蛋白激酶C激动剂和抑制剂对溶血磷脂酰胆碱引起脑微血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)激动剂与抑制剂对溶血磷脂酰胆碱 (LPC)引起脑微血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 在建立了LPC引起牛脑微血管平滑肌细胞 (BCMSMC)增殖模型基础上 ,以结晶紫染色法测定PKC激动剂phorbol 12 myristate13 acetate(PMA)和抑制剂 1 (5 isoquninolinesulfonyl) 2 methylpiperatinehydrochloric(H7)对平滑肌细胞增殖的影响。结果 PMA时间依赖性和剂量依赖性地使LPC引起BCMSMC增殖率显著增高 ,H7非常显著地降低了LPC引起的BCMSMC增殖率 ,亦呈时间依赖性和剂量依赖性。结论 LPC对BCMSMC增殖作用与PKC信号转导系统有相关性。

甘糖酯对培养的牛脑微血管平滑肌细胞增殖的影响

应用牛脑微血管平滑肌细胞(BCMSMCs)体外培养技术,观察了酸性多糖药物甘糖酯(PGMS)对10％小牛血清(FCS)、白细胞介素1(IL-1)致BCMSMCs过度增殖的影响。将培养的5～8代细胞接种于96孔板,正常组加入含10％FCS的MEM培养液(或含有50u/ml IL-1的0.4％FCS培养液),给药组分别加入含有PGMS0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mg/ml浓度的10％FCS培养液(或50u/ml IL-1的0.4％FCS培养液),以结晶紫染色,MTT比色,测定72h后细胞生长情况。结果显示,与10％FCS组和IL-1组比较,PGMS组BCMSMCs的增殖受到明显抑制(P<0.01),提示PGMS对10％FCS和IL-1引起的BCMSMCs异常增殖具有明显的抑制作用。

miR-145靶向抑制MMP-9表达对大鼠脑动脉血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的观察miR-145对大鼠脑动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法利用组织贴块法分离大鼠脑基底动脉VSMC,将细胞分为3组,对照组转染空载体;miR-145组转染miR-145;miR-145+MMP-9组转染miR-145后再转染MMP-9。采用q PCR方法检测各组MMP-9 mRNA表达,Western blotting法检测MMP-9蛋白表达。向三组细胞中加入50 ng/mL TNF-α刺激细胞增殖,采用CCK8法检测细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞迁移能力。根据Target Scan和miRanda数据库预测,野生型MMP-9的3'-UTR区域含有miR-145靶向结合片段,采用双荧光素酶报告基因检测验证miR-145和MMP-9的靶向关系。结果 miR-145组MMP-9 mRNA和蛋白表达均低于对照组(P均<0.05),miR-145+MMP-9组MMP-9 mRNA和蛋白表达均高于miR-145组(P均<0.01)。加入TNF-α处理后,miR-145组的细胞增殖OD值低于对照组,miR-145+MMP-9组的细胞增殖OD值高于miR-145组(P均<0.01);miR-145组细胞迁移数低于对照组,miR-145+MMP-9组细胞迁移数高于miR-145组(P均<0.01)。双荧光素酶报告检测结果显示,miR-145能够抑制野生型MMP-9的荧光素酶活性(P<0.01),但不能抑制突变型MMP-9的荧光素酶活性。结论 miR-145能够通过下调MMP-9抑制TNF-α诱导的大鼠脑动脉VSMC增殖和迁移。

低氧条件下大脑皮层微血管平滑肌细胞内皮细胞中[Ca^(2+)]_i变化的研究

目的和方法：本研究采用离子探针Ｆｕｒａ２／ＡＭ 结合计算机图象分析技术，并通过施加ＮＯ合酶抑制剂ＬＮＮＡ和ＮＯ的作用靶———鸟苷酸环化酶（ＧＣ）的抑制剂美兰（Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｂｌｕｅ；ＭＢ），观察经培养的大鼠大脑皮层微血管内皮细胞和平滑肌细胞中的［Ｃａ２＋］ｉ 在低氧作用后的变化以及与有关血管舒张因子ＮＯ和ｃＧＭＰ之间的关系。结果：低氧时大脑微血管内皮细胞和平滑肌细胞内的Ｃａ２＋ 浓度有所下降，变化幅度的大小与低氧的程度及低氧作用的时间有关，且可以被ＬＮＮＡ和ＭＢ所抑制。结论：低氧时大脑微血管的舒张反应与ＮＯ的产生有关，ＮＯ通过细胞内的多种机制，最终使得胞内Ｃａ２＋

微血管内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互调节

研究常氧下微血管内皮细胞(MVEC)与肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的相互调节。先滤膜培养大鼠肺微血管内皮细胞(LMVEC)后,再与PASMC复合培养,采用流式细胞仪检测PASMC周期的变化。复合培养后,正常情况下使PASMC的G1期细胞数减少,S+G2/M期细胞数增多,即促进细胞生长;使LMVEC的 G1期细胞数增多,S+G2/M期细胞数减少,即抑制细胞生长。可见,MVEC与PASMC复合培养后,常氧下促进PASMC细胞生长,抑制LMVEC的增生,存在相互作用。

黄芪甲苷配伍三七总皂苷对OGD/R大鼠脑微血管内皮细胞增殖、凋亡及线粒体功能的影响

目的观察黄芪甲苷(AST IV)配伍三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)增殖、凋亡及线粒体功能的影响。方法差速密度梯度离心法提取BMECs,免疫荧光检测血管性血友病因子(vWF)表达对细胞进行鉴定,取第3代BMECs,采用AST IV与PNS高(100μmol/L+60μmol/L)、中(50μmol/L+30μmol/L)、低(25μmol/L+15μmol/L)剂量配伍预处理24 h,以OGD/R建立缺血再灌注损伤模型,同时设立正常组和模型组。CCK8法测定细胞增殖情况,LDH漏出率检测细胞损伤,AnnexinⅤ/PI双染检测细胞凋亡,TraKineTMPro活细胞线粒体染色试剂盒对线粒体进行染色,激光共聚焦观察线粒体结构,JC1染色测定线粒体膜电位变化情况。结果成功培养分离BMECs,阳性表达vWF,与正常组比较,模型组细胞存活数量明显减少(P<0.05),LDH漏出率显著增加(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01);与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍均能促进BMECs增殖、抑制LDH的释放和抑制细胞凋亡(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组线粒体荧光强度明显降低,分布不均;与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍组深红色荧光强度有所增强。与正常组比较,模型组线粒体膜电位水平下降(P<0.01),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍组线粒体膜电位明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论 AST IV配伍PNS在体外能促进缺血再灌注模型BEMCs细胞增殖,抑制细胞凋亡,降低LDH漏出率,其机制与保护线粒体,增加线粒体膜电位有关。

补阳还五注射液对溶血卵磷脂引起脑微血管细胞增殖和损伤的保护作用

目的：用溶血卵磷脂（ＬＰＣ）引起的脑微血管平滑肌细胞（ＣＭＳＭＣ）增殖和内皮细胞损伤（ＣＭＥＣ）模型，研究补阳还五注射液的抗动脉粥样硬化（ＡＳ）药理作用。方法：用结晶紫染色法测定ＣＭＳＭＣ的增殖，乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放量测定ＣＭＥＣ的损伤。结果：补阳还五注射液呈剂量依赖性地显著降低了ＣＭＥＣ的ＬＤＨ释放量和ＣＭＳＭＣ的吸光度（ＯＤ）值。结论：补阳还五注射液对ＬＰＣ引起的ＣＭＥＣ损伤有保护作用。

miR-181a调控sirt1对缺氧条件下大鼠脑微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探究miR-181a对缺氧条件下大鼠脑微血管内皮细胞(rBMECs)增殖、凋亡的影响及可能的作用机制。方法取对数生长期的rBMECs分为对照组、模型组、NC inhibitor组、miR-181a inhibitor组、miR-181a inhibitor+si-NC组、miR-181a inhibitor+si-SIRT1组。体外模拟脑缺氧微环境,qRT-PCR法检测6组细胞中miR-181a和沉默信息调节因子1(SIRT1)mRNA的表达;MTT法、流式细胞术分别检测6组细胞增殖、凋亡情况;荧光分光光度计检测6组细胞荧光强度,并通过计算透过Transwell小室的异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)的浓度评价rBMECs的屏障功能;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平;Western blot检测血管内皮钙粘蛋白(VE-cadherin)、SIRT1和凋亡相关蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组rBMECs中miR-181a的表达、细胞凋亡率、FITC-Dextran浓度、ROS、MDA水平、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达显著升高(P<0.05),SIRT1 mRNA和蛋白表达、细胞增殖率、SOD、GSH水平、VE-cadherin、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,miR-181a inhibitor组细胞中miR-181a的表达、细胞凋亡率、FITC-Dextran浓度、ROS、MDA水平、Bax、Caspase-3表达明显降低(P<0.05),SIRT1 mRNA和蛋白表达、细胞增殖率、SOD、GSH水平、VE-cadherin、Bcl-2表达明显升高(P<0.05);使用si-SIRT1干扰SIRT1的表达能明显逆转miR-181a inhibitor对缺氧诱导的rBMECs增殖、凋亡及屏障功能的作用。结论下调miR-181a的表达可促进缺氧诱导的rBMECs增殖、抑制rBMECs凋亡;其作用机制可能与上调SIRT1的表达有关。

胶质细胞对共培养的脑微血管内皮细胞增殖及功能的影响

目的研究体外培养条件下,胶质细胞对脑微血管内皮细胞(BMEC)增殖及功能的影响。方法模拟血脑脊液屏障结构及内皮细胞、胶质细胞间相互影响的途径,建立内皮细胞与胶质细胞共培养模型,采用细胞计数、细胞活性检测、酶含量与细胞吞饮量测定对内皮细胞增殖和功能进行研究。结果共培养和条件培养时,内皮细胞增殖能力减弱,细胞活性以及酶含量增高,细胞吞饮量则无明显变化。结论胶质细胞可通过两种途径影响内皮细胞的生长。胶质细胞可诱导和维持微血管内皮细胞的脑表型,但并不能促进内皮细胞生长。

肾上腺髓质素2对大鼠脑微血管内皮细胞增殖的影响

目的:研究肾上腺髓质素2(AM2)对大鼠脑微血管内皮细胞增殖的影响。方法:分离并培养SD大鼠脑微血管内皮细胞,经Ⅷ因子相关抗原的抗体鉴定和常规处理后,随机分为对照、AM2(10-7mol/L1、0-8mol/L和10-9mol/L)、ADM、ADM+AM2、10%胎牛血清和10%胎牛血清+AM210-7mol/L等8组,以[3H]-TdR掺入法测定MEC增殖反应。结果:10-7-10-9mol/L各浓度AM2、ADM以及AM2和ADM合用对于静止状态的脑微血管内皮细胞[3H]-TdR掺入与对照组比较均无明显差异(均P>0.05)。10%胎牛血清刺激组脑微血管内皮细胞[3H]-TdR掺入比对照组高87.5%(P<0.05),10-7mol/L AM2抑制胎牛血清诱导的脑微血管内皮细胞[3H]-TdR掺入增加(P<0.05)。结论:AM2抑制血清诱导的脑微血管内皮细胞增殖。

布美他尼对大鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤后增殖的影响

目的观察钠-钾-氯共转运体1(Na+-K+-2Cl-cotransporter 1,NKCC1)抑制剂布美他尼(Bumetanide)对脑微血管内皮细胞(BMEC)缺氧损伤后增殖的影响。方法将原代培养的大鼠BMEC分为3组:对照组、氧糖剥夺/复氧(OGD/Reo)组和OGD/Reo+Bumetanide(10μmol/L)组。在氧糖剥夺/复氧6、12、24和48h时,用MTT法检测细胞活力,Edu染色以及流式细胞术检测细胞增殖及细胞周期情况。结果氧糖剥夺/复氧6、12、24h,BMEC活力下降,Edu染色阳性率减少且S期细胞减少。而与OGD/Reo组相比,OGD/Reo+Bumetanide组BMEC活力增加[复氧6h:(0.497±0.039)vs.(0.612±0.044)],Edu染色阳性率增加[6h时:(5.742±0.195)%vs.(7.125±0.144)%],且S期细胞增多[6h时:(5.845±0.389)%vs.(7.124±0.542)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论布美他尼可促进缺氧损伤后BMEC的活力及细胞增殖,提示NKCC1通路在BMEC缺氧损伤后的细胞增殖中发挥了重要作用。

脑微血管内皮细胞对体外缺氧神经干细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察脑微血管内皮细胞对体外培养缺氧神经干细胞增殖、凋亡的影响。方法:实验于1996-01/1996-12在佳木斯大学神经科学所完成。实验材料:同一基因背景新生的Wistar大鼠由哈尔滨医科大学实验动物学部提供(黑动字第99102001)。实验方法:①取新生24hWistar大鼠大脑培养神经干细胞,采用免疫组织化学方法鉴定神经干细胞。②取出生1～7dWistar大鼠大脑培养脑微血管内皮细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定。③将培养传代纯化的脑微血管内皮细胞,用0.25%胰酶消化成单细胞液后接种于涂有多聚赖氨酸包被的盖玻片上,接种传3代后用胰酶消化的神经干细胞,以1∶10接种比例加入神经细胞完全培养液共培养。④用无菌石蜡油覆盖于低糖细胞培养液表面,制备低氧低糖溶液。对照组:正常神经干细胞置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养。缺氧共培养组:取共培养3d细胞,吸出培养液,用无菌Hank’s缓冲液清洗2次,加入低氧低糖溶液共同作用2,4,8,16h后换液,用PBS缓冲液冲洗3次后,换神经细胞完全培养液,置于细胞培养箱中复氧培养。缺氧单纯神经干细胞组:取传3代神经干细胞,用无菌Hank’s缓冲液清洗2次后,方法同上。实验评估:免疫组织荧光鉴定缺氧条件下神经干细胞的增殖与凋亡。结果:①免疫组织化学方法检测Nestin及Ⅷ因子相关抗原分别鉴定为神经干细胞及脑微血管内皮细胞。②对照组细胞胞体饱满,折光性强,周围有光晕。缺氧单纯神经干细胞组细胞胞体肿胀,折光性差,有大量细胞碎屑,仅有少量活细胞,并出现悬浮死细胞。缺氧共培养组细胞形态有所改善,细胞折光性仍较好,大部分细胞突起仍未见回缩,仅少数细胞肿胀,坏死。③随着缺氧时间的延长,细胞死亡明显增多,存活数明显下降。缺氧共培养组细胞存活数明显高于缺氧单纯神经干细胞组与对照组(321.76±22.20,180.00±17.89,255.33±10.33,P<0.01)。④缺氧条件下脑微血管内皮细胞对神经干细胞增殖及凋亡的影响:缺氧共培养组细胞存活数明显高于缺氧单纯神经干细胞组,细胞凋亡细胞数低于缺氧单纯神经干细胞组(P<0.05)。结论:脑微血管内皮细胞可以促进缺氧神经干细胞的增殖、减少其凋亡。

单核细胞增多性李斯特菌对人、鼠脑微血管内皮细胞黏附、侵袭、增殖差异性分析

为探究单核细胞增多性李斯特菌（LM）不同菌株对脑微血管内皮细胞黏附,侵袭以及在细胞内增殖的差异,本实验利用LM90SB2、LM3、LM4,塞氏李斯特菌（L.seeligeri）,无害李斯特菌（L.innocua）感染脑微血管内皮细胞,采用BHI平板计数,测定细菌黏附率、侵袭率及不同时间细胞内增殖情况。结果表明：LM90SB2、LM3、LM4对脑微血管内皮细胞黏附率为3.14%～7.83%,统计学分析其差异不显著;LM90SB2、LM3、LM4对人/鼠脑微血管内皮细胞侵袭率（0.036%～0.128%）均大于L.seeligeri（0.0315%、0.00148%）,L.innocua不侵袭脑微血管内皮细胞。LM90SB2、LM3、LM4对人/鼠2种细胞的侵袭率存在显著差异（P〈0.05）,临床分离株LM90SB2增殖速度、菌量及持续时间明显高于其它菌株。以上结果提示LM不同菌株的毒力不同。

辣椒素抑制自发性高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的增殖和迁移

目的研究辣椒素(CAP)是否可以改善自发性高血压大鼠(SHR)脑基底动脉平滑肌细胞(BASMC)的增殖迁移。方法体外培养SHR及Wistar京都(WKY)大鼠原代BASMC,随机均分为对照组(WKY组)、SHR组、CAP处理的SHR组。通过CCK-8法选取CAP处理浓度;Transwell^(TM)小室实验和划痕实验检测各组BASMC的迁移能力;免疫荧光细胞化学染色检测BASMC中的骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和分布;Western blot法检测BASMC的OPN、PCNA蛋白水平。结果与WKY组相比,SHR组BASMC增殖和迁移能力增强,经CAP处理后,细胞增殖和迁移能力降低;OPN表达在BASMC胞质和胞核,PCNA主要表达在胞核,与WKY组相比,SHR组OPN、PCNA表达及蛋白水平增强,经CAP处理后,其OPN、PCNA表达及蛋白水平明显降低。结论CAP可降低SHR来源的BASMC的增殖和迁移。

小鼠神经细胞中胱硫醚β合成酶催化生成的H_(2)S对脑微血管内皮细胞增殖、迁移的影响及与VEGFR _(2)的关系

目的探讨神经细胞中的胱硫醚β合成酶(CBS)催化生成的H_(2)S对小鼠脑血管内皮细胞增殖、迁移的影响及其与VEGFR 2的关系。方法用CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕法和Transwell法分别检测细胞迁移,甲基蓝法检测H_(2)S含量和钙荧光成像法检测内皮细胞的细胞内游离Ca^(2+)浓度,HT22细胞和bEnd.3细胞进行Transwell细胞共培养。结果H_(2)S供体NaHS(1×10^(-8)—1×10^(-3.5) mol·L^(-1))可明显增加HUVEC细胞和bEnd.3细胞的增殖、迁移面积和迁移的细胞数,而VEGFR 2阻断剂SU5416(10μmol·L^(-1))可明显抑制NaHS促进增殖和迁移的作用;在共培养体系中,H_(2)S合酶底物L-cys(100μmol·L^(-1))可明显促进bEnd.3细胞增殖和迁移及细胞内Ca^(2+)荧光强度,并提高体系中的H_(2)S含量,但CBS抑制剂AOAA(1 mmol·L^(-1))和SU5416则明显减弱L-cys的增殖和迁移,促进作用及细胞内Ca^(2+)荧光强度的增高。结论神经细胞中CBS催化生成的H_(2)S可促进脑血管内皮细胞增殖和迁移,其作用可能与激活VEGFR 2,导致内皮细胞的胞内游离Ca^(2+)浓度升高有关。

茯苓酸抑制H_(2)O_(2)诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及促进细胞存活

目的探讨茯苓酸(PA)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及增殖的影响。方法体外培养小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3,随机分为NC组(正常培养细胞)、H_(2)O_(2)组(H_(2)O_(2)浓度为100μmol/L)、H_(2)O_(2)+PA 10μmol/L组(H_(2)O_(2)浓度为100μmol/L,PA浓度为10μmol/L)、H_(2)O_(2)+PA 20μmol/L组(H_(2)O_(2)浓度为100μmol/L,PA浓度为20μmol/L)、H_(2)O_(2)+PA 40μmol/L组(H_(2)O_(2)浓度为100μmol/L,PA浓度为40μmol/L)。采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)的表达量。结果与NC组比较,H_(2)O_(2)组细胞存活率及CAT、SOD、GSH-Px的水平显著降低(P<0.05),LDH、MDA、ROS的水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率与Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+PA 10μmol/L组、H_(2)O_(2)+PA 20μmol/L组、H_(2)O_(2)+PA 40μmol/L组细胞存活率及CAT、SOD、GSH-Px的水平显著升高(P<0.05),LDH、MDA、ROS的水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率与Cleaved caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论茯苓酸可抑制H_(2)O_(2)诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及促进细胞存活。

糖尿病大鼠脑内微血管细胞外信号调节激酶磷酸化的研究

目的研究链脲佐菌素诱导的Ⅰ型糖尿病大鼠脑膜、脑实质微血管的病理改变及其中细胞外信号调节激酶ERK1/2及其下游作用底物转录因子Elk-1的磷酸化状态,探讨糖尿病血管的发病机制。方法应用链脲佐菌素制备Ⅰ型糖尿病大鼠模型,HE染色观察制模后3d和2、4、8周脑膜、脑实质微血管病变,免疫组织化学观察高血糖状态下脑内微血管中p-ERK1/2及下游作用底物p-ELK1的表达情况。结果 p-ERK1/2、p-ELK1在各时间点正常对照组和糖尿病组大鼠脑膜、脑实质微血管中均有不同程度的表达。p-ERK1/2在糖尿病4、8周组脑膜、脑实质微血管中表达均明显上调;p-ELK1在糖尿病4、8周组脑膜、脑实质微血管内皮细胞中表达均明显的上调(P<0.05),分别与糖尿病3d、2周组及各期正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。糖尿病各组与正常对照组各组脑膜微血管平滑肌细胞中p-ELK1的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论在糖尿病4、8周组SD大鼠脑内微血管中存在ERK1/2信号转导通路的异常激活。

模拟失重下miR-212-3p/SIRT1通路调控微血管内皮细胞增殖

目的 探究模拟失重下miR-212-3p/SIRT1信号通路对微血管内皮细胞增殖的影响,为失重导致的心血管功能失调的在体靶向干预寻求治疗靶点。方法 利用2D回转器对小鼠脑微血管内皮细胞进行模拟失重处理,探究miR-212-3p及沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)在模拟失重下的表达变化;向bEnd.3细胞中转染mimic-212-3p、inhibitor-212-3p、pcDNA3.1-SIRT1及相应的阴性对照进行功能验证或挽救实验;采用qRT-PCR检测miR-212-3p及SIRT1 mRNA表达变化;采用Western blotting检测PCNA、SIRT1蛋白的表达变化;采用CCK-8及5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)检测微血管内皮细胞增殖能力。结果 模拟失重下,bEnd.3细胞中miR-212-3p表达升高、而SIRT1表达下降(P<0.01);转染mimic-212-3p、inhibitor-212-3p后,Western blotting、CCK-8及EdU检测均表明过表达miR-212-3p能够显著抑制微血管内皮细胞增殖,抑制miR-212-3p能够促进微血管内皮细胞增殖(P<0.01);此外,沉默miR-212-3p可以缓解模拟失重导致的微血管内皮细胞增殖抑制,表现为模拟失重下转染inhibitor-212-3p后PCNA蛋白表达增加,细胞增殖率升高(P<0.01);mimic-212-3p与pcDNA3.1-SIRT1共转染实验表明miR-212-3p通过抑制SIRT1从而负调控微血管内皮细胞增殖(P<0.01)。结论 模拟失重促进miR-212-3p表达,而抑制SIRT1表达;miR-212-3p通过直接负调控SIRT1从而抑制微血管内皮细胞增殖,提示抑制miR-212-3p/SIRT1通路可以部分降低模拟失重对微血管内皮细胞的增殖抑制,miR-212-3p可以作为潜在的干预靶点。

VEGF在人脑胶质瘤中的表达与肿瘤增殖及肿瘤血管生成的关系

目的研究血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在人脑胶质瘤中的表达与肿瘤增殖及血管生成的关系。方法应用免疫组化技术和形态定量分析法,检测98例手术切除脑胶质瘤中VEGF表达、PCNA标记指数(PCNA LI)、微血管密度(Microvessel density,MVD)表达。结果(1)肿瘤细胞及血管内皮细胞均可以表达VEGF,阳性颗粒分布于肿瘤胞浆中;(2)高级别肿瘤PCNA、LI、MVD显著高于低级别肿瘤(P<0.05);VEGF表达阳性肿瘤的PCNA、LI、MVD显著高于VEGF表达阴性肿瘤(P<0.05);(3)在星形细胞肿瘤中,随着MVD的增大,VEGF在肿瘤血管内皮的染色率逐渐增加,与肿瘤的MVD存在正相关关系(r值为0.44,P<0.01)。结论脑胶质瘤的VEGF表达与MVD呈正相关关系,VEGF在肿瘤细胞增殖及血管再生过程中起重要作用。