经细胞培养物接种CVS 96h后,用抗微管相关蛋白质(MAP2)抗体和抗RV阳性血清作为一抗并经荧光抗体染色后,在胞体和突起上均有神经元特异性和RV特异性着染;在共聚焦显微镜下,当相同的细胞部位上出现红色和绿色交迭时呈现粉色斑点,免疫荧光证实原代神经细胞可被CVS感染,同时RT-PCR得到1 770 bp左右的目的条带,说明其被CVS感染;该原代细胞上所测定的CVS病毒滴度为104.5CCID50/0.1 mL,而该病毒的原始滴度为104.5MICLD50/0.03 mL。结论小鼠脑原代神经元细胞上测定的CVS株的病毒滴度与通过脑内接种法测定的滴度相同。