小鼠脑出血后继发性脑损伤调节因子Lpar1 mRNA和miR-200b的筛选、靶向关系预测验证

目的筛选小鼠脑出血后继发性脑损伤调节因子溶血磷脂酸受体1(Lpar1)、miR-200b,观察Lpar1、miR-200b在小鼠脑出血后继发性脑损伤组织和LPS处理的小胶质细胞中的表达,并探讨miR-200b、Lpar1之间,及与促炎因子之间的关系。方法将18只C57小鼠采用简单随机方法分为假手术组(Sham组)、脑出血组(ICH组),ICH组建立小鼠脑出血后继发性脑损伤模型,取3只ICH组小鼠和3只Sham组小鼠处理侧基底节区脑组织,通过二代测序方法进行全转录组测序,利用R软件找出两组差异表达的mRNA、miRNA。利用STRING数据库对两组差异表达基因中的上调差异基因(mRNA)编码蛋白构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI),分析PPI中蛋白相互作用关系,并采用Cytoscape软件筛选PPI中的关键mRNA(Lpar1)。采用miRDB和Target Scan数据库对关键mRNA的上游miRNA进行预测,最后与关键mRNA呈负相关的miRNA取交集,得到靶向miRNA(miR-200b)。分别于建模后第1、3、7天,采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测ICH组、Sham组Lpar1 mRNA和miR-200b。用LPS(100μg/m L)刺激BV-2细胞48 h后采用q PCR检测Lpar1 mRNA和miR-200b。采用miR-200b模拟物干预LPS处理的小胶质细胞,采用q PCR检测Lpar1 mRNA和促炎因子IL-6 mRNA、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA。结果共得到ICH组小鼠及Sham组小鼠869个差异表达mRNA和106个差异表达的miRNA,与Sham组小鼠相比,ICH组小鼠中mRNA有545个下调和424个上调,miRNA有55个下调和51个上调。上调表达的Lpar1为感兴趣的关键基因,下调表达的miR-200b可能是Lpar1靶向结合的miRNA。与Sham组相比,ICH组小鼠基底节区脑组织和LPS处理的小胶质细胞中Lpar1 mRNA升高、miR-200b降低(P均<0.05),miR-200b模拟物干预的小胶质细胞中Lpar1 mRNA、IL-6 mRNA、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA相对表达量降低(P均<0.05)。结论相比Sham组小鼠,ICH组小鼠基底节区脑组织中mRNA有545个下调和424个上调,miRNA有55个下调和51个上调。在ICH小鼠及LPS处理的小胶质细胞中,关键基因Lpar1高表达、miR-200b低表达,二者呈靶向关系。miR-200b可抑制小胶质细胞炎症反应。