大气PM_(2.5)对大鼠海马组织脑源性神经营养因子及其受体TrkB蛋白表达的影响

目的探讨大气PM_(2.5)染毒对大鼠海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB相关蛋白表达的影响。方法采集大气PM_(2.5),制备混悬液。将48只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和暴露组,每组8只,染毒组大鼠按照20 mg/kg气管滴注PM_(2.5)混悬液,对照组大鼠气管滴注等量生理盐水,每周1次,分别染毒1个月、3个月和6个月。采用免疫组化法测定大鼠海马组织中PKA蛋白表达,蛋白免疫印迹法测定大鼠海马组织中BDNF、TrkB、AKT和CREB蛋白表达水平。结果与相应对照组比较,3个月、6个月染毒组大鼠海马组织中PKA阳性细胞减少,BDNF、TrkB、AKT和CREB蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论大气PM_(2.5)染毒可降低大鼠海马组织中BDNF、TrkB、AKT、CREB和PKA蛋白表达水平。

“通督解郁”针刺在CUMS抑郁模型大鼠前额叶皮质BDNF/TrkB/CREB通路的作用效应

目的:探究K252a的作用下,“通督解郁”针刺在慢性温和不可预知应激(CUMS)模型大鼠前额叶皮质BDNF/TrkB/CREB通路的作用机理。方法:64只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组、针刺组、模型+DMSO组、模型+K252a组、氟西汀+K252a组和针刺+K252a组,每组8只。造模在CUMS结合孤养法外,针刺组、针刺+K252a组和氟西汀组、氟西汀+K252a组在造模前30 min分别施行手针百会、神庭,电针内关、太冲治疗(频率2 Hz,连续波,电流1 mA,留针30 min)和灌胃治疗;模型+DMSO组和模型+K252a组、氟西汀+K252a组及针刺+K252a组分别在造模前1 h侧脑室注射DMSO溶液和K252a,共21 d。行为学采用体质量、糖水偏好实验以及强迫游泳实验进行评价;免疫组化检测大鼠前额叶组织BDNF、TrkB和CREB阳性细胞平均光密度值IOD;Western blot及PCR法检测大鼠前额叶皮质中相关蛋白及mRNA表达。统计学分析采用LSD检验和非参数检验。结果:与空白组比较,模型组大鼠的体质量差、糖水偏好指数SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均明显下调,差异具有统计学意义(P<0.01),强迫游泳的不动时间IT明显上调,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,针刺组、氟西汀组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均明显上调,差异具有统计学意义(P<0.01),IT下调,差异具有统计学意义(P<0.01),模型+K252a组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05),IT增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。与针刺组比较,针刺+K252a组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均减少,差异具有统计学意义(P<0.05),IT增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:“通督解郁”针刺对CUMS模型大鼠的抑郁行为有明显改善作用,其机制可能上调了前额叶皮质上的BDNF/TrkB/CREB通路,从而起到治疗抑郁症的作用。

电针联合五子衍宗丸通过调节BDNF/TrkB/CREB信号通路对帕金森病小鼠的治疗作用

目的:观察电针联合五子衍宗丸对帕金森病小鼠黑质脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)/环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(CREB)通路的影响。方法:将108只雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、电针组、五子衍宗丸组、联合观察组、抑制剂组、电针+抑制剂组、五子衍宗丸+抑制剂组、联合+抑制剂组9组,每组12只。除正常组、抑制剂组外,其余组给予1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射造模,第1天15 mg/kg,第2天20 mg/kg,第3~7天30 mg/kg,均0.2 mL/次,1次/d。自造模第1天进行干预,电针观察组别给予电针干预,五子衍宗丸观察组别早晚给予五子衍宗丸药液,抑制剂注射组别腹腔注射TrkB抑制剂ANA-12,连续干预14 d。干预结束后对比各组步态实验、旷场实验、爬杆实验结果,小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)及BDNF、TrkB、CREB表达。结果:与正常组比较,模型组出现明显的运动障碍,黑质TH平均荧光强度及TH、BDNF、TrkB、CREB蛋白表达低(P<0.05);与模型组比较,电针组、五子衍宗丸组、联合观察组运动障碍均得到改善,黑质TH平均荧光强度及TH、BDNF、TrkB、CREB蛋白表达高(P<0.05);与电针组、五子衍宗丸组比较,联合观察组的运动障碍得到改善,其他指标表达增高(P<0.05)。结论:电针联合五子衍宗丸可能通过调控BDNF/TrkB/CREB信号通路来改善PD小鼠的运动障碍,保护多巴胺能神经元。

脑源性神经营养因子缓释微球的制备及其通过TrkB/CREB对大鼠缺血缺氧性脑损伤的修复作用

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)缓释微球的制备,及其对大鼠缺血缺氧性脑损伤的修复作用以及对酪氨酸激酶B(TrkB)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)通路的调节作用。方法采用乳化-溶剂挥发法和聚合物合金法制备BDNF缓释微球,通过透射电镜观察微球形态,马尔文ZS90粒度分析仪测量微球的粒径和Zeta电位,测定BDNF缓释微球的包封率和质粒载量,同时检测微球的体外缓释情况。将45只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组各15只,除假手术组外,其余2组大鼠通过结扎右侧颈总动脉和低氧环境建立缺血缺氧脑损伤模型。治疗组大鼠尾静脉注射BNDF缓释微球溶液100 mg/kg,1次/d,连续4周,假手术组和模型组大鼠尾静脉注射等量空白微球溶液。干预结束后,考察其神经功能评分、脑组织含水量和脑梗死面积、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,蛋白印迹法检测脑组织BDNF、TrkB和磷酸化CREB(p-CREB)蛋白表达量。结果BDNF缓释微球外观呈圆形或椭圆形,表面光滑,大小分布均匀,未见互相融合的微球,其粒径为(221.49±5.75)nm,Zeta电位为(−27.03±4.22)mV,包封率为(80±2)%,1 mg微球载有BDNF质粒(1.55±0.04)μg,第28天药物缓释量趋于稳定。与模型组比较,治疗组神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死面积、MDA、TNF-α和IL-6水平均降低,SOD水平及BDNF、TrkB和p-CREB蛋白表达量均升高(均P<0.05)。结论BDNF缓释微球可促进脑缺血缺氧造成的神经功能损伤修复,降低炎症反应和氧化应激反应,减轻脑水肿和脑梗死,其可能是通过激活BDNF/TrkB/CREB通路发挥作用。

电针对抑郁大鼠海马组织CREB/BDNF/TrkB信号通路的影响

目的:探讨电针对抑郁大鼠海马组织CREB/BDNF/TrkB信号通路的影响。方法:采用孤养结合慢性不可预知应激(CUMS)方法建立抑郁大鼠模型,随机分为空白组、模型组、电针组、氟西汀组,每组10只。电针组选取“百会”、“神庭”、“合谷”、“太冲”,每日造模前1 h针刺,留针20 min,1次/d,持续21 d;氟西汀组:每日造模前1 h氟西汀(10 mg/kg,1 mg/mL)灌胃给药,持续21 d。观察大鼠的体质量变化、旷场实验的站立次数和运动距离、强迫游泳实验的不动时间,ELISA法检测血清5⁃HT、DA、NE的含量;Western blot检测海马组织中BDNF、CREB、TrkB的表达;实时荧光定量PCR检测海马组织中BDNF、CREB mRNA的表达。结果:造模干预后:与空白组比较,模型组大鼠体质量、站立次数、运动距离、血清5⁃HT、DA、NE的含量、海马组织中BDNF、CREB、TrkB的表达显著下降(均P<0.01),不动时间显著升高(P<0.01);与模型组比较,电针组、氟西汀组大鼠体质量、站立次数、运动距离、血清5⁃HT、DA、NE的含量、海马组织中BDNF、CREB、TrkB的表达显著升高(均P<0.05),不动时间显著显著降低(P<0.05);电针组和氟西汀组比较,各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针能够显著改善大鼠的抑郁症状,其机制可能与调控海马组织中BDNF/TrkB/CREB信号通路相关蛋白和提高单胺类神经递质5⁃HT、NE和DA的含量有关,从而产生抗抑郁作用。

基于BDNF/TrkB/ERK/CREB信号通路探究温笑散通过促进神经发生抗抑郁的作用机制

目的:探讨温笑散改善皮质酮诱导的小鼠抑郁样行为的作用机制。方法:雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、帕罗西汀组(20 mg·kg^(-1))、温笑散低、高剂量组(3.27、6.54 g·kg^(-1)),正常组和模型组给予等体积的生理盐水,除正常组外其他各组在灌胃0.5 h后皮下注射皮质酮诱导抑郁模型。给药结束后检测小鼠抑郁样行为;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清皮质酮含量;尼氏染色观察海马神经元损伤情况;免疫荧光检测海马齿状回(DG)中双皮质素(DCX)表达;蛋白免疫印迹法检测海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路相关蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠糖水偏好率显著降低、悬尾不动时间显著增加(P<0.01),旷场中心区域的停留时间和运动总距离明显减少(P<0.05,P<0.01),血清皮质酮水平显著升高(P<0.01),海马DG区神经元体积明显缩小、细胞核染色加深,DG区的DCX表达减少,海马中BDNF、磷酸化(p)-TrkB、p-ERK、p-CREB蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,温笑散低剂量组糖水偏好、旷场、悬尾行为学指标明显改善(P<0.05,P<0.01),温笑散高剂量组糖水偏好、旷场行为学指标明显好转(P<0.05,P<0.01);温笑散给药组血清皮质酮水平均显著降低(P<0.01),海马DG区神经元结构和形态正常,细胞核明显、尼氏体丰富,DG区DCX的表达均升高,温笑散高剂量组海马中BDNF、p-TrkB、p-ERK、p-CREB蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:温笑散能改善皮质酮诱导的小鼠抑郁样行为,促进神经发生,其作用机制可能与激活BDNF/TrkB/ERK/CREB信号通路相关。

当归补血汤及其主要活性成分阿魏酸对糖尿病抑郁症模型大鼠的影响及机制研究

目的探讨当归补血汤及其主要活性成分阿魏酸对糖尿病抑郁症(Diabetes mellitus with depression,DD)模型大鼠的影响及机制。方法将32只雄性自发性2型糖尿病(Goto-Kakizaki,GK)大鼠随机分为模型组、氟西汀组(2.20 mg·kg^-1)、当归补血汤组(4.0 g·kg^-1)和阿魏酸组(1.36 mg·kg^-1),每组8只,另取8只普通Wistar大鼠作为正常对照组。采用慢性温和不可预知性应激抑郁(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型复制方法造模,同时按上述剂量灌胃给药(10 mL·kg^-1),每日1次,连续4周。全程监测动物体质量及随机血糖;末次给药后,采用悬尾试验、强迫游泳和旷场实验观察动物行为学变化;采用ELISA法测定大鼠血清和海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)的含量;采用HE染色法进行大鼠海马组织病理形态学观察。结果与正常对照组比较,模型组大鼠体质量逐渐下降,血糖值始终明显升高(P <0.01);大鼠悬尾和强迫游泳的不动时间明显增加,而在旷场的自主运动总距离明显减少(P <0.001);血清BDNF及海马组织CREB、BDNF、TrkB的含量均明显降低(P <0.001)。与模型组比较,各给药组大鼠体质量逐渐增加,在给药2周后开始随机血糖值均明显下降(P <0.05,P <0.01);悬尾和强迫游泳不动时间明显缩短,自主运动距离明显增加(P <0.01,P <0.05);血清BDNF及海马组织CREB、BDNF、TrkB含量均明显上升(P <0.05,P <0.01)。结论当归补血汤及其主要活性成分阿魏酸能够显著改善糖尿病抑郁模型大鼠的抑郁样行为,保护海马神经元,其作用机制可能与CREB/BDNE/TrkB信号通路有关。

芍甘木瓜汤通过BDNF/TrkB/CREB信号通路改善脑卒中偏瘫痉挛状态大鼠神经行为学研究

目的观察芍甘木瓜汤对脑卒中偏瘫痉挛状态大鼠神经行为学的影响,并探讨对脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路的调控机制。方法取50只SD大鼠采用改良线栓法制作大脑中动脉梗死模型,选取建模成功大鼠随机分为模型组、巴氯芬(0.008 g/kg)组和芍甘木瓜汤低、中、高剂量(0.05、0.10、0.15 g/kg)组。另取10只SD大鼠不栓塞大脑中动脉作为假手术组,于再灌注2 h后ig给药,每天1次,连续2周,假手术组和模型组ig等量生理盐水。干预前后分别采用Zea Longa量表、改良Ashworth量表评价神经行为学、肌张力变化,采用大鼠多导生理记录仪测定上肢伸直幅度;酶联免疫法检测大鼠干预前后血清BDNF、TrkB水平;苏木素-伊红(HE)染色观察缺血半暗带脑组织病理变化,透射电镜下观察缺血半暗带脑组织神经元超微结构;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测缺血半暗带脑组织BDNF、TrkB-FL、TrkB-T1、CREB mRNA表达;Western blotting检测BDNF、TrkB-FL、TrkB-T1、CREB蛋白表达及p-CREB水平。结果干预后巴氯芬组和芍甘木瓜汤各剂量组的Zea Longa量表、改良Ashworth量表分级均较干预前和模型组(干预后)显著改善(P<0.05),上肢伸直幅度均较干预前和模型组(干预后)均显著增加(P<0.05),血清BDNF、TrkB水平均较干预前和模型组(干预后)显著升高(P<0.05),缺血半暗带脑组织病理变化和神经元超微结构均较模型组明显改善。模型组缺血半暗带脑组织BDNF、TrkB-FL mRNA与蛋白表达,p-CREB蛋白水平均显著低于假手术组(P<0.05),巴氯芬组和芍甘木瓜汤各剂量组均较模型组显著升高(P<0.05);模型组缺血半暗带脑组织TrkB-T1 mRNA与蛋白表达显著高于假手术组(P<0.05),巴氯芬组和芍甘木瓜汤各剂量组均较模型组显著下降(P<0.05)。各组缺血半暗带脑组织CREB mRNA表达差异无统计学意义。结论对脑卒中偏瘫痉挛状态大鼠ig予以芍甘木瓜汤可改善其神经行为学,降低肌张力,增加血清BDNF、TrkB水平,减轻缺血半暗带脑组织病理和神经元超微结构变化,推测与激活BDNF/TrkB/CREB通路,上调BDNF、TrkB-FL mRNA与蛋白表达,下调TrkB-T1 mRNA与蛋白表达,增加p-CREB水平有关。

“通督调神”针刺对脑卒中后抑郁大鼠海马CREB/BDNF/TrkB信号通路的影响

目的:观察“通督调神”针刺对脑卒中后抑郁(PSD)大鼠抑郁样行为以及海马环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)通路的调节作用,探讨其改善PSD的可能机制。方法:将36只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、通督调神组,每组12只。模型组、通督调神组大鼠采用Zea Longa线栓法和慢性不可预知性温和应激(CUMS)法复合制备PSD模型。通督调神组大鼠于造模结束后第4天予针刺“大椎”“水沟”“百会”“神庭”,每次干预40 min,每天1次,每周6次,连续干预4周。分别于PSD模型造模结束后第2天和干预4周后进行大鼠Zea Longa神经行为学评分、蔗糖水消耗实验和敞箱实验;生化法检测大鼠海马CA1区超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;ELISA法检测大鼠血清BDNF含量;实时荧光定量PCR法检测大鼠海马CA1区BDNF、Trk B、CREB mRNA表达;Western blot法检测大鼠海马CA1区BDNF、Trk B、CREB,p-CREB蛋白表达。结果:与假手术组比较,造模后、干预后模型组及造模后通督调神组大鼠Zea Longa神经行为学评分升高(P<0.05),蔗糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分降低(P<0.05)。与模型组比较,通督调神组大鼠干预后Zea Longa神经行为学评分降低(P<0.05),蔗糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区SOD、CAT活性及血清BDNF含量降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05);与模型组比较,通督调神组大鼠海马CA1区SOD、CAT活性及血清BDNF含量升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区BDNF、TrkB、CREB mRNA及BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,通督调神组大鼠海马CA1区BDNF、TrkB、CREB mRNA及BDNF、Trk B、p-CREB蛋白表达、p-CREB/CREB比值升高(P<0.05)。结论:“通督调神”针刺可改善PSD大鼠抑郁样行为,其作用机制可能与抑制海马神经组织氧化应激,增强CREB/BDNF/Trk B信号通路活性有关。

耳穴电刺激配合声音掩蔽对耳鸣大鼠听觉皮层的CREB蛋白、BDNF及其受体TrkB表达的影响

目的:探讨耳穴电刺激配合声音掩蔽对耳鸣大鼠听觉皮层的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)表达的影响。方法:将27只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组。模型组及治疗组大鼠采取腹腔注射水杨酸钠诱导制作耳鸣模型;对照组注射0.9%NaCl溶液。造模成功后,治疗组采用耳穴"神门""胰胆"电刺激配合声音掩蔽法治疗,每天1次,治疗15d。采用声音惊吓反应监测系统监测各组大鼠的停顿声音预刺激抑制惊吓反应(GPIAS)及预刺激抑制反应(PPI),以WesternBlot法检测各组大鼠听觉皮层的BDNF及其受体TrkB,CREB和磷酸化CREB(p-CREB)蛋白表达。结果:①与对照组比较,模型组大鼠在12、16、20、28 kHz高频背景声音的GPIAS比值均下降(均P<0.05);与模型组比较,治疗组在12、16、20、28 kHz高频背景声音的GPIAS比值均升高(均P<0.05)。②与对照组比较,模型组BDNF蛋白表达、p-CREB蛋白表达均升高(均P<0.01),TrkB表达升高(P<0.05);治疗组与模型组BDNF和TrkB表达、CREB及p-CREB蛋白表达比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:耳穴电刺激配合声音掩蔽法能改善耳鸣大鼠高频背景声音的GPIAS比值变化,此作用可能与抑制耳鸣大鼠听觉皮层的BDNF/TrkB/CREB信号通路相关蛋白表达下调,进而逆转不良可塑性改变有关。

温胆汤含药血清对CREB mRNA沉默海马神经元细胞凋亡及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响

目的:探讨温胆汤对环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)mRNA沉默海马细胞活性、凋亡及海马脑源性神经营养因子/原肌球蛋白相关受体激酶/CREB(BDNF/TrkB/CREB)信号通路作用的影响。方法:制备温胆汤含药血清,将SD雄性大鼠随机分为温胆汤高、中、低剂量组、氯氮平组、正常生理盐水组,每组10只,其中每组15只。正常组予20 mL·kg-1生理盐水灌胃,氯氮平组给予0.02 g·kg-1氯氮平原药灌胃,温胆汤高、中、低剂量组分别予质量浓度为2,1,0.5 g·mL-1的等量温胆汤浓缩生药灌胃,1次/d,连续灌胃8 d后,股动脉取血,5 000 r·min-1离心15 min,倾取上清液,灭活,-80℃保存,备用。通过脂质体转染至海马细胞中,构建CREB mRNA沉默海马神经元细胞系,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证小分子干扰核糖核酸(siRNA)转录后效果。检测海马细胞周期和凋亡,正常海马细胞和CREB基因沉默海马细胞内BDNF,TrkB,CREB,钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA表达水平。结果:对于细胞凋亡,与正常大鼠血清组比较,各组别在24,48 h时,细胞凋亡显著降低(P<0.01);与正常大鼠血清-siRNA组比较,各给药组细胞凋亡显著降低(P<0.01)。对于BDNF,TrkB,CREB,CaMKⅡmRNA表达,与正常大鼠血清组比较,基因沉默正常组CREB,BDNF mRNA表达均显著下降(P<0.01);与正常大鼠血清-siRNA组比较,各给药组可显著提高BDNF mRNA表达(P<0.01),其中TrkB,CaMKⅡ各组间差异无明显统计学意义。结论:温胆汤含药血清可提高BDNF mRNA表达,通过调控BDNF/TrkB/CREB信号通路,以保护海马神经元,达到防治精神分裂症认知障碍的目的。

杜仲腰痛丸对腰椎间盘突出症慢性下肢痛大鼠海马BDNF-TrkB-CREB信号通路的影响

目的:探讨杜仲腰痛丸对腰椎间盘突出症(L D H)慢性下肢痛大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)-络氨酸激酶受体B(TrkB)-环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法:72只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、模型治疗组,每组24只。模型组、模型治疗组采用自体髓核移植法进行造模,正常组与模型组给予相同剂量0.9%氯化钠溶液灌胃;模型治疗组给予杜仲腰痛丸药液灌胃,灌胃剂量为0.26 g/kg,2次/d。用疼痛行为学(机械痛阈值和热痛阈值)评价造模是否成功,造模成功后,各组大鼠在给药前1天、给药后14、28d取大鼠海马切片,利用免疫荧光技术观察BDNF、TrkB和CREB蛋白在海马神经元细胞内的分布情况、实时荧光定量PCR技术观察海马神经元中BDNF、TrkB、CREB mRNA表达水平、蛋白免疫印迹考察BDNF、TrkB和CREB蛋白在各组大鼠海马神经元中的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠海马神经元中BDNF蛋白及其特异性受体TrkB和CREB蛋白表达及mRNA水平在给药前1天(造模后14 d)显著受到抑制(P<0.05,P<0.01);杜仲腰痛丸干预之后,与模型组比较,模型治疗组海马中BDNF、TrkB、CREB蛋白及mRNA表达和分布在给药后14、28 d显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论:杜仲腰痛丸通过上调大鼠海马神经元BDNF、TrkB和CREB蛋白及mRNA的表达水平,治疗LDH慢性下肢痛,因此,其治疗LDH的效应机制可能与激活海马神经元BDNF-TrkB-CREB信号通路相关。

电针“风池”“四神聪”介导NMDAR/CREB/BDNF信号通路改善血管性痴呆大鼠的学习记忆障碍

目的:观察电针“风池”“四神聪”对血管性痴呆(VD)大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路及海马区钙超载所致兴奋性毒性的影响,探究电针“风池”“四神聪”改善大鼠学习记忆障碍的作用机制。方法:选用SPF级雄性SD大鼠32只,随机分为正常组(6只)、假手术组(6只)和手术组(20只)。手术组采用改良的Pulsinelli四血管阻断(4-VO)法制备VD模型,将造模成功的12只大鼠随机分为模型组和电针组,每组6只。电针组于双侧“风池”及左右“四神聪”进行电针干预,予连续波,频率2 Hz,电流1 mA,以大鼠头部微颤为宜。电针干预每日1次,每次30 min,持续21d。Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;HE染色观察大鼠海马CA1区神经元形态;比色法检测大鼠血清、海马组织谷氨酸(GLU)含量及海马组织Ca^(2+)-三磷酸腺苷(ATP)酶活力;免疫组化法检测大鼠海马CA1区NMDAR、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)、磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(p-Ca MKⅡ)、磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(p-CREB)、CREB、BDNF蛋白表达;Western blot法检测大鼠海马组织NMDAR、CREB、p-CREB、BDNF蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长、穿越平台次数减少(P<0.01);海马神经元结构不同程度受损,海马CA1区组织结构疏松,排列结构散乱,网格状结构明显,神经元形态不规则,核仁固缩甚至溶解,胶质细胞增多,毛细血管扩张,散见炎性细胞浸润;血清及海马组织GLU含量、海马组织NMDAR蛋白表达升高(P<0.01),海马组织Ca^(2+)-ATP酶活力及Ca MKⅡ、p-Ca MKⅡ、CREB、p-CREB、BDNF蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05),p-CaMKⅡ/CaMKⅡ、p-CREB/CREB值降低(P<0.05)。与模型组比较,电针组大鼠逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增加(P<0.01);大鼠海马CA1区组织排列散乱程度稍有好转,神经元形态相对完整,核仁形态相对明显,固缩或溶解现象减轻,胶质细胞数量相对减少,毛细血管扩张程度减轻;血清及海马组织GLU含量、海马组织NMDAR蛋白降低(P<0.01),海马组织Ca^(2+)-ATP酶活力及Ca MKⅡ、p-Ca MKⅡ、CREB、p-CREB、BDNF蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),p-Ca MKⅡ/CaMKⅡ、p-CREB/CREB值升高(P<0.05)。结论:电针“风池”“四神聪”可以改善VD大鼠学习记忆功能障碍,其机制可能通过降低海马组织GLU含量,抑制海马神经元兴奋性毒性,介导NMDAR/CREB/BDNF信号通路相关蛋白表达,维持神经细胞存活和生长有关。

柴胡加龙骨牡蛎汤对慢性应激抑郁大鼠海马BDNF/TrkB/CREB通路的影响

目的:基于脑源性神经营养因子(BDNF)/络氨酸激酶B(TrkB)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)途径探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对慢性应激抑郁大鼠海马的影响。方法:取60只SD大鼠,其中10只作为空白组,余50只建立慢性应激抑郁大鼠模型后,随机分为5组,即模型组,盐酸氟西汀组(0.003 g·kg^(-1)),柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组(1.625,3.25,6.5 g·kg^(-1))。连续灌胃给药8周,1次/d,分别于造模前、造模后及给药后进行行为学实验评估大鼠抑郁状态。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马形态学变化,免疫组织化学法(IHC)检测大鼠海马组织中BDNF蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马组织中BDNF,TrkB,CREB mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)定量检测大鼠海马组织中BDNF,TrkB,CREB蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠糖水偏嗜率明显降低(P<0.05),水平得分、垂直得分明显降低(P<0.05),不动时间明显增加(P<0.05),漂浮时间显著增加(P<0.05),HE染色结果显示海马神经元结构损伤,免疫组织化学染色中BDNF表达明显降低(P<0.05),BDNF,TrkB,CREB mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,盐酸氟西汀组及柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组大鼠糖水偏嗜率明显升高(P<0.05),水平得分、垂直得分明显增加(P<0.05),不动时间明显减少(P<0.05),漂浮时间明显减少(P<0.05),海马神经元结构明显复原,免疫组织化学染色中BDNF表达明显增加(P<0.05),BDNF,TrkB,CREB mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤能显著改善经慢性应激刺激后大鼠的抑郁样行为,增强海马组织神经元的再生与修复,其机制可能与上调大鼠海马BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。

大补元煎通过上调BDNF/TrkB/CREB信号通路改善APP/PS1双转基因痴呆小鼠海马突触可塑性

目的:观察大补元煎对APP/PS1痴呆小鼠海马突触可塑性及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的作用,并探讨其改善突触可塑性的可能机制。方法:将APP/PS1小鼠36只分为模型组、多奈哌齐组(6.5×10-4g·kg-1·d-1)和大补元煎组(13.2 g·kg-1·d-1),野生鼠12只设为正常组,正常组和模型组给予等体积生理盐水,各组连续灌胃30 d。应用Morris水迷宫检测各组小鼠的学习记忆能力,应用尼氏染色和高尔基染色观察海马区神经元和突触的病理形态变化,应用免疫荧光(IF)观察海马突触后致密蛋白95(PSD95)及突触素(SYN)的蛋白表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马中BDNF,TrkB,CREB及磷酸化CREB(p-CREB)的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠平台潜伏期和游泳总路程增加(P<0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间减少(P<0.01),小鼠海马CA3区神经元胞内尼氏体减少或消失,小鼠海马CA3区神经元及树突分支数量、树突棘密度减少(P<0.01),小鼠海马SYN,PSD95,BDNF,TrkB及p-CREB的蛋白表达水平减少(P<0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠平台潜伏期和游泳总路程减少(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间增加(P<0.05,P<0.01),小鼠海马CA3区神经元胞内尼氏体数量增多,小鼠海马CA3区神经元及树突分支数量,树突棘密度增加(P<0.05,P<0.01),小鼠海马SYN,PSD95,BDNF,TrkB及p-CREB的蛋白表达水平增加(P<0.05,P<0.01)。结论:大补元煎改善APP/PS1双转基因小鼠突触可塑性的机制可能与其上调小鼠海马中BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。

五味子乙素对慢性应激抑郁大鼠海马BDNF/TrkB/CREB通路的影响

目的 研究五味子乙素对慢性应激抑郁大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶B(TrkB)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法 40只SD大鼠随机选择10只作为对照组,其余大鼠采用慢性不可预知温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)结合孤养制备抑郁症模型,造模结束后随机分为3组:模型组、盐酸氟西汀(3 mg·kg^(-1))组、五味子乙素(5 mg·kg^(-1))组,每天ig给药1次,连续8周。分别于造模前、造模后及给药后进行旷场、悬尾、强迫游泳行为学实验;通过苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马形态学改变;免疫组织化学染色(IHC)法观察大鼠海马BDNF蛋白表达;实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测大鼠海马BDNF、 TrkB、 CREB mRNA相对表达量;Western blotting检测大鼠海马BDNF、TrkB、CREB蛋白相对表达量。结果 与对照组比较,模型组大鼠旷场实验水平、垂直得分显著降低(P<0.05),悬尾不动时间和强迫游泳漂浮时间显著增加(P<0.05);HE染色结果 显示海马神经元结构损伤,IHC结果 显示海马BDNF表达明显降低;海马BDNF、TrkB、CREB mRNA及蛋白相对表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,盐酸氟西汀及五味子乙素组大鼠水平、垂直得分显著增加(P<0.05),不动时间和漂浮时间显著减少(P<0.05);海马神经元结构明显复原,海马组织中BDNF染色明显增加;BDNF、TrkB、 CREB mRNA和蛋白相对表达量显著增加(P<0.05)。结论 五味子乙素可以改善慢性应激抑郁大鼠抑郁样行为、海马区神经元数量及形态,其机制可能与上调BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。

水合橙皮内酯通过BDNF/TrkB/CREB信号通路对阿尔兹海默症的保护作用

目的探究水合橙皮内酯对阿尔兹海默症大鼠的保护作用及可能机制。方法SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、阿尔兹海默症组(AD组)和水合橙皮内酯组(MH组),每组10只。水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;HE染色观察大鼠海马组织病理学变化;尼氏染色观察大鼠海马组织神经元存活;ELISA方法检测大鼠海马组织神经递质及相关因子水平;TUNEL实验检测大鼠海马组织细胞凋亡;Western blot检测大鼠海马组织BDNF、TrkB和p-CREB蛋白表达水平。结果水合橙皮内酯降低阿尔兹海默症大鼠逃避潜伏期,增加大鼠穿越平台次数和海马组织神经元细胞数,降低大鼠海马组织TUNEL阳性细胞数,增加大鼠海马组织BDNF、TrkB和p-CREB蛋白表达水平。结论水合橙皮内酯通过激活BDNF/TrkB/CREB信号通路改善AD大鼠学习记忆能力。

穴位电刺激对卒中后抑郁大鼠行为学及神经递质水平影响

目的:观察穴位电刺激对卒中后抑郁模型大鼠抑郁样行为及神经递质水平的影响,探讨其治疗卒中后抑郁的可能机制。方法:将36只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组与治疗组,每组12只。模型组、治疗组采用改良Zea Longa线栓法联合慢性不可预知温和刺激法建立卒中后抑郁模型,假手术组仅作颈动脉分离,不进行造模。治疗组于造模结束后1 d对百会、内关、大椎与太冲进行电刺激治疗,每次干预15 min,1次/d,连续干预21 d。于造模结束后及干预21 d后对各组大鼠进行Zea Longa神经行为学评分、糖水消耗实验与敞箱实验;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清5-羟色胺(5-HT)、脑源性神经营养因子(BDNF)含量;实时荧光定量PCR法检测大鼠海马组织BDNF、酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)和环磷腺普效应元件结合蛋白(CREB)mRNA表达情况。结果:与假手术组比较,造模后模型组及治疗组大鼠Zea Longa神经行为学评分升高,差异具有统计学意义(P<0.05),糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分降低,差异具有统计学意义(P<0.05),提示模型构建成功。经穴位电刺激干预后,模型组、治疗组与假手术组Zea Longa神经行为学评分依次降低,糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分依次增高,血清5-HT、BDNF含量依次增高,海马组织BDNF、TrkB与CREB mRNA表达水平依次增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:穴位电刺激可改善卒中后大鼠抑郁样行为、提高神经递质水平,其作用机制可能与上调CREB/BDNF/TrkB信号通路表达有关。

基于网络药理学的舒心安神汤抗抑郁实验研究

目的:采用网络药理学、分子对接和动物实验探讨舒心安神汤治疗抑郁症的作用及机制。方法:通过TCMSP、Swiss Target Prediction、Uniprot数据库筛选舒心安神汤中的活性成分及作用靶点,采用Gene Cards、OMIM、Drug Bank数据库获得抑郁症疾病靶点;用Cytoscape软件构建可视化网络,利用Venny 2.1软件筛选、收集药物与疾病的共有靶点。将筛选出的药物和疾病的共同靶点输入String数据库,获得蛋白质相互作用(PPI)网络图,进一步筛选出核心靶点。于DAVID数据库中对交集基因进行GO富集和KEGG通路分析,预测其富集的信号通路并进行可视化展示,将核心靶点与相关活性成分在CB-Dock在线平台进行分子对接验证,并采用LC-MS对舒心安神汤主要化学成分进行分析鉴定。构建皮质酮诱导抑郁小鼠模型,利用行为学实验、尼氏染色、Western blotting法进行舒心安神汤药效评估并对脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TRKB)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)反映突触可塑性相关蛋白的表达进行考察。结果:网络药理学预测得到舒心安神汤治疗抑郁症的潜在活性成分141个,主要为槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚、芍药苷、莫诺苷、斯皮诺素及姜辣素等活性成分,关键靶点包括IL6、ESR1、AKT1和EGFR等,GO富集分析结果发现抑郁反应与蛋白磷酸化调控、细胞外基质激酶结合及蛋白激酶活性等相关。KEGG通路富集结果显示,舒心安神汤治疗抑郁可能通过调节PI3K-AKT、HIF-1及MAPK等信号通路发挥作用。分子对接发现芍药苷、莫诺苷、斯皮诺素、姜辣素与ESR、AKT1和BDNF结合能力较强。LC-MS鉴定出舒心安神汤中含有15种高响应化学成分,与网络药理学核心成分预测基本一致。动物实验结果表明,与模型对照组比较,舒心安神汤20.5 g/kg组的小鼠体质量、蔗糖偏好明显增加,强迫游泳时间和新奇抑制摄食试验潜伏期明显减少(P<0.05);尼氏染色显示模型对照组小鼠海马CA3区神经元排列欠规则,细胞周围间隙增宽,胞质内尼氏小体明显减少,而舒心安神汤20.5 g/kg组小鼠海马CA3区神经元排列较为规则,细胞周围间隙缩短,尼氏体较为丰富;舒心安神汤20.5 g/kg组能明显上调小鼠海马组织TRKb、p-AKT、BDNF、CREB的蛋白表达(P<0.05)。结论:舒心安神汤可能通过其含有的槲皮素、β-谷甾醇、芍药苷、姜辣素和斯皮诺素等主要成分作用于ESR1、AKT1等靶基因,并影响BDNF/TRKB信号通路及下游相关蛋白等,发挥改善抑郁症的作用,其机制可能与上调BDNF、TRKB、p-AKT及CREB蛋白表达,改善海马神经元可塑性有关。

褪黑素对抑郁症睡眠障碍模型大鼠行为的影响及机制的研究

目的探讨褪黑素对抑郁症睡眠障碍模型大鼠的改善作用和可能机制。方法大鼠构建抑郁症睡眠障碍模型。造模成功的大鼠随机分为模型组、褪黑素低、中、高剂量组(10、20和40 mg·kg^(-1)褪黑素腹腔注射给药),连续21 d,正常大鼠为对照组,每组11只。采用新奇抑制摄食实验评估对大鼠抑郁样行为。比色法检测大鼠脑组织中超氧化歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中5-羟色胺(5-HT)、谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)含量。蛋白质印迹法和免疫组化法检测大鼠脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶B(TrkB)和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达水平。结果对照组、模型组、褪黑素低、中、高剂量实验组大鼠进食潜伏期分别为(281.75±34.77),(567.30±51.56),(514.52±33.65),(405.21±46.94)和(395.73±35.04)s;SOD活性分别为(62.28±8.80),(38.97±2.67),(44.99±2.32),(49.49±3.59)和(52.39±6.34)U·mL^(-1);MDA含量分别为(3.31±0.38),(6.11±0.61),(5.02±0.44),(4.07±0.40),(3.99±0.44)nmol·mg^(-1);5-HT含量分别为(566.78±78.85),(342.28±46.63),(400.15±37.07),(480.35±22.90)和(566.34±54.45)pg·mL^(-1);Glu含量分别为(39.96±3.26),(68.28±9.48),(51.68±3.24),(45.74±3.78),(40.11±2.62)ng·mL^(-1);GABA含量分别为(32.53±2.45),(46.58±5.45),(41.45±3.88),(37.18±4.70),(35.71±3.02)ng·mL^(-1);BDNF蛋白表达水平分别为(0.85±0.07),(0.24±0.04),(0.45±0.07),(0.57±0.06),(0.57±0.06);TrkB蛋白表达水平分别为(0.78±0.10),(0.29±0.04),(0.45±0.07),(0.58±0.05),(0.69±0.10);CREB蛋白表达水平分别为(1.00±0.07),(0.43±0.06),(0.63±0.05),(0.75±0.08),(0.83±0.08)。上述指标,对照组与模型组相比,褪黑素低、中、高剂量组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论褪黑素可能通过上调BDNF/TrkB/CREB通路来调控神经递质水平、抑制氧化应激反应,进而改善抑郁症睡眠障碍。