建立脑双位点微透析结合高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学方法同步监测大鼠腹内侧前额叶皮质和海马中乙酰胆碱和胆碱含量

目的建立同步动态监测清醒自由活动状态下大鼠腹内侧前额叶皮质（mPFC）和海马细胞外液中乙酰胆碱（ACh）和胆碱（Ch）方法,用于药物干预下不同脑区胆碱类神经递质变化研究。方法建立mPFC和海马双位点双通道同步微透析采样技术和高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学（HPLCIMER-ECD）方法。通过对清醒自由活动大鼠mPFC和海马同步灌流透析取样,HPLC-IMER-ECD分析药物作用下大鼠mPFC和海马细胞外液中ACh和Ch的动态变化,验证该技术方法的可行性和适用性。结果大鼠mPFC和海马双套管植入术及透析采样后状态表现良好,表明脑双位点双通道同步微透析采样技术可行。HPLC-IMER-ECD法测定ACh和Ch,两者浓度在0.02-2.00μmo·lL-1范围内线性关系良好,ACh最低检测限为10 nmo·lL-1,Ch最低检测限为5 nmol·L-1（信噪比为3∶1）。ACh 0.1,0.4和2.0μmol·L-1日内精密度相对标准偏差为0.87%-1.83%,日间精密度为5.38%-6.80%;Ch日内精密度相对标准偏差为1.60%-2.91%,日间精密度相对标准偏差为5.56%-7.38%;ACh相对回收率为96.0%-113.0%,Ch为102.3%-109.2%。叠氮钠能明显降低mPFC和海马细胞外液中ACh（P〈0.05）,但能显著升高两脑区内Ch含量（P〈0.05）。人参皂苷Rg1可逆转叠氮钠导致的海马区ACh降低（P〈0.05）及mPFC和海马区Ch含量的升高（P〈0.05）。mPFC细胞外液中ACh和Ch较高,受到叠氮钠影响较海马区更敏感。结论脑双位点微透析结合HPLC-IMER-ECD方法能同步监测大鼠mPFC和海马中ACh和Ch含量变化。人参皂苷Rg1可通过调节脑内ACh和Ch动态平衡,增强中枢胆碱能系统的功能。

脑内同步灌流NaN_3致大鼠mPFC和海马细胞外液中胆碱类递质含量变化

目的:观察脑内同步灌流特异性呼吸链复合体Ⅳ抑制剂叠氮钠(sodium azide,NaN3)对大鼠腹内侧前额叶皮质(mPFC)和海马细胞外液中乙酰胆碱(ACh)和胆碱(Ch)含量的影响,建立线粒体损伤的AD急性模型。方法:应用脑双位点双通道同步微透析采样技术,对清醒自由活动正常大鼠mPFC和海马同步灌流含NaN3(50μmol·L-1)和新斯的明(2μmol·L-1)的改良Ringer氏液120 min,并同步连续收集两脑区的透析液。采用高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学法动态监测ACh和Ch含量。结果:正常大鼠的mPFC细胞外液中ACh和Ch含量高于海马区,NaN3在灌流期间能明显降低mPFC/海马细胞外液中ACh,但显著升高Ch,并持续抑制mPFC/海马区ACh和Ch含量恢复。结论:大鼠脑内mPFC和海马同步灌流NaN3使胆碱能神经投射区域功能受损,可造成ACh和Ch代谢紊乱的AD急性模型,可用于病理机制和药理学研究。