动脉粥样硬化实验兔血液滞后环、黏弹性、触变性研究以及脑基底动脉内皮细胞扫描电镜观察

目的检测动脉粥样硬化模型的滞后环、黏弹性、触变性等流变学指标,并进行脑基底动脉内腔面内皮细胞扫描电镜观察,以阐明动脉粥样硬化机理。方法设计了4个实验动物组:A组(对照组),B组(动脉粥样硬化组),C组(甘露醇干预组),D组(动脉粥样硬化+甘露醇干预组)。实验兔喂以高脂、高胆固醇食物,造成动脉粥样硬化模型。4组动物饲养到期后抽静脉血,采用上海航天局研制的HT流变仪,进行血液滞后环、黏弹性、触变性等流变学指标的检测。获取4组动物的脑基底动脉标本,继之进行其内腔面内皮细胞的扫描电镜观察。结果(1)与A组相比,B组的血液滞后环、黏弹性、触变性等多项流变学的指标,观察到有高调76%,促动脉粥样硬化方向的变化数据。(2)与A组相比,C组与D组的血液滞后环、黏弹性、触变性等多项流变学的指标,由于甘露醇的血液扩容作用,出现约50%的血液滞后环、黏弹性、触变性等流变学指标的低调变化。(3)脑基底动脉内腔面的内皮细胞扫描电镜观察展示:A组,表面平整,细胞呈长梭形,细胞长轴与血管长轴平行排列,细胞间连接紧密;B组,内膜内皮细胞高低不平,呈搓板状,细胞间的连接断断续续,部分内皮细胞肿胀隆起,表面微绒毛少而粗短;C组,内膜内皮细胞基本平整,但有少量非特异性损伤,部分内皮细胞隆起,如同卵石状态排列,示细胞的体积明显缩小;D组,具有B与C两组共有特点,内皮细胞排列比较紊乱,但基本上仍平行于血管的长轴,隐约可见一些接近正常的内皮细胞。结论(1)从血液滞后环角度,观察到正常人与正常兔子间有一定程度的区别。该文已成功制作动脉粥样硬化模型,应用甘露醇进行干预后血液滞后环有明显的变化。(2)从兔脑基底动脉内皮细胞扫描电镜观察展示,A组细胞具有健康性,但B组的细胞已受损。C、D两组的内皮细胞,既没有A组那么好,也没有B组那么坏,其形态学的观察处于A与B两组之间。(3)对动脉粥样硬化的防治策略而言,该文以高脂、高胆固醇食物造成了兔子动脉粥样硬化的模型,说明不利的饮食与营养可达到致动脉粥样硬化的早期损伤表现,这也影射出科学地设计饮食谱可以避免动脉粥样硬化的发生。(4)血液滞后环、黏弹性、触变性以及有关流变学指标,在各组间差异很大,通过血液可测出是否正常,如发现异常可进行科学的补液进行纠正,这对防治动脉粥样硬化以及心、脑血管病发生是值得的。

大黄素增强SD大鼠脑基底动脉平滑肌细胞BK_(Ca)电流

目的研究大黄素对SD大鼠脑基底动脉的影响。方法应用压力型小动脉测量仪观察给予大黄素前后脑基底动脉直径的变化;应用全细胞膜片钳技术观察大黄素对离体的SD大鼠脑基底动脉平滑肌细胞电流的调节作用。结果(1)大黄素舒张脑基底动脉(P<0.05);(2)大黄素呈电压依赖性增强脑基底动脉平滑肌细胞外向电流(P<0.05);(3)大黄素呈浓度依赖性增强脑基底动脉平滑肌细胞外向电流,10-7、10-6和10-5mol·L-1的大黄素分别增加脑基底动脉平滑肌细胞外向电流(+60mV)从(173±43)pA到(226±36)pA、(266±54)pA和(303±71)pA(P<0.05);(4)给予10-3mol·L-1的BK Ca通道阻断剂四乙胺(tetraethyl ammonium;TEA)不仅取消了大黄素对脑基底动脉平滑肌细胞外向电流的增强作用,而且使外向电流减小到(61.2±6.5)pA,比对照组电流减小了(0.65±0.06)倍(P<0.01)。结论大黄素通过增强BK Ca通道的开放促进钾离子外流从而舒张脑基底动脉血管。

大鼠脑基底动脉平滑肌细胞培养及功能鉴定

目的探讨大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的培养方法,了解生长特性。方法用组织贴块法培养大鼠脑基底动脉平滑肌,用免疫细胞化学法鉴定细胞,用RF-5000荧光分光光度计观察细胞内Ca2+浓度的动态变化来检测其活性。结果培养5d后可见组织块周围有平滑肌细胞长出,2wk后可融合传代,经平滑肌特异性肌动蛋白α-actin鉴定,确定为平滑肌细胞。钙离子通道激动剂可诱导细胞Fura-2荧光比值(F340/F380)上升,细胞活性良好。结论组织贴块法是大鼠脑基底动脉平滑肌细胞培养简单、高效、经济的实验方法,为脑血管疾病发病机制的研究提供了理想的细胞模型。

miR-130a对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-130a对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞(basilar arterial smooth muscle cells,BASMCs)生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:采用real-time PCR法检测大鼠BASMCs在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下miR-130a的表达水平。转染miR-130a inhibitor下调BASMCs中miR-130a的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测BASMCs活力、细胞周期及凋亡情况;Western blot检测细胞周期及凋亡相关调控因子细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、p21、p-Rb、Bcl-2和cleaved caspase-3/caspase-3的蛋白水平。Real-time PCR及Western blot检测检测生长阻滞特异性同源盒蛋白(Gax)的表达情况。结果:AngⅡ可促进BASMCs中miR-130a的表达,而抑制Gax的表达。miR-130a inhibitor可部分抑制AngⅡ增加BASMCs细胞活力的效应,并上调Gax的表达。此外,下调miR-130a后细胞早期凋亡率显著增加(P<0.05);同时细胞中cyclin D1、CDK2、Bcl-2和p-Rb的蛋白水平均显著降低,p21及cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默miR-130a可上调BASMCs中Gax的表达,进而影响细胞周期及凋亡相关因子的表达,从而抑制细胞活力,并促进其凋亡,提示miR-130a可作为高血压脑血管重构的一个潜在诊疗靶点。

同型半胱氨酸通过Rho激酶信号通路促进大鼠脑基底动脉平滑肌细胞活力与迁移

目的:探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞(basilar arterial smooth muscle cells,BASMCs)活力和迁移的作用及可能的分子机制。方法:分离培养大鼠BASMCs,给予不同浓度的Hcy刺激后,用CCK-8法初步测定细胞活力的变化,Western blot检测Rho激酶信号通路的活性。然后固定Hcy的浓度(1 mmol/L),并采用ROCK抑制剂Y-27632作为工具药对细胞进行处理,流式细胞术检测细胞的周期分布,划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移情况;检测细胞抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平反映细胞的氧化应激状态。结果:Hcy可浓度依赖性地提高BASMCs的活力,并上调细胞中GTP-RhoA和ROCK2的蛋白表达(P<0.05);同浓度的Hcy处理细胞后,48 h处理组的细胞活力显著高于24 h处理组(P<0.05)。Hcy处理组BASMCs中S期细胞的比例明显升高,G0/G1期细胞的比例显著降低(P<0.05);加入Y-27632预处理可显著抑制Hcy处理组BASMCs的G1/S期转换。划痕实验和Transwell的实验结果显示,Hcy处理组BASMCs的迁移率显著高于对照组;加入Y-27632预处理可抑制Hcy处理组BASMCs的迁移(P<0.05)。此外,Hcy可降低BASMCs中SOD和GSH-Px的活性,同时升高MDA的含量;相较Hcy处理组,加入Y-27632预处理后,细胞内SOD和GSH-Px的活性升高,MDA的含量降低(P<0.05)。结论:同型半胱氨酸可促进大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的活力及迁移,其作用机制可能与激活Rho激酶信号通路并提高细胞内氧化应激的水平有关。

Cl^-通道阻断剂对5-HT和CPA引起的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞Ca^(2+)内流的影响

目的 在培养的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞上观察5 HT和CPA诱导的Ca2 + 内流的特性 ,电压依赖性Ca2 + 通道 (VDC)抑制药尼莫地平 ,非电压依赖性Ca2 + 通道抑制药SK&F963 65及Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB对两种激动剂引起 [Ca2 + ]i 反应的影响 ,以探讨脑血管平滑肌细胞中 5 HT引起Ca2 + 内流的特性、Cl-通道与Ca2 + 内流的关系。方法 采用生物荧光双波长影像分析系统瞬即测定单细胞胞质[Ca2 + ]i 技术。结果 ① 5 HT和CPA均能诱导平滑肌细胞[Ca2 + ]i 呈双相升高 ,并且 5 HT诱导的Ca2 + 释放是环匹阿尼酸 (CPA)敏感Ca2 + 池的一部分 ;②尼莫地平对 5 HT和CPA触发的Ca2 + 内流无明显影响 ,而SK&F963 65可阻止二者触发的Ca2 + 内流 ;③Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB呈浓度依赖性抑制Ca2 + 内流 ,在SK&F963 65最大限度抑制Ca2 + 内流后 ,DIDS、NPPB可进一步抑制Ca2 + 内流 ;而Ca2 +内流被DIDS、NPPB分别最大抑制后 ,SK&F963 65也可进一步抑制Ca2 + 内流。结论 5 HT引起的Ca2 + 内流是经SK&F963 65敏感的非VDC ,其中包含Ca2 + 释放引起的Ca2 + 内流 (CRAC)成分与非CRAC成分 ,并且这两部分Ca2 +内流均与DIDS。

豚鼠脑基底动脉平滑肌细胞的原代培养及鉴定

目的本研究联合使用直接贴壁法和酶消化法培养细胞,从豚鼠脑基底动脉中提取平滑肌细胞,为相关实验研究提供材料。方法从豚鼠颅内分离出脑基底动脉,用0.125%胰蛋白酶进行消化并将组织块贴壁,细胞用含20%胎牛血清的DMEM/F-12培养基进行培养。采用自然纯化法,并根据不同细胞贴壁能力的差异性对细胞进行纯化。通过形态学观察、免疫荧光、免疫组织化学法及Western blot检测对细胞进行鉴定。结果 85%组织块存活,第4代平滑肌细胞纯度达95%。镜下可见细胞呈典型的"峰-谷"样生长,免疫荧光、免疫组织化学法及Western blot检测显示,平滑肌细胞特异性的肌动蛋白呈阳性表达。结论通过本实验可以得到大量高纯度的豚鼠脑基底动脉平滑肌细胞,有望为颅内动脉粥样硬化等病理生理变化的体外研究及脑血管平滑肌药物评价提供一个理想的实验材料。

辣椒素抑制自发性高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的增殖和迁移

目的研究辣椒素(CAP)是否可以改善自发性高血压大鼠(SHR)脑基底动脉平滑肌细胞(BASMC)的增殖迁移。方法体外培养SHR及Wistar京都(WKY)大鼠原代BASMC,随机均分为对照组(WKY组)、SHR组、CAP处理的SHR组。通过CCK-8法选取CAP处理浓度;Transwell^(TM)小室实验和划痕实验检测各组BASMC的迁移能力;免疫荧光细胞化学染色检测BASMC中的骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和分布;Western blot法检测BASMC的OPN、PCNA蛋白水平。结果与WKY组相比,SHR组BASMC增殖和迁移能力增强,经CAP处理后,细胞增殖和迁移能力降低;OPN表达在BASMC胞质和胞核,PCNA主要表达在胞核,与WKY组相比,SHR组OPN、PCNA表达及蛋白水平增强,经CAP处理后,其OPN、PCNA表达及蛋白水平明显降低。结论CAP可降低SHR来源的BASMC的增殖和迁移。

ET-1对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞骨架以及细胞内钙离子浓度的影响

目的建立胶原酶消化法培养大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的新方法,并探讨内皮素-1（endothelin-1,ET-1）对细胞骨架以及细胞内钙离子浓度的影响.方法采用胶原酶消化法培养大鼠脑基底动脉平滑肌,用免疫细胞化学法鉴定细胞.加入ET-1（10^-8mol·L^-1）刺激后,通过细胞骨架的观察和细胞内钙离子浓度的动态变化探讨ET-1对细胞的影响.结果培养6d后可见脑基底动脉组织块周围有平滑肌细胞爬出,经平滑肌特异性肌动蛋白α-actin鉴定,鉴定为平滑肌细胞.ET-1刺激后细胞骨架致密,细胞内Ca2＋浓度增加.结论成功建立胶原酶法培养大鼠平滑肌细胞的新方法为脑血管疾病的发病机制和防治药物研究提供了理想的细胞模型.ET-1可能通过脑基底动脉平滑肌细胞骨架及细胞内钙离子浓度的变化,影响脑血管重构.

钙拮抗剂TMB-8抑制BHQ,NE和KCl引起的培养乳牛基底动脉单个平滑肌细胞内游离钙的升高

用ＡＲＣＭＭＩＣ阳离子测定系统，测量单个细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ），研究８（Ｎ，Ｎ二乙胺）ｎ辛基３，４，５三甲氧基苯甲酸酯（ＴＭＢ８）对培养乳牛基底动脉平滑肌［Ｃａ２＋］ｉ的作用。在细胞外钙浓度为１３ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，ＴＭＢ８（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）可明显抑制ＢＨＱ，ＮＥ及ＫＣｌ引起［Ｃａ２＋］ｉ的升高。在细胞外钙为零＋ＥＧＴＡ０１ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，ＴＭＢ８（１０，３０及１００μｍｏｌ·Ｌ－１）可浓度依赖性地降低静息［Ｃａ２＋］ｉ，ＴＭＢ８（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）可几乎完全阻断ＢＨＱ及ＮＥ引起［Ｃａ２＋］ｉ的增加。研究表明ＴＭＢ８降低培养乳牛基底动脉平滑肌［Ｃａ２＋］ｉ的机制，主要是抑制肌浆网Ｃａ２＋的释放，或增加肌浆网对Ｃａ２＋的摄入，并由此间接地抑制细胞外钙的内流。

TMB-8对牛基底动脉平滑肌细胞增殖的作用

采用培养乳牛基底动脉平滑肌细胞（ＢＡＳＭＣ），观察了去甲肾上腺素（ＮＥ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对细胞增殖的影响，以及８－（Ｎ，Ｎ－二乙胺）－ｎ－辛基－３，４，５－三甲氧基苯甲酸酯（ＴＭＢ－８）的作用，发现ＮＥ和ＡｎｇⅡ能明显引起ＢＡＳＭＣ增殖。１０μｍｏｌ／ＬＮＥ和１μｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ可诱导最大增殖，增殖率分别为７７．８％和９７．９％，ＴＭＢ－８能浓度依赖性地抑制其作用，３０μｍｏｌ／ＬＴＭＢ－８的抑制率分别为４０．０％和５２．２％。

兔蛛网膜下腔出血后基底动脉平滑肌细胞的分离方法研究

目的建立一种快速、有效的分离兔蛛网膜下腔出血(SAH)后基底动脉平滑肌细胞(BASMCs)的方法。方法采用木瓜蛋白酶、二硫赤藓糖醇(DTE)、胶原酶(Ⅺ型)两步法急性分离兔SAH后BASMCs。利用倒置显微镜观察细胞数量及形态,台盼蓝法测定BASMCs成活率。结果分离出BASMCs的数量(40.33±10.18)个/200倍视野,镜下观察绝大多数平滑肌细胞呈长梭形,包膜完整光滑,细胞成活率为80%。结论该方法能快速、有效地分离BASMCs,并获得足够数量的细胞,为SAH后脑血管痉挛(CVS)BASMCs上离子通道的膜片钳研究创建了条件。

碱性成纤维细胞生长因子对动脉粥样硬化大鼠脑基底动脉血管内皮功能与结构的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠脑基底动脉血管内皮功能与结构的影响。方法将48只雄性Wistar大鼠随机平均分成正常对照组、AS组与bFGF治疗组。除正常对照组外,在喂食开始时一次性腹腔注射维生素D3(6×105IU/kg)加高脂配方饲料喂养,6周后bFGF治疗组采用腹腔注射bFGF(9.5μg/kg,2次/d)治疗,连续2周后处死。观察不同组离体基底动脉对不同浓度乙酰胆碱(Ach)的舒张反应率;光镜观察血管形态结构的变化;ELISA与比色法分别测定血管壁一氧化氮(NO)与血清血管内皮生长因子(VEGF)含量变化;MTT法测体外培养内皮细胞的增殖活性;鬼笔环肽染色观察培养平滑肌细胞骨架微丝的变化。结果高脂饲料饲养6周后早期动脉粥样硬化形成;与AS组相比,经bFGF治疗2周后基底动脉对不同浓度Ach舒张反应百分率、动脉管壁NO与血清VEGF含量明显升高(P<0.05);血管内皮细胞增殖活性也显著增强(P<0.05);平滑肌细胞骨架微丝损伤明显改善。结论 AS对基底动脉血管内皮造成了损伤,而bFGF参与了损伤动脉血管结构与内皮功能的调节,这些变化提示bFGF对脑血管具有明显的保护作用。

甲壳胺对AngⅡ所诱导的乳牛基底动脉平滑肌增殖的影响

本文采用血管紧张素 (Ang )所诱导的乳牛基底动脉平滑肌细胞 (BAVSMCS)增殖模型 ,以 MTT法观察甲壳胺对 BAVSMCS增殖的影响 ,[3 H]Td R掺入法观察甲壳胺对乳牛基底动脉平滑肌细胞 DNA的合成 ,还观察了甲壳胺对乳牛基底动脉平滑肌细胞总蛋白的影响。结果表明 :甲壳胺对 Ang 所诱导的BAVSMCS增殖有浓度和时间依赖性抑制作用 ;可浓度依赖性抑制 Ang 所诱导 BAVSMCS的 DNA合成增加作用 ;还可抑制 Ang 所诱导 BAVSMCS蛋白合成增多作用。提示甲壳胺可抑制 Ang 所诱导的 BAVSM-CS增殖作用。

后循环脑梗死患者椎基底动脉狭窄与血清生化指标相关性

目的分析后循环脑梗死(PCCI)患者椎基底动脉狭窄和血清生化指标的相关性。方法对100例PCCI患者的临床资料进行回顾性分析,依照椎基底动脉狭窄程度将患者分为不稳定斑块组(n=35)、稳定斑块组(n=36)和无斑块组(n=29)。对比3组患者临床一般情况,血清神经细胞因子水平,血清炎症因子水平,并分析PCCI患者椎基底动脉狭窄和血清生化指标的相关性。结果3组患者再次发病情况与NIHSS评分对比差异有统计学意义,不稳定斑块组高于其他2组(P<0.05),但稳定斑块组与无斑块组比较差异无统计学意义(P>0.05);3组患者脑源性神经营养因子(BDNF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、中枢神经特异蛋白(S100β)水平对比差异有统计学意义,不稳定斑块组BDNF低于稳定斑块组与无斑块组,不稳定斑块组NSE、S100β高于稳定斑块组与无斑块组(P<0.05),但稳定斑块组与无斑块组对比无差异(P>0.05);3组患者血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-37(IL-37)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、人软骨糖蛋白40(YKL-40)水平对比有差异,不稳定斑块组高于其它2组(P<0.05),但稳定斑块组与无斑块组比较差异无统计学意义(P>0.05);Pearson直线相关分析显示,椎基底动脉狭窄与BDNF呈负相关,与NSE、S100β、CRP、IL-37、TNF-α、VCAM-1、ICAM-1、YKL-40呈正相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,BDNF、NSE、ICAM-1、YKL-40是椎基底动脉狭窄的独立危险因素(P<0.05)。结论PCCI患者椎基底动脉狭窄程度越严重,再次发病率越高,对患者的神经功能影响越严重。同时血清相关神经细胞因子水平和炎症因子水平与椎基底动脉狭窄严重程度具有明显相关性,其中BDNF、NSE、ICAM-1、YKL-40可作为PCCI患者椎基底动脉狭窄预测的重要指标,因此临床上可以通过监测患者的血清相关生化指标为临床诊断及预后判断提供参考依据。

Rock信号通路参与TNF-α刺激兔基底动脉平滑肌增殖

目的探索Rock信号通路在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)引起兔基底动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用。方法组织块法原代培养兔基底动脉VSMCs,TNF-α刺激VSMCs,Rho激酶(Rho kinase,Rock)抑制剂Y-27632预处理,CCK-8法检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期,免疫细胞化学观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在VSMCs的定位及表达变化,Western blot法检测细胞PCNA表达量的变化。结果细胞培养24 h后,与阴性对照组比较,20 ng/mL TNF-α处理可以显著增加VSMCs的增殖率(P<0.01),PCNA蛋白表达显著增高(P<0.01),S期+G2/M期细胞比例明显增加(P<0.05);加入Y-27632预处理后,与20 ng/mL TNF-α处理组相比,VSMCs的增殖率受到显著抑制(P<0.01),PCNA蛋白表达明显减少(P<0.05),S期+G2/M期细胞比例明显减少(P<0.05)。结论 TNF-α可促进VSMCs增殖和细胞周期进程,Rock抑制剂可阻滞TNF-α对VSMCs的这一作用,Rock信号通路参与TNF-α诱导的VSMCs增殖和细胞周期进程加速。

尼莫地平对过氧化氢诱导猪脑基底动脉氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨尼莫地平对过氧化氢(H2O2)诱导猪脑基底动脉损伤的保护作用。方法:采用去内皮离体血管环灌流的方法,建立H2O2损伤模型。比较正常对照组,H2O2(2×10-4mol/L)损伤组,维生素C(10-4mol/L)组,尼莫地平高、中、低剂量(5×10-6、5×10-7、5×10-8mol/L)组血管环对KCl、苯肾上腺素的张力;检测各组血管组织匀浆中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量。结果:(1)H2O2损伤组与正常对照组比较,血管环对KCl、苯肾上腺素的收缩反应明显增加;尼莫地平高、中、低剂量组呈剂量依赖性抑制KCl、苯肾上腺素对血管环的收缩反应。(2)H2O2损伤组MDA含量升高,SOD、CAT、GSH-PX活性降低,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。尼莫地平高、中、低剂量均能降低组织中MDA含量,增强SOD、CAT、GSH-PX的活性,与H2O2损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:钙通道阻断剂尼莫地平具有抗氧化应激作用,能预防H2O2对脑基底动脉血管的氧化损伤。

消化法培养大鼠脑血管平滑肌细胞

目的建立大鼠基底动脉平滑肌细胞培养的方法。方法取大鼠基底动脉,剪成约0.2mm的小段,用含胶原酶Ⅱ型(0.5g.L-1)、弹性酶(0.15g.L-1)、透明质酸酶Ⅳ-S型(0.5g.L-1)及脱氧核糖核酸酶Ⅰ型(0.1g.L-1)的消化液在37℃消化1h。而后用含20%FCS的DMEM/F12进行培养。结果原代培养3d后细胞可少量贴壁,1wk左右可传代,细胞传代成活率达97%。光镜和免疫细胞化学染色检测第4代细胞纯度为98%。结论与目前国内培养脑血管平滑肌细胞的方法相比,本方法操作简单,培养周期短,细胞纯度高。

椎基底动脉狭窄与老年后循环脑梗死患者神经功能及血清炎症相关因子的关系

目的探讨椎基底动脉狭窄(VBAS)与老年后循环脑梗死(PCCI)患者神经功能和血清细胞间黏附分子(ICAM)-1、血管细胞黏附分子(VCAM)-1及人软骨糖蛋白-39(YKL-40)水平的关系。方法选择老年PCCI患者152例进行研究,根据CT血管造影的诊断结果将患者分成无斑块(NP)组38例、稳定性斑块(SP)组64例和不稳定性斑块(UP)组50例。对比各组临床症状和预后情况,并对比各组神经功能评分及血清S100β、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、ICAM-1、VCAM-1及YKL-40水平。结果 UP组后循环缺血短暂性脑缺血发作(TIA)、脑梗死(CI),头晕、双肢乏力及CI再发的发生率均显著高于NP组和SP组(P<0.05)。UP组的美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分明显高于NP组和SP组,简易精神状态量表(MMSE)评分、Barthel指数及欧洲脑卒中评分(ESS)均明显低于NP组和SP组(P<0.05)。UP组的血清S100β、NSE及GFAP水平均明显高于NP组和SP组,BDNF水平明显低于NP组和SP组(P<0.05)。UP组的血清ICAM-1、VCAM-1及YKL-40水平均明显高于NP组和SP组(P<0.05)。结论老年PCCI患者的神经功能以UP者相对较差,血清炎症相关因子水平呈上升状态,并可能参与了斑块的进展过程,临床上可通过监测血管造影结果及患者的神经功能、血生化指标帮助更全面地实施临床诊治及预后评判。

氯沙坦抑制ROS/ERK1/2信号途径减轻AGEs诱导的大鼠脑血管平滑肌细胞增殖

目的探讨果糖制备的糖基化终末产物(AGEs)对大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞(BASMC)的增殖以及氯沙坦对增殖的影响和机制。方法培养大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞,用CCK8法测定不同浓度(1,5,10μmol/L)氯沙坦对果糖制备的AGEs(200mg/L)预处理48h诱导血管平滑肌细胞增殖的影响。用western blotting检测AGEs以及氯沙坦处理后对ERK蛋白表达影响。结果 AGEs刺激血管平滑肌细胞增殖(0.827±0.069比0.364±0.052,P<0.01)。给予氯沙坦(5,10μmol/L)后,细胞增殖明显下降(0.658±0.064和0.381±0.058比0.827±0.069,P<0.01)。AGEs还使平滑肌细胞内活性氧簇(ROS)生成增多,并显著增加ERK1/2蛋白表达,氯沙坦则明显抑制ROS和ERK1/2蛋白水平。结论果糖制备的AGEs诱导脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖,氯沙坦可能通过阻断AT1受体而抑制ROS和ERK1/2表达,减少平滑肌细胞的异常增殖。