大鼠脾虚证与血清甲状腺激素及下丘脑、胸腺细胞核T_3受体关系

目的 :探讨脾虚证与血清甲状腺激素及下丘脑、胸腺细胞核T3受体的关系。方法 :成年SD大鼠 32只随机分为 4组 (每组 8只 ) :A组 (正常组 )、B组 (脾虚组 )、C组 (治疗组 )、D组 (自复组 )。采用放射配基分析法 ,测定各组大鼠血清T3、T4 、FT3、FT4 、γ T3及下丘脑、胸腺细胞核T3 受体的含量。结果 :B、D组大鼠血清T3、T4 、FT3、FT4 含量均较A、C组低 ,有显著差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;各组间血清γ T3含量无显著性差异 ;B、D组下丘脑、胸腺细胞核T3 受体含量较A、C组低 ,有显著差异P <0 .0 1)。结论 :血清甲状腺激素及下丘脑、胸腺细胞核T3 受体的水平降低 ,可导致甲状腺激素生物效应低下 ,经由神经内分泌免疫调节环路 ,削弱免疫功能 。

甲状腺功能减退大鼠脑海马组织T_3核受体基因表达

目的了解甲状腺功能减退(简称甲减)大鼠海马组织T3核受体(T3NR)α、β亚型mRNA的特异性变化,探讨甲状腺激素对脑发育及功能调控的分子机制。方法采用丙基硫氧嘧啶(PTU)腹腔注射诱发甲减动物模型,运用RT-PCR检测技术测定实验性甲减大鼠脑海马组织T3NRα1mRNA、T3NRβ1mRNA的表达水平。结果甲减大鼠海马组织T3NRα1mRNA、T3NRβ1mRNA的表达水平明显下调,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论甲减时脑组织T3NRα、β亚型mRNA的表达水平下调,T3NR的合成减少,导致甲状腺激素的生物效应的降低,可能是甲减性脑损害发生的重要病理机制之一。

半硫丸对“甲减”模型大鼠海马T_3核受体mRNA表达的影响

目的:研究甲状腺机能减退大鼠海马组织T3 核受体mRNA的变化规律及半硫丸对其的影响,探讨半硫丸对甲减的作用机理。方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组和造模组,造模大鼠每日腹腔注射PTU诱发甲状腺机能减退动物模型后,分为模型组、甲状腺素片组、半硫丸组,治疗组分别予相应药物治疗 30d。采用RT PCR法测定大鼠脑海马组织T3NRα1mRNA和T3NRβ1mRNA的表达水平。结果:甲减大鼠海马组织T3NRα1mRNA和T3NRβ1mRNA的表达水平明显下降,与正常组比较有显著性差异 (P<0.01)。两种药物均可明显增强甲减大鼠海马组织T3NRα1mRNA和T3NRβ1mRNA的表达,与模型组比较均具有显著性差异,治疗组之间无明显差异。结论:半硫丸可通过上调甲减大鼠海马T3核受体mRNA表达水平,增加T3核受体数目,改善甲减造成的脑神经损伤。

单个核细胞核T_3 受体测定法改进及临床意义

为了评价甲状腺激素(TH)在细胞水平的生物效应,笔者改进了外周血单个核细胞核T_3受体(T_3R)的结合分析法,并测定了甲状腺功能正常、甲状腺功能亢进(甲亢)和甲状腺功能低下(甲减)患者(各10例),外周血单个核细胞核T_3R的最大结合客量(MBC)、解离常数(Kd)及血清游离TH浓度及其效应等指标.结果甲减组患者MBC显著高于正常组;各组核T_3R与T_3的解离常数无显著差异;血清肌酸磷酸激酶(CPK)、胆固醇含量与核T_3R占据率(q)相关显著.结论:改进后的外周血单个核细胞核T_3R测定方法稳定、重复性较好、需血量少、便于应用,尤其对遗传性核T_3R缺陷患者,具有决定性诊断价值;应用Bantle计算公式计算的q方法简便,且比游离三碘甲腺氨酸(FT_3)和核T_3R参数更能反应T_3在细胞核水平的生物效应.

人生长激素释放激素变异受体1型基因绿色荧光蛋白真核表达载体1的构建及体外表达

目的构建人生长激素释放激素变异受体1型(GHRHR-SVT1)基因绿色荧光蛋白真核表达载体1(pEG-FP-N1)并在鼠成纤维细胞株NIH-3T3细胞中的表达。方法GHRHR-SVT1基因是由人胃癌细胞株AGS中扩增出的DNA片段,克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,用高效转染试剂将pEGFP-N1/GHRHR-SVT1转染NIH-3T3细胞,NIH-3T3细胞分3组:非转染组(对照组),只加转染试剂不加质粒;转染空质粒组(pEGFP-N1组),加转染试剂与空质粒;重组质粒转染组(pEGFP-N1/GHRHR-SVT1组),加转染试剂与重组质粒。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测各组转染后各组NIH-3T3细胞的生长情况。结果(1)pGEFP-N1/GHRHR-SVT1经限制性内切酶XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切产生约1 080 bp和4 700 bp 2条带。(2)构建的GHRHR-SVT1cDNA序列与GHRHR-SVT1原始序列(AF-282259)进行对比,第54位碱基突变(A突变为T),为无义突变。(3)重组质粒转染组NIH-3T3细胞增殖率明显高于对照组(P<0.01)。(4)重组质粒转染组NIH-3T3细胞增殖指数明显高于对照组(P<0.01)。结论在适当浓度GHRH(10μmol/L)的培养基中,GHRHR-SVT1能够促进NIH-3T3细胞增殖,并为肿瘤的治疗提供新的思路。

甲状腺激素受体在大菱鲆组织细胞中的表达及其与甲状腺激素的关系

为了探讨甲状腺激素受体在大菱鲆(Scophthalmus maximus)体内的表达情况及在细胞水平三碘甲状腺原氨酸(T3)对甲状腺激素受体(TR)表达量的影响,利用荧光定量PCR法检测了大菱鲆8个组织中甲状腺激素受体TRαA、TRβ的表达量,并设计了0,50,75,100和200 nmol/L 5个不同浓度的T3处理大菱鲆肾细胞(SMKC),采用实时荧光定量PCR法测定T3处理后甲状腺激素受体TRαA、TRβ的表达量。结果表明,甲状腺激素受体TRαA、TRβ在大菱鲆不同组织中的表达量各不相同,但两者均在肾脏组织中表达量最高。在不同浓度T3处理后甲状腺激素受体的表达量存在明显的差异,在低浓度条件下,TRαA、TRβmRNA的表达量增加,当T3浓度达到100 nmol/L时,TRαA、TRβmRNA表达量明显降低,说明50,75 nmol/L的T3能够引起细胞中甲状腺激素受体TRαA、TRβ表达量的增加,而100,200 nmol/L的T3会相对抑制细胞中甲状腺激素受体TRαA、TRβ的表达量。

红细胞膜相关蛋白通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中Th17细胞分化

目的探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响。方法流式细胞术验证不同浓度ERMAP-Ig融合蛋白功能;琼脂糖凝胶电泳鉴定ERMAP基因敲除小鼠。流式细胞术检测ERMAP-Ig融合蛋白在体外对Th17细胞分化影响。40只6周龄普通C57BL/6小鼠随机分为2组建立EAE模型:对照(control)-Ig和ERMAP-Ig组,每组20只;记录临床评分;流式细胞术检测EAE小鼠体内Th17细胞分化情况。40只6周龄已鉴定的野生型和ERMAP基因敲除小鼠分为2组建立EAE模型:ERMAP^(+/+)和ERMAP^(-/-)组,每组20只。记录临床评分;脊髓HE和固蓝(LFB)染色并进行组织学半定量评分。流式细胞术检测IL-17A+CD4+T细胞百分比;Western blotting检测IL-6、白细胞介素17(IL-17)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、ROR-γt蛋白水平表达;Real-time PCR检测IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、STAT3和ROR-γt的mRNA表达;ELISA检测细胞水平IL-17和TNF-α的表达。结果1.外源性ERMAP-Ig融合蛋白抑制体内外Th17细胞分化且减轻小鼠EAE症状。2.与对照组相比,ERMAP^(-/-)组EAE小鼠炎性浸润和脱髓鞘症状加重,Th17分泌IL-17A增加。3.内源性ERMAP基因敲除后,IL-17、TNF-α、IL-6、STAT3及ROR-γt表达均增加。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ERMAP可能通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路调控Th17细胞分化,参与小鼠EAE发生发展。

甲状腺激素T_3影响K562细胞转铁蛋白受体和铁蛋白表达的分子机制研究

目的 探讨甲状腺激素T3 对白血病细胞K5 6 2转铁蛋白受体 (TfR)和铁蛋白 (Fn)表达的调控作用及其可能的机制。方法 采用流式细胞术和放射免疫法分别检测TfR和Fn的表达水平 ,用RNA 蛋白带移动分析法测定铁调节蛋白 (IRP)与铁反应元件 (IRE)的结合活性。应用RT PCR方法半定量分析TfR和Fn的mRNA水平。结果 T3 对K5 6 2细胞TfR的表达无明显作用 ,而以不同浓度的T3处理细胞后使Fn的表达增加 ,其中当T3 为 10 0nmol L和 2 0 0nmol L时 ,与空白对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。T3 能减少IRP IRE的结合活性 ,且以T3 为 5 0nmol L时减少最为明显。不同浓度的T3 在不同的作用时间内均能提高H FnmRNA水平 ,而对TfRmRNA水平无显著影响。结论 T3 可增加细胞Fn的表达 ,而对TfR的表达无明显调控作用 ,其机制除包含转录后的调节外 ,可能还具有转录水平的调控作用。

T_3对人神经干细胞分化过程中甲状腺激素受体表达的影响

目的 探讨三碘甲状腺原氨酸 (T3)在神经干细胞 (NSC)分化中的作用以及甲状腺激素受体(TR)mRNA在NSC分化过程中的表达变化。方法 在体外成功诱导扩增NSC ,用T3 对NSC进行诱导分化 ,半定量RT PCR法检测NSC在分化前后TRsmRNA的表达变化 ,免疫细胞化学方法鉴定分化后的细胞类型。结果 T3 可诱导NSC分化为神经元、少突和星形胶质细胞 ,其中髓鞘碱性蛋白 (MBP)阳性细胞约占 80 %。当NSC分化时存在不同的TRsmRNA的时间顺序表达。结论 T3 能诱导NSC向胶质细胞分化 ,是少突胶质细胞分化的重要调控因子 。

甲状腺功能异常患者末梢血淋巴细胞T_3核受体基因表达

为了解甲状腺功能异常患者末梢血淋巴细胞Ｔ３核受体基因表达情况，以人ｃ－ｅｒｂＡα和ｃ－ｅｒｂＡβ的ｃＤＮＡ片段为探针，应用分子杂交技术，检测了５例Ｇｒａｖｅｓ病和７例桥本甲状腺炎伴甲状腺功能减退患者末梢血淋巴细胞ｃ－ｅｒｂＡα和ｃ－ｅｒｂＡβｍＲＮＡ的相对含量。结果表明：人淋巴细胞ｃ－ｅｒｂＡαｍＲＮＡ有６．０ｋｂ和３．２ｋｂ两种形式，而ｃ－ｅｒｂＡβｍＲＮＡ有５．０、３．０和２．０ｋｂ三种形式。桥本甲状腺炎伴甲状腺功能减退患者末梢血淋巴细胞ｃ－ｅｒｂＡα和ｃ－ｅｒｂＡβｍＲＮＡ表达增强，但Ｇｒａｖｅｓ病患者无明显变化。提示：桥本甲状腺炎伴甲状腺功能减退患者血清甲状腺激素水平减低，对其末梢血淋巴细胞Ｔ３核受体亚型在基因转录水平有向上调节作用。

软坚消瘿颗粒对肝郁脾虚型桥本甲状腺炎模型大鼠Treg和Th17细胞因子表达的影响

目的:观察软坚消瘿颗粒对肝郁脾虚型桥本甲状腺炎(HT)大鼠Treg和Th17特异性转录因子及细胞因子表达的影响,探讨软坚消瘿颗粒对HT的治疗作用及其免疫学作用机制。方法:采用随机数字法将48只SD大鼠分为正常组(12只)和造模组(36只)。采用高碘饮水联合甲状腺球蛋白皮下注射方法建立HT大鼠模型,再结合慢性束缚应激、过度疲劳、饮食失节等复合方法制备肝郁脾虚模型。造模后,造模组大鼠随机分为模型组、雷公藤组和软坚消瘿组,每组12只,连续给药8周。去除实验期间死亡大鼠和不合格标本,每组留取10只检测结果,观察各组大鼠一般情况;末次给药后采集大鼠腹主动脉血和甲状腺组织,采用ELISA法检测大鼠血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化酶抗体(TPOAb)、血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素释放激素(TRH)和超敏促甲状腺激素(TSH)水平及血清白细胞介素10(IL-10)、IL-17和IL-23水平;HE染色法检测各组大鼠甲状腺组织病理形态表现;Western blotting法检测各组大鼠甲状腺组织中Foxp3和RORγt蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组、雷公藤组和软坚消瘿组大鼠血清TGAb和TPOAb水平升高(P<0.05);血清FT3、FT4和TRH水平降低(P<0.05),TSH水平升高(P<0.05);甲状腺组织中Foxp3蛋白表达水平降低(P<0.05),RORγt蛋白表达水平升高(P<0.05);血清IL-10水平降低(P<0.05),IL-17和IL-23水平升高(P<0.05)。与模型组比较,雷公藤组和软坚消瘿组大鼠血清TGAb和TPOAb水平降低(P<0.05);大鼠血清FT3、FT4和TRH水平升高(P<0.05),TSH水平降低(P<0.05);甲状腺组织中Foxp3蛋白表达水平升高(P<0.05),RORγt蛋白表达水平降低(P<0.05);血清IL-10水平升高(P<0.05),IL-17和IL-23水平降低(P<0.05)。与雷公藤组比较,软坚消瘿组大鼠血清TGAb和TPOAb水平降低(P<0.05);血清FT3、FT4和TRH水平升高(P<0.05),TSH水平降低(P<0.05);甲状腺组织中Foxp3蛋白表达水平升高,RORγt蛋白表达水平降低,但差异无统计学意义(P>0.05);血清IL-10水平升高(P<0.05),IL-17和IL-23水平降低(P<0.05)。正常组大鼠甲状腺滤泡形态规则,结构完整,无淋巴细胞浸润;模型组大鼠甲状腺滤泡腔扩大,滤泡结构大量破坏,滤泡腔内及周围可见大量淋巴细胞浸润;雷公藤组甲状腺滤泡腔扩大,部分滤泡结构破坏,滤泡腔内及周围有少量淋巴细胞浸润,浸润程度轻于模型组;软坚消瘿组甲状腺病理形态学改变与雷公藤组类似,滤泡腔内及周围亦有少量淋巴细胞浸润。结论:软坚消瘿颗粒可以通过调节Treg和Th17特异性转录因子Foxp3和RORγt蛋白及其相关细胞因子的表达,对肝郁脾虚型HT大鼠起治疗作用。

生命周期中大鼠脑细胞核T_3受体的个体发生

对大鼠自出生至衰老(生后1天～18个月)各阶段脑细胞核提取液中内源T_3(EnT_3-KMT)水平及T_3受体的亲和常数(K_a)和最大结合容量(MBC)进行了观察和分析。结果:大脑与小脑细胞核T_3受体的各自K_a和MBC不随年龄及性别而改变,但大脑的K_a及MBC均为小脑的2倍。大、小脑细胞核提取液中的内源T_3在2月龄为高值,以后随年龄增高而下降,至老年略有回升。大脑内源T_3浓度亦为小脑的2倍。同龄、同性别大鼠的大、小脑T_3受体占位率基本相同,并随年龄增高而降低。

温肾方对亚临床甲状腺功能减退模型大鼠心肌组织T3及甲状腺激素受体的影响

目的:探讨温肾方对亚临床甲状腺功能减退(甲减)模型大鼠心肌组织T3及甲状腺激素受体的影响。方法:采用"甲状腺全切术+术后皮下注射L-T4"法制备亚临床甲减大鼠模型,设定空白对照组、模型组、中药低剂量组、西药组、中西药组及中药高剂量组,用ELISA法参照组织T3试剂盒说明测定心肌组织T3水平,RT-PCR法测定心肌组织甲状腺激素受体表达情况,同时观察温肾方对其指标的干预情况。结果:温肾方能提高心肌组织T3水平,尤以中药高剂量组最为显著,中药高剂量组优于单纯中药低剂量组、西药组及中西药组,接近空白对照组;温肾方在下调Tα2表达,上调Tβ1表达方面有效(P<0.05);中西药组在Tα1表达调节上优于单纯中药组。结论:亚临床甲减存在的心肌组织内甲减,可能是导致心脏损害的机制之一;温肾方能显著提高心肌组织内T3水平,作用优于L-T4,能改善心肌组织内甲状腺激素受体基因表达,从而具有防治亚临床甲减心脏并发症的作用,为中药治疗亚临床甲减防治并发症提供实验依据,温阳补虚法可能为有效治疗亚临床甲减的方法之一。

Graves病甲亢患者外周血25-OH-D3、IL-4、TR-Ab水平及CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞百分比变化观察

目的观察Graves病(GD)甲亢患者血清25-羟维生素D3(25-OH-D3)、白细胞介素4(IL-4)、促甲状腺激素受体抗体(TR-Ab)水平及外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)变化,并探讨其意义。方法 GD甲亢患者40例(观察组),均采用甲巯咪唑治疗,合并维生素D缺乏者(18例)另补充维生素D(阿法骨化醇软胶囊);另选同期健康体检者20例作对照(对照组)。比较两组血清25-OH-D3、IL-4、TR-Ab水平及外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞数量。结果与对照组相比,观察组血清25-OH-D3水平、CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg百分比降低,IL-4水平升高(P均<0. 05)。观察组25-OH-D3水平与TR-Ab呈负相关(r=-0. 83、-0. 73,P均<0. 05),与CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg数量呈正相关(r=0. 56,P <0. 05)。与治疗前比较,观察组维生素D补充后、缓解期血清TR-Ab水平降低,缓解期血清IL-4水平降低(P均<0. 05)。与治疗前比较,观察组缓解期血清TR-Ab水平降低(P <0. 05)。结论 GD甲亢患者血清25-OH-D3水平下降,CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞减少,细胞因子IL-4水平升高,25-OH-D3水平与TR-Ab、IL-4水平负相关,与CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg数量呈正相关,通过对缺乏维生素D患者补充维生素D治疗,可使其IL-4水平有下降,可能对患者免疫功能调节具有一定作用。

激素及代谢产物检验与临床

急性脑梗死患者血清甲状腺激素水平的测定及其临床意义；血清甲状腺激素水平与甲状腺“温”结节临床关系的初步观察;血管紧张素原基因多态性与老年原发性高血压发病风险性研究;多发性肌炎／皮肌炎患者外周血单个核细胞中糖皮质激素受体α、β mRNA表达与糖皮质激素疗效相关性的研究；职业性噪声对暴露人群外周血中去甲肾上腺素及心血管系统的影响；

甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺组织RORγt/FOXP3及TGF-β、Smad3的影响

目的:探讨甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎(AIT)大鼠保护作用的机制。方法:制作AIT大鼠模型,随机分为模型组、甲炎康泰组,每组10只。另选取10只为正常组。灌胃干预8周后,ELISA检测大鼠血清中甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)浓度,甲状腺组织进行HE染色、实时荧光定量PCR检测和免疫组化检测。结果:与模型组比较,甲炎康泰组TPOAb浓度显著降低(P<0.05),淋巴细胞浸润减轻;甲炎康泰组大鼠甲状腺组织中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),叉头翼状螺旋转录因子P3(FOXP3)、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad3 mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论:甲炎康泰可能通过增强甲状腺组织中TGF-β、FOXP3以及Smad3的表达和抑制RORγt的表达以缓解AIT的发生发展。