侧脑室周围白质软化症脑瘫儿童的临床特征

目的:探讨侧脑室周围白质软化症(periventricular leukomalacia,PVL)脑瘫患儿的临床及MRI特点。方法:从我院电子病历信息系统中回顾性提取自2011年1月1日至2021年12月31日在郑州大学第三附属医院儿童康复科住院康复的18岁以下脑瘫儿童信息,比较和分析头颅MRI表现为PVL脑瘫患儿的孕周、出生体重、分型、粗大运动功能分级(gross motor function classification system,GMFCS)、共患病等方面的不同。结果:共纳入2012例脑瘫患儿,进行头颅MRI检查并有结果记录者共1419例,PVL共645例(45.45%),早产417例(64.65%),低出生体重患儿375例(58.14%);在有PVL分级结果的321例患儿中,PVL分级为Ⅱ级者在孕周<32周脑瘫患儿中占比最高,为72.53%(8/77),孕周与PVL分级有统计学差异(P<0.01);在出生体重方面,PVL分级为Ⅱ级者在出生体重1500~2500 g及<1500 g脑瘫患儿中占比分别为71.21%(94/132)和62.5%(25/40),不同出生体重儿的PVL分级分布差异均有统计学意义(P<0.05)。在型别方面,痉挛型双瘫占比57.36%(370/645),痉挛型四肢瘫占比17.36%(112/645);在GMFCS分级方面,具有独走能力者占比65.89%(425/645)。在有PVL分级结果的321例患儿中,PVL为Ⅲ级者痉挛型偏瘫占比最高,为53.49%(46/86),在GMFCS分级方面,PVL分级为Ⅱ级者GMFCS为Ⅰ、Ⅱ级者占比最低,为48.84%(105/215),型别、GMFCS分级与PVL分级之间差异均有统计学意义(P<0.01);在共患病方面,最后一次随访年龄>4岁的有505例,其中共患智力障碍181例(35.84%),共患癫痫78例(12.09%),共患视力障碍71例(11.01%)。在有PVL分级结果的321例患儿中,PVL分级为Ⅱ级者共患癫痫及智力障碍率均最高,分别为17.03%(31/182)和40.16%(49/122),PVL分级与是否共患癫痫及智力障碍均存在统计学差异(均P<0.05),PVL分级与是否共患听力障碍、视力障碍均无统计学意义(P>0.05)。结论:头颅MRI为PVL的脑瘫患儿的孕周、临床表现、合并症呈现一定的特点,头颅MRI可以为围产期预防、临床早期诊断、早期干预及减少后遗症提供重要依据。

间充质干细胞在早产儿脑室周围白质软化的研究进展

脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia, PVL)是早产儿特有且最为严重的一种脑损伤形式之一。目前对早产儿脑损伤的治疗仍然主要是支持性的,在保护未成熟的大脑或修复损伤以改善长期预后方面疗效甚微。间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCS)是干细胞家族的重要成员,由于其多向分化潜能、免疫调节和分泌多种营养因子等特点,具有减少脑损伤的潜力,主要是通过抗炎和免疫调节机制,也通过它们释放神经营养或生长因子来促进内源性神经发生。本文就PVL的发病机制、病理特征以及间充质干细胞治疗效果背后的潜在机制进行综述。

DTI成像在早期诊断脑室周围白质软化症患儿发生痉挛型脑瘫中的应用

目的探讨扩散张量成像(DTI)在早期诊断脑室周围白质软化症(PVL)患儿发生痉挛型脑瘫(CP)中的应用价值。方法前瞻性纳入河南中医药大学第一附属医院2016-12—2020-11因运动发育落后行常规MRI和DTI检查并经MRI诊断为PVL的患儿,随访至2~5岁对所有入组患儿行运动发育评估。根据CP的诊断,将患儿分为痉挛型CP组及非CP组。测量并比较2组间各感兴趣区各向异性分数(FA)及表观扩散系数(ADC)值的差异。采用偏相关分析2组间差异有统计学意义的DTI参数与粗大运动功能分级(GMFCS)之间的相关性,采用ROC曲线分析DTI参数对痉挛型CP的诊断效能。结果共纳入PVL-痉挛型CP患儿及与之年龄匹配的PVL-非CP患儿各20例。双侧皮质脊髓束、内囊后肢及胼胝体压部的FA值下降为诊断痉挛型CP的重要影像学指标,与GMFCS呈负相关,三者联合诊断的AUC为0.94(95%CI:0.87~0.99),敏感度90%,特异度90%。结论DTI能定量评估PVL患儿白质神经纤维束的损伤程度并能早期识别痉挛型CP高危风险患儿。

天冬氨酸-谷氨酸载体1调节脑室周围白质软化早产鼠的髓鞘形成

背景:脑室周围白质软化是早产儿最严重的医疗并发症之一,目前尚无有效治疗措施。目的:探讨天冬氨酸-谷氨酸载体1(aspartate-glutamate carrier 1,AGC1)对脑室周围白质软化早产鼠髓鞘形成的调节作用。方法:60只出生后第2天雄性SD幼鼠随机分为假手术组和脑室周围白质软化组(n=30)。体外分离5只2日龄SD大鼠室周白质组织,制备白质祖细胞,建立实验性缺氧葡萄糖剥夺模型。分别在建立脑室周围白质软化、缺氧葡萄糖剥夺模型前,采用AGC1质粒(pcDNA3-AGC1)处理大鼠或细胞。在造模后不同时间点通过实时荧光定量PCR检测室周白质组织和细胞中AGC1表达。在脑室周围白质软化后14 d,采用免疫荧光法检测髓鞘碱性蛋白、别藻蓝蛋白表达,电子显微图像观察放射冠和胼胝体的超微结构。结果与结论:(1)在脑室周围白质软化后14 d,与假手术组相比,脑室周围白质软化组大鼠白质中髓鞘碱性蛋白表达、别藻蓝蛋白阳性少突胶质细胞数量以及有髓轴突数量显著减少(P<0.01);(2)与0 h相比,体内脑室周围白质软化开始后12-24 h时AGC1 mRNA表达显著升高(P<0.05),而在72 h-14 d时显著降低(P<0.05);(3)在体外对照条件下,与对照组相比,在缺氧葡萄糖剥夺后24-48 h时AGC1 mRNA表达显著升高(P<0.05),而在缺氧葡萄糖剥夺后7-14 d时AGC1 mRNA表达以及髓鞘碱性蛋白^(+)/AGC1^(+)少突胶质细胞形成显著降低(P<0.05);(4)pcDNA3-AGC1处理组在脑室周围白质软化后14 d处髓鞘碱性蛋白染色、别藻蓝蛋白阳性少突胶质细胞数量和有髓轴突数量比pcDNA3-NC对照组显著增多(P<0.05);(5)在体外实验中,增强AGC1表达进一步促进了缺氧葡萄糖剥夺后72h、7 d和14 d时少突胶质细胞前体细胞分化为髓鞘碱性蛋白^(+)/AGC1^(+)少突胶质细胞(P<0.05);提示脑室周围白质软化早产鼠模型和体外缺氧葡萄糖剥夺细胞模型中AGC1表达下调,通过上调AGC1可促进少突胶质细胞分化和髓鞘形成。

经脑室植入神经干细胞在脑室周围白质软化新生大鼠脑内的迁移分化

背景:对新生动物进行脑内神经干细胞移植,所植入神经干细胞的增殖、迁移、分化、轴突形成以及髓鞘化等能力,均远远高于成年动物。目的:对经脑室植入神经干细胞在脑室周围白质软化新生大鼠脑内的迁移分化功能进行观察,探讨神经干细胞移植对治疗早产儿脑室周围白质软化的可行性。方法:2日龄脑室周围白质软化新生大鼠在建模后72h进行经脑室神经干细胞移植。外源性神经干细胞用PKH26荧光素标记。脑立体定位仪下经脑室穿刺部位:前-后=1.5mm,中线-外侧=-2mm,深度=1.5mm;移植细胞浓度为5×1010L-1;移植总量为2μL;移植速度0.5μL/min。应用激光共聚焦显微镜分别对植入神经干细胞于植入后1,2,3,7,14,21d进行动态观察。并分别进行各分化细胞的免疫荧光分析。结果与结论:应用激光共聚焦显微镜对植入神经干细胞进行动态观察,证实经脑室植入的外源性神经干细胞在脑内具有良好的迁移能力,3d内大部分移行至脑室周围区域,并分布在损伤严重部位。2周左右,神经干细胞在脑室周围区域主要分化为OL前体,部分分化为神经元及星形胶质细胞。提示经脑室神经干细胞移植对早产儿脑室周围白质软化具有很大的治疗潜力。

人参皂苷Rd对新生鼠脑室周围白质软化模型学习记忆的影响

目的探讨外源性神经保护剂人参皂苷Rd对新生鼠脑室周围白质软化(PVL)动物模型学习记忆功能的影响,以期为临床应用人参皂苷Rd治疗早产儿PVL学习记忆功能提供实验依据。方法2021年6月选取实验动物为2日龄新生SD大鼠120只,将选取的实验SD大鼠全部合笼后按照随机化原则分为假手术组、PVL组(对照组)和PVL人参皂苷Rd干预组(人参皂苷Rd干预组),每组40只。通过结扎左侧颈总动脉合并缺氧(8%O 2+92%N 2)半小时制备PVL动物模型,于术后4、7、14 d观察3组大鼠脑室周围白质区病理改变,出生后30 d进行Morris水迷宫实验,探索3组大鼠学习记忆能力。结果假手术组大鼠术后4、7、14 d脑室周围白质区均未见异常病理改变;对照组大鼠术后4 d脑室周围白质区组织结构明显疏松,出现细胞肿胀、坏死、核固缩等;对照组和人参皂苷Rd干预组大鼠术后7 d脑室周围白质区均有液化性坏死灶及囊腔形成,左侧脑室稍扩大。对照组大鼠术后14 d左侧脑室进一步扩大,脑室周围白质区明显的软化灶;人参皂苷Rd干预组大鼠术后4~14 d脑室周围白质病变与对照组改变相似,但各时间点脑室周围白质病理改变均明显轻于对照组。3组大鼠出生后30 d同一训练时间逃避潜伏期比较,差异均有统计学意义(P<0.05);3组大鼠训练前3 d,训练第3、5天逃避潜伏期比较,差异均有统计学意义(P<0.05);3组大鼠第4、5天逃避潜伏期比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组大鼠在120 s内穿过圆圈的次数即穿环指数比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论人参皂苷Rd可减轻PVL大鼠脑室周围白质损害,改善PVL大鼠的学习记忆能力。

我国早产儿脑室周围白质软化发生率的多中心调查报告

目的在中华医学会儿科分会新生儿学组的发起下,国内十余家大型医院于2005年1月始进行了为期近两年的《早产儿脑损伤》多中心协作研究。该文报告我国10家三级甲等医院近两年对早产儿脑室周围白质软化(PVL)发生率的调查结果。方法2005年1月至2006年8月期间,各参加单位对所有胎龄<37周的早产儿在生后7d内常规进行初次床边头颅B超检查,以后每隔3～7d复查一次,直至出院。结果10单位共出生或收住早产儿4933例,总PVL发生率为2.3%(112/4933),囊性PVL发生率为0.3%(16/4933)。分别为Ⅰ级PVL85.7%(96/112),Ⅱ级PVL12.5%(14/112),Ⅲ级PVL1.8%(2/112),无IV级PVL。4家妇婴医院的早产儿PVL总发生率非常显著低于6家综合性或儿童专科医院(1.4%vs.2.8%)(χ2=10.284,P<0.01)。与发生囊性PVL相关的可能高危因素为阴道分娩和机械呼吸。结论该调查数据基本可以反映我国主要大城市早产儿PVL发生率的情况。提高对PVL尤其是非囊性脑室周围白质损伤的超声识别率,是今后临床要大力加强的重点。

经脑室神经干细胞移植对脑室周围白质软化新生大鼠的脑病理评估

目的对经脑室植入神经干细胞（NSCs）的脑室周围白质软化（Periventricular leukolamacia，PVL）新生大鼠进行光镜下脑病理评估，探讨NSCs移植对治疗早产儿PVL的可行性。方法采用E14胎鼠大脑皮层制备NSCs。2日龄新生大鼠随机分为PVL对照组（PVL组），PVL＋DMEM／F12培养基对照组（PVL＋DMEM／F12组），PVL＋神经干细胞（NSCs）移植组（PVL＋NSCs组），假手术对照组（Sham组），Sham＋DMEM／F12培养基对照组（Sham＋DMEM/F12组），Sham＋NSCs移植组（Sham＋NSCs组），每组18～21只。对2日龄PVL新生大鼠在建模后72h进行经脑室NSCs移植，分别于移植后7，14，21d进行光镜下脑病理评估。结果随着移植后时间的增加，脑白质病变呈进一步改善。移植后21d光镜下病理证实，未移植组脑白质呈轻度和重度病变各占50％，神经元病理评分为1．28±0．86。移植组则有30％白质完全正常，轻度和重度病变各占40％和30％，神经元病理评分为0．32±0．16，两组在脑白质病变程度以及神经元病理评分之间的差异均呈非常显著性意义（x^2=10．7，P〈0．01；F=29．664，P〈0．01）。结论经脑室外源性NSCs移植可明显改善脑白质的病理损伤。经脑室NSCs移植对早产儿PVL具有很大的治疗潜力，为今后成功防治早产儿这一最常见的脑损伤顽症提供了新的可行性途径。

脑瘫患儿脑室周围白质软化症的MRI特征探讨

目的探讨脑瘫儿童脑室周围白质软化症 (PVL)的MRI表现特点。方法回顾性分析 83例缺氧缺血性脑病导致PVL的脑瘫患儿 (其中早产 2 3例 )的临床资料和MRI表现。结果①PVL导致脑瘫儿童的MRI表现 :脑白质减少主要发生在侧脑室三角区 体部周围及半卵圆中心 ;脑白质信号异常主要发生在侧脑室三角区、体部周围和半卵圆中心 ;脑室扩大变形 ;脑沟裂池扩大增宽 ;胼胝体异常。其他MRI的异常表现为脑皮层萎缩软化和基底节变性。②早产儿和足月儿PVL的不同MRI特点 :早产儿和足月儿在脑白质区出现长T1、明显长T2信号的软化、囊变灶和脑室变形 (脑室边缘凹凸不平 )等均有显著性差异。结论MRI可清晰显示脑瘫患儿PVL的MRI特点、病变程度、范围以及早产儿与足月儿PVL的不同之处。早产儿发生PVL的程度较足月儿重 ,易出现侧脑室旁脑白质的长T1、明显长T2信号的软化、囊变灶及侧脑室不规则扩大。

脑室周围白质软化新生大鼠模型的创建及所伴随的白内障病变

目的创建与人类早产儿脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia,PVL)病理相似的可靠PVL动物模型,并探索本PVL模型所伴随的白内障病变及其形成机制。方法新生大鼠分为PVL组和假手术对照组,通过双侧颈总动脉结扎和8%低氧下缺氧30min,建立PVL动物模型。分别于术后1d进行脑片TTC染色以观察脑梗死情况,术后2d和21d进行光镜下脑病理检查,以及术后21d进行眼部裂隙灯检查和光镜下眼球病理检查。结果脑片TTC染色显示PVL新生大鼠脑组织呈现大面积白色梗死区,其梗死体积达(53.45±33.90)mm3,梗死百分比为(24.98±15.44)%。光镜下病理研究证实,术后2d的PVL新生大鼠脑室周围以及皮层下白质呈现囊性坏死和细胞凋亡,皮质神经元损伤轻微。术后21d,其脑室周围以及皮质下白质可见多个囊性疏松坏死区域形成。相应日龄假手术组大鼠脑组织内则未观察到明显病理改变。术后21d后,肉眼及裂隙灯下均观察到PVL组所有幼鼠双眼均呈现白内障,光镜下显示球后组织无明显病理改变。假手术组幼鼠眼部均正常。结论通过对2日龄新生大鼠进行双侧颈总动脉结扎伴缺氧,成功创建了与人类早产儿PVL病理相似的PVL动物模型,效果肯定,重复性好。同时本建模方法也可引起白内障病变,可作为制作白内障动物模型的推荐方法之一。

脑室周围白质软化症在脑性瘫痪发病中的意义

目的:探讨脑室周围白质软化(PVL)与脑瘫的临床关系。方法:回顾性分析了头颅MRI表现为脑室周围白质软化的62例脑瘫患儿的病因、临床分型及并发症。结果:62例脑瘫患儿中早产38例(53.2%),足月23例(37.1%),过期产1例(1.6%),引起PVL原因除了早产和低出生体重外,围产期缺氧窒息为主要原因,尤其是足月儿(占78.3%)。临床分型以痉挛型双瘫(占53.2%)和四肢瘫(占24.5%)为主。视力障碍、听力障碍、智力低下、小头畸形及癫痫发生率分别为50%、9.7%、83.7%、3.5%和12.9%。结论:PVL脑瘫患儿并发症的发生率较高,除视力障碍外,早产儿和足月儿上述并发症的发生率差异无显著性意义。

早产儿脑室周围白质软化危险因素分析

目的调查6年来早产新生儿发生脑室周围白质软化(PVL)的危险因素。方法以2002年8月-2008年11月经头颅B超或MRI诊断为PVL的患儿为研究组,按1∶2数量配对抽取入院日期最接近,入院日龄、胎龄、出生体质量相近、诊断为早产儿脑室周围强回声(PVE)的早产儿(PVE组)和无相应神经系统检查异常发现的早产儿(正常对照组)为研究对象,对PVL危险因素进行分析。结果单因素分析显示,与正常对照组相比,PVL组和PVE组新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)(50%比12.5%,χ2=10.000,P=0.002;32.5%比12.5%,χ2=4.588,P=0.032)和肺部合并症(30.0%比5.0%,P=0.013;22.5%比5.0%,χ2=5.165,P=0.023)发生率较高;使用呼吸支持频率高(85.0%比27.5%,χ2=17.712,P<0.001;52.5%比27.5%,χ2=5.208,P=0.022);PVL组呼吸支持频率高于PVE组(85.0%比52.5%,χ2=6.065,P=0.014)。PVL组24h内最低PaCO2低于正常对照组[(33.5±7.5)mmHg比(42.0±9.8)mmHg,LSD=8.578,P=0.003],24h内最低pH值高于PVE组(7.326±0.129比7.254±0.092,LSD=0.072,P=0.008),颅内出血发生率较PVE组和正常对照组高(30%比5%,P=0.013;30%比2.5%,P=0.004)。多因素分析发现,围生期/出生早期感染、呼吸支持、24h内最低PaCO2和颅内出血是PVL发生的主要高危因素,其OR值(95%CI)分别为5.745(0.778,42.430)、9.370(2.168,40.504)、0.937(0.872,1.007)、1.826(1.083,3.077)。结论早产儿PVL致病因素复杂,围生期/出生早期感染、呼吸支持、24h内最低PaCO2和颅内出血是重要原因,有待进一步加强围产期保健,提高危重症患儿治疗水平,以减少PVL的发生。

未成熟大鼠实验性脑室周围白质软化动物模型的建立及评价

目的建立2日龄SD大鼠脑室周围白质软化(PVL)动物模型,并进行评价。方法2日龄SD大鼠65只,随机分为PVL组和对照组。PVL组行右侧颈总动脉结扎手术,6%氧、94%氮混合气体处理4 h,分别在缺氧后72 h,14及28 d处死;对照组行假手术,不进行缺氧处理,时间段与PVL组配对。模型评价方法:常规HE染色及电镜检查;免疫组化学观察PVL72 h组胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、β淀粉样前体蛋白(-βAPP)、O4和PVL 14 d组髓磷脂碱性蛋白(MBP)改变;采用悬吊、倾斜板、旷场和圆筒试验对术后28 d大鼠进行神经行为学检测。结果HE染色和电镜显示PVL组早期右侧侧脑室周围脑白质损害,远期并脑室扩大,髓鞘减少。免疫组织化学显示PVL组大鼠白质GFAP和-βAPP阳性染色A值较对照组明显增强,GFAP阳性细胞平均直径较对照组增大;PVL组大鼠MBP阳性染色较对照组减弱;O4阳性标记的异常细胞数较对照组增多。神经行为学检测PVL组与对照组织比较有明显异常。结论2日龄SD大鼠右侧颈总动脉结扎-缺氧模型符合PVL病理及行为改变。

中国人群早产儿脑室周围白质软化危险因素的meta分析

目的探讨中国人群早产儿发生脑室周围白质软化的主要危险因素,为今后防治工作提供依据。方法利用meta分析方法分析国内14篇关于早产儿脑室周围白质软化危险因素的研究文献。累计病例748例,对照3 366例。根据齐性检验结果选择计算各危险因素合并比值比(OR)及其95%可信区间(95%CI)模型。结果脑室周围白质软化发生的OR值(95%CI)分别为:产前使用激素0.46(0.34～0.61),胎膜早破3.60(1.40～9.24),胎龄5.05(2.66～9.58),低出生体质量2.78(2.30～3.35),重度窒息5.35(2.09～13.68),感染4.46(3.08～6.44),机械通气3.67(1.74～7.72),低碳酸血症4.49(2.03～9.94),脑室内出血2.00(1.15～3.45),酸中毒1.58(1.19～2.08)。结论胎膜早破、胎龄、低出生体质量、重度窒息、感染、机械通气、低碳酸血症、脑室内出血和酸中毒是中国人群早产儿脑室周围白质软化发病的主要危险因素,产前使用激素可能为脑室周围白质软化的保护因素。

氢质子磁共振波谱在早产儿脑室周围白质软化的早期预测价值

目的:探讨氢质子磁共振波谱(1H-MRS)在早产儿脑室周围白质软化(PVL)早期预测的价值。方法:对29例经常规MRI随访证实的早产儿PVL患者(病例组)和同期29例经常规MRI随访证实颅脑正常的早产儿(对照组)的头颅1H-MRS检查测得的代谢物NAA/Cr、Cho/Cr、Lac/Cr、Glx/Cr、mI/Cr进行比较和统计学分析。两组头颅1H-MRS均采用点分辨波谱(PRESS)序列,运用化学位移成像(CSI)技术行多体素检查,扫描野主要包括两侧侧脑室前后角周围白质,1H-MRS检查及首次常规MRI检查在出生后3～5天内完成,2次常规MRI随访分别在出生后第4周、8周或12周完成;用独立两样本t检验分析病例组与对照组各种代谢物比值的差异。结果:两组中均见明显的NAA、Cho、Cr、mI峰,其中Cho常为最高峰。29例病例组中,20例见较明显的Lac峰,6例见低平的Lac峰,3例未检测到Lac;18例见明显的Glx峰,10例见低平Glx峰,1例未检测到Glx峰。29例对照组中,26例见低平的Glx峰,15例见低平的Lac峰。病例组Lac/Cr、Glx/Cr明显高于对照组,差异有统计学意义(P值分别为0.005和0.002);两组间NAA/Cr、Cho/Cr、mI/Cr差异均无统计学意义(P值分别为0.24、0.18和0.17)。结论:早产儿PVL患者早期头颅1H-MRS有特征性,Lac/Cr、Glx/Cr升高可预测PVL的发生,为临床早期干预提供帮助。

胶质细胞源性神经营养因子联合神经干细胞移植治疗脑室周围白质软化新生大鼠的疗效观察

目的探讨在移植物中加入胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF),能否增强外源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)经脑室移植治疗脑室周围白质软化(periven-tricular leukomalacia,PVL)新生大鼠的移植效果。方法采用E14胎鼠大脑皮质制备NSCs。2日龄新生大鼠随机分为PVL对照组(PVL组),PVL+NSCs移植组(PVL+NSCs组),PVL+NSCs移植+GDNF组(PVL+NSCs+GNDF组),假手术对照组(Sham组),Sham+NSCs移植组(Sham+NSCs组),以及Sham+NSCs移植+GDNF组(Sham+NSCs+GDNF组)。对PVL新生大鼠在建模后72h进行立体定位仪下经脑室NSCs移植,分别于移植术后7、14、21d进行免疫荧光、光镜及电镜病理检测,评估在NSCs中加入GDNF对移植效果的可能影响。结果经脑室植入的外源性NSCs在脑内具有良好的迁移能力,3d内大部分移行至脑室周围,2周左右在脑室周围主要分化为少突胶质细胞前体,部份分化为神经元及星形胶质细胞。三种分化细胞在加入GDNF移植组显著多于未加GDNF移植组(P均<0.05)。移植后21d光镜下脑病理显示,两个移植组的脑白质病理均获明显改善,尤其加入GDNF移植组的脑白质重度病变发生率较未加GDNF移植组下降了25.5%(P<0.01)。移植后21d的电镜显示,PVL组罕见髓鞘形成,两个移植组的髓鞘形成明显增加,尤其加入GDNF移植组的髓鞘形成明显多于未加GDNF移植组。结论在外源性NSCs移植物内加入GDNF,可明显增强NSCs经脑室移植治疗PVL新生大鼠的移植疗效。

构建以少突胶质细胞前体为主与人类早产儿脑室周围白质软化病理相似的动物模型

目的:建立以晚期少突胶质细胞前体为主、与人类早产儿脑室周围白质软化病理相似的可靠动物模型。方法:实验于2005-10/2006-06在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心完成。2d龄和7d龄SD同窝清洁级新生大鼠各43只,雌雄不拘,以随机数字表法分为4组,即2d龄模型组(n=25)、2d龄假手术组(n=18)、7d龄模型组(n=25)和7d龄假手术组(n=18),脑室周围白质软化动物模型建立:结扎双侧颈总动脉,手术时间短于10～15min,术后将新生大鼠送入缺氧箱缺氧30min,混合气体为体积分数0.08的O2和0.92的N2,输入流量为1～2.5mL/min。假手术组游离双侧颈总动脉,但不予结扎和缺氧。将各组大鼠分别于术后1d测定脑梗死体积,术后2d进行少突胶质细胞系列免疫组织化学染色分析、脑片TTC染色观察脑梗死情况以及光镜下脑病理研究,术后21d进行电镜下病理研究。结果:实验86只新生大鼠,14只制作脑室周围白质软化模型死亡,余72只计入统计。①术后1d各组脑片大体观察:模型组脑内呈现大面积白色梗死区,多为大脑前、中动脉供血区域,2,7d龄模型组梗死体积分别为(53.45±33.90),(68.78±20.22)mm3,梗死百分比分别为(24.98±15.44)%,(11.84±4.14)%;假手术组脑片颜色鲜红,未见白色梗死区。②新生大鼠少突胶质细胞系列标志物免疫组织化学结果:2d龄新生大鼠脑白质内以少突胶质细胞前体为主,7d龄新生大鼠则以成熟少突胶质细胞为主。模型大鼠的相应少突胶质细胞系列阳性标记物的积分吸光度值均显著低于同日龄对照新生大鼠(P<0.05～0.01)。③各组大鼠术后2d光镜下脑病理检查结果:2d龄模型组新生大鼠的脑室周围以及皮层下白质呈现囊性坏死和细胞凋亡,而皮质神经元损伤轻微;而7d龄模型组在白质和皮质部位均呈明显损伤。④术后21d电镜下各组幼鼠脑病理检查结果:2d龄模型组幼鼠的脑白质内未见髓鞘形成,7d龄模型组幼鼠中见少量髓鞘形成,而同日龄假手术对照幼鼠的脑白质内则髓鞘形成正常。结论:通过对2d龄新生大鼠双侧颈总动脉结扎伴缺氧30min缺氧缺血法创建的脑室周围白质软化新生大鼠模型中存在少突胶质细胞前体和少突胶质细胞的明显受损和丢失,成功建立了2d龄新生大鼠以少突胶质细胞前体为主、与人类早产儿脑室周围白质软化病理相似的脑室周围白质软化动物模型。

谷氨酸受体2和钙离子在新生大鼠脑室周围白质软化症发病机制中的作用探讨

目的观察α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(α-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionie acid,AMPA)受体亚单位谷氨酸受体2(GluR2)在2日龄缺氧缺血新生鼠脑白质中的表达,并检测脑白质细胞内游离Ca2+浓度在缺氧缺血后不同时间点的变化及其意义。方法建立2日龄SD大鼠缺氧缺血脑室周围白质软化(periventricular leukomalacia,PVL)模型,分别应用荧光定量PCR和Western Blot检测脑白质缺氧缺血后12,24,48h和72h GluR2mRNA和蛋白表达的变化;用Furo2/AM荧光探针和双波长荧光分光光度计分别检测脑白质细胞内游离Ca2+浓度。结果与对照组相比,PVL组大鼠脑白质GluR2mRNA和蛋白含量在缺氧缺血后24h开始降低,并持续降低至72h(P<0.05);PVL组大鼠脑白质细胞内游离Ca2+浓度在缺氧缺血后12h开始升高,持续增高至72h(P<0.05)。结论GluR2表达减少可能导致脑白质细胞内钙离子超载,引起细胞损害。

经脑室神经干细胞移植治疗脑室周围白质软化新生大鼠电镜下脑病理评估

目的对经脑室植入神经干细胞(NSCs)的脑室周围白质软化(PVL)新生大鼠进行电镜下脑病理和髓鞘形成评估,探讨NSCs移植对治疗早产儿PVL的可行性,以及胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对NSCs治疗PVL的影响。方法采用颈部正中切开双侧颈总动脉结扎法制备PVL模型。采用孕14 d SD大鼠大脑皮质制备NSCs。2日龄新生大鼠随机分为PVL对照组(PVL组),PVL加NSCs移植组(PVL加NSCs组),PVL加NSCs移植及GDNF组(PVL加NSCs加GDNF组),假手术对照组(Sham组),Sham加NSCs移植组(Sham加NSCs组),以及Sham加NSCs移植及GDNF组(Sham加NSCs加GDNF组)。NSCs移植组将NSCs调整为5×107L-1,将2μL移植液以0.5μL/min注入侧脑室内。GDNF干预组以100μg/L GDNF加入NSCs移植液中注入侧脑室。对2日龄PVL新生大鼠在建模后72 h进行经脑室NSCs移植,分别于移植第21天行电镜下脑病理和髓鞘形成评估。结果移植第21天,电镜显示,PVL组可见部分神经元固缩变形,细胞器减少,罕见髓鞘形成。PVL加NSCs组皮质部位神经元形态基本正常,脑白质内髓鞘形成明显增加。PVL加NSCs加GDNF组皮质改善以及髓鞘形成增多情况较PVL加NSCs组则更为明显。假手术各组未见明显变化。结论经脑室NSCs移植对早产儿PVL具有很大的治疗潜力,GDNF可能具有增强NSCs的治疗作用。

新生儿脑室周围白质软化症(讲座)

自1962年Banker和Larroche命名脑室周围白质软化症(periventricular leakomalacia,PVL)以来,随着围产医学的进步,早产儿存活率虽已显著提高,但大量的研究证明,PVL已成为早产儿脑性瘫痪、智能低下等神经后遗症的主要原因之一而日益受到关注。门井氏报告早产儿脑性瘫痪病因中PVL占86.3％,而脑室周围出血(PVH)仅占13.7％。近十年由于超声波(US)、CT及磁共振(MRI)等影像技术的发展,结合病理研究,对PVL的认识不断加深。