奥氮平介导环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/脑源性神经营养因子/酪氨酸蛋白激酶受体B通路对精神分裂模型大鼠的神经修复作用

目的 探讨奥氮平通过对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)通路的影响对精神分裂模型大鼠的神经修复作用。方法 将60只大鼠纳入对照组、模型组、奥氮平低、中、高剂量组,各组均10只。模型组、奥氮平低、中、高剂量组大鼠进行MK-801腹腔注射0.2 mg/(kg·d),对照组注射等量生理盐水。模型建立成功24 h后,奥氮平低、中、高剂量组分别以0.5、1.0、1.5 mg/(kg·d)奥氮平溶液灌胃,对照组、模型组同剂量生理盐水灌胃。按照共济失调和刻板行为标准对大鼠行为学进行评分;Morris水迷宫实验评定大鼠认知功能及学习能力;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平;观察海马组织病理学变化;检测海马区细胞凋亡及CREB/BDNF/TrkB通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠共济失调、刻板行为评分、TNF-α、IL-6表达、细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠跨越平台次数、目标象限停留时间、CREB、磷酸化CREB(p-CREB)、磷酸化TrkB(p-TrkB)、TrkB、BDNF蛋白相对表达极显著减少(P<0.01),奥氮平低、中剂量组显著减少(P<0.05)。与模型组比较,奥氮平低、中剂量组跨越平台次数、目标象限停留时间显著增加(P<0.05),奥氮平高剂量组极显著增加(P<0.01)。模型组以及奥氮平低剂量组中海马细胞肿大明显、细胞核破碎分裂、固缩,组织排列杂乱;奥氮平中、高剂量组大鼠海马细胞中少见破碎分裂以及核固缩现象,整体组织与对照组大鼠相似。结论 奥氮平对精神分裂症模型大鼠的神经修复作用机制涉及到改善大鼠认知功能受损、保护大鼠海马神经细胞以及激活CREB/BDNF/TrkB信号通路的表达。

环磷酸腺苷反应元件结合蛋白-脑源性神经营养因子信号通路功能低下与抑郁症

抑郁症为心境障碍的主要类型,因高患病率、高复发率、高自杀率等特点成为严重影响人类健康的公共卫生及社会问题,但发病机制不详。“海马神经可塑性障碍”为新近有关抑郁症发病神经生物学机制研究热点。CREB(环磷酸腺苷反应元件结合蛋白)-BDNF(脑源性神经营养因子)/TrkB(酪氨酸激酶受体B)信号通路是神经再生关键环路之一,该信号通路相关蛋白表达与抑郁症发生、发展关系密切,阐明该通路信号功能将为探索抑郁症神经生物学病因提供必要信息,并为临床开发靶点明确抗抑郁创新药物提供理论基础。

腧穴“解郁方”对慢性不可预测轻度应激抑郁大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴及BDNF/TrkB/CREB通路的影响

目的:观察腧穴“解郁方”对慢性不可预测轻度应激(CUMS)抑郁大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴和脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶B受体(TrkB)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法:40只无特定病原体(SPF)级Sprague Danley(SD)雄性大鼠随机分为空白组(10只)、模型组(10只)、西药组(10只)、针刺组(10只),除空白组外,其余3组连续28 d构建CUMS抑郁大鼠模型,造模成功后,西药组连续14 d灌胃盐酸帕罗西汀混悬液,每日1次;针刺组针刺百会、太冲、神门,每日1次,每次20 min,连续针刺14 d。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马病理变化,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)水平;免疫组化(IHC)检测海马BDNF、TrkB表达情况,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)及实时荧光定量-聚合酶链式反应(PCR)测定海马BDNF、TrkB、CREB蛋白及mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组血清CRH、ACTH和CORT含量上升(P<0.01),海马病理损伤严重,海马BDNF、TrkB平均光密度降低(P<0.01),BDNF、TrkB、CREB蛋白及mRNA明显下降(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,针刺组血清CRH、ACTH、CORT含量下降(P<0.05),海马病理损害明显减轻,BDNF、TrkB平均光密度明显增加(P<0.05),BDNF、CREB、TrkB蛋白及mRNA表达水平上升(P<0.05)。结论:腧穴“解郁方”可能通过调节HPA轴和调控BDNF/TrkB/CREB信号通路,改善CUMS诱导的大鼠抑郁样行为。

电针联合五子衍宗丸通过调节BDNF/TrkB/CREB信号通路对帕金森病小鼠的治疗作用

目的:观察电针联合五子衍宗丸对帕金森病小鼠黑质脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)/环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(CREB)通路的影响。方法:将108只雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、电针组、五子衍宗丸组、联合观察组、抑制剂组、电针+抑制剂组、五子衍宗丸+抑制剂组、联合+抑制剂组9组,每组12只。除正常组、抑制剂组外,其余组给予1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射造模,第1天15 mg/kg,第2天20 mg/kg,第3~7天30 mg/kg,均0.2 mL/次,1次/d。自造模第1天进行干预,电针观察组别给予电针干预,五子衍宗丸观察组别早晚给予五子衍宗丸药液,抑制剂注射组别腹腔注射TrkB抑制剂ANA-12,连续干预14 d。干预结束后对比各组步态实验、旷场实验、爬杆实验结果,小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)及BDNF、TrkB、CREB表达。结果:与正常组比较,模型组出现明显的运动障碍,黑质TH平均荧光强度及TH、BDNF、TrkB、CREB蛋白表达低(P<0.05);与模型组比较,电针组、五子衍宗丸组、联合观察组运动障碍均得到改善,黑质TH平均荧光强度及TH、BDNF、TrkB、CREB蛋白表达高(P<0.05);与电针组、五子衍宗丸组比较,联合观察组的运动障碍得到改善,其他指标表达增高(P<0.05)。结论:电针联合五子衍宗丸可能通过调控BDNF/TrkB/CREB信号通路来改善PD小鼠的运动障碍,保护多巴胺能神经元。

柴胡加龙骨牡蛎汤对肿瘤后抑郁模型大鼠海马BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响

目的探讨柴胡加龙骨牡蛎汤(CLM)对肿瘤后抑郁模型大鼠海马脑源性神经营养因子/酪氨酸激酶受体B/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(BDNF/TrkB/CREB)信号通路的影响。方法采用接种腹水癌细胞系S180细胞建立肿瘤大鼠模型,再通过慢性不可预知温和刺激(CUMS)诱导肿瘤后抑郁大鼠模型。将12只模型大鼠分为模型对照组、CLM组(每10 g体质量给药0.1 mL),各6只;另设正常对照组(6只)。采用旷场实验(OFT)、悬尾实验(TST)、强迫游泳实验(FST)检测大鼠的抑郁样行为,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,以及海马组织白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与IL-10的水平,免疫印迹(Western blot)法检测BDNF,TrkB,CREB及磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白(p-CREB)的水平。结果与模型对照组比较,CLM组大鼠OFT距离、时间及TST,FST静止时间均显著减少(P<0.01),血清SOD和GSH-Px水平均显著升高(P<0.01),海马组织中IL-1β和TNF-α水平均显著升高(P<0.01),IL-10水平显著降低(P<0.01),BDNF和TrkB蛋白表达及p-CREB/CREB均显著上调(P<0.01)。结论CLM可显著改善肿瘤后抑郁模型大鼠的抑郁样行为,抑制海马神经炎性反应,可能与上调BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。

电针对抑郁大鼠海马组织CREB/BDNF/TrkB信号通路的影响

目的:探讨电针对抑郁大鼠海马组织CREB/BDNF/TrkB信号通路的影响。方法:采用孤养结合慢性不可预知应激(CUMS)方法建立抑郁大鼠模型,随机分为空白组、模型组、电针组、氟西汀组,每组10只。电针组选取“百会”、“神庭”、“合谷”、“太冲”,每日造模前1 h针刺,留针20 min,1次/d,持续21 d;氟西汀组:每日造模前1 h氟西汀(10 mg/kg,1 mg/mL)灌胃给药,持续21 d。观察大鼠的体质量变化、旷场实验的站立次数和运动距离、强迫游泳实验的不动时间,ELISA法检测血清5⁃HT、DA、NE的含量;Western blot检测海马组织中BDNF、CREB、TrkB的表达;实时荧光定量PCR检测海马组织中BDNF、CREB mRNA的表达。结果:造模干预后:与空白组比较,模型组大鼠体质量、站立次数、运动距离、血清5⁃HT、DA、NE的含量、海马组织中BDNF、CREB、TrkB的表达显著下降(均P<0.01),不动时间显著升高(P<0.01);与模型组比较,电针组、氟西汀组大鼠体质量、站立次数、运动距离、血清5⁃HT、DA、NE的含量、海马组织中BDNF、CREB、TrkB的表达显著升高(均P<0.05),不动时间显著显著降低(P<0.05);电针组和氟西汀组比较,各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针能够显著改善大鼠的抑郁症状,其机制可能与调控海马组织中BDNF/TrkB/CREB信号通路相关蛋白和提高单胺类神经递质5⁃HT、NE和DA的含量有关,从而产生抗抑郁作用。

“通督解郁”针刺在CUMS抑郁模型大鼠前额叶皮质BDNF/TrkB/CREB通路的作用效应

目的:探究K252a的作用下,“通督解郁”针刺在慢性温和不可预知应激(CUMS)模型大鼠前额叶皮质BDNF/TrkB/CREB通路的作用机理。方法:64只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组、针刺组、模型+DMSO组、模型+K252a组、氟西汀+K252a组和针刺+K252a组,每组8只。造模在CUMS结合孤养法外,针刺组、针刺+K252a组和氟西汀组、氟西汀+K252a组在造模前30 min分别施行手针百会、神庭,电针内关、太冲治疗(频率2 Hz,连续波,电流1 mA,留针30 min)和灌胃治疗;模型+DMSO组和模型+K252a组、氟西汀+K252a组及针刺+K252a组分别在造模前1 h侧脑室注射DMSO溶液和K252a,共21 d。行为学采用体质量、糖水偏好实验以及强迫游泳实验进行评价;免疫组化检测大鼠前额叶组织BDNF、TrkB和CREB阳性细胞平均光密度值IOD;Western blot及PCR法检测大鼠前额叶皮质中相关蛋白及mRNA表达。统计学分析采用LSD检验和非参数检验。结果:与空白组比较,模型组大鼠的体质量差、糖水偏好指数SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均明显下调,差异具有统计学意义(P<0.01),强迫游泳的不动时间IT明显上调,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,针刺组、氟西汀组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均明显上调,差异具有统计学意义(P<0.01),IT下调,差异具有统计学意义(P<0.01),模型+K252a组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05),IT增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。与针刺组比较,针刺+K252a组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均减少,差异具有统计学意义(P<0.05),IT增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:“通督解郁”针刺对CUMS模型大鼠的抑郁行为有明显改善作用,其机制可能上调了前额叶皮质上的BDNF/TrkB/CREB通路,从而起到治疗抑郁症的作用。

基于αCaMKⅡ-CREB-BDNF信号通路研究调心方对APP/PS1双转基因AD小鼠学习记忆和突触可塑性的影响

目的:观察调心方对APP/PS1双转基因AD小鼠海马CA1区长时程增强(LTP)、海马区α钙/钙调素依赖激酶Ⅱ(αCaMKⅡ)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)、突触后致密物95(PSD-95)mRNA和蛋白表达的影响,从αCaMKⅡ-CREB-BDNF信号通路的角度探讨调心方改善APP/PS1双转基因AD小鼠学习记忆和突触可塑性的作用机制。方法:选择54只3月龄APP/PS1雄性小鼠,采用随机数字表法分为模型组、调心方组、多奈哌齐组,每组18只,另设同月龄同品系18只C57/BL6雄性野生型小鼠为正常组。参照药理试验中动物与人体间的等效剂量换算标准进行折算,多奈哌齐组和调心方组均按照人的等效剂量(体质量:60 kg)折算出药物剂量。正常组和模型组给予等量的生理盐水,剂量10 mL/(kg·d);多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐灌胃,剂量为0.05 mg/(kg·d),调心方组给予调心方颗粒灌胃,剂量为0.057 g/(kg·d);4组小鼠于3月龄时进行灌胃给药处理,1次/d,连续灌胃3个月。采用电生理技术在离体海马脑片上诱导4组小鼠海马CA1区LTP;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测4组小鼠海马αCaMKⅡ、CREB、BDNF、PSD-95 mRNA表达情况;采用免疫印迹(WB)法检测4组小鼠海马p-αCaMKⅡ、p-CREB、BDNF、PSD-95蛋白表达情况。结果:①电生理结果:在0.1~0.7 mA刺激强度下,4组小鼠海马I/O曲线斜率无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05)。在20~250 ms刺激间隔下,4组小鼠的PPF易化无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05)。在第50~60 min稳定期内,与模型组比较,调心方组小鼠诱导的LTP中fEPSP斜率明显提高(P<0.05)。②RT-qPCR结果:与正常组比较,模型组小鼠海马αCaMKⅡ、CREB、BDNF和PSD-95 mRNA表达均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,调心方组小鼠海马αCaMKⅡ、CREB、BDNF和PSD-95 mRNA表达均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。③Western blot法检测结果:与正常组比较,模型组小鼠海马p-αCaMKⅡ、p-CREB、BDNF和PSD-95蛋白表达均明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,调心方组小鼠海马的p-αCaMKⅡ、p-CREB、BDNF和PSD-95的蛋白表达均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:调心方能够改善APP/PS1双转基因AD小鼠海马CA1区LTP、提高PSD-95 mRNA和蛋白的表达,从而改善APP/PS1双转基因AD小鼠学习记忆功能和突触可塑性,其作用机制可能与其上调海马αCaMKⅡ-CREB-BDNF信号通路水平有关。

基于BDNF/TrkB/ERK/CREB信号通路探究温笑散通过促进神经发生抗抑郁的作用机制

目的:探讨温笑散改善皮质酮诱导的小鼠抑郁样行为的作用机制。方法:雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、帕罗西汀组(20 mg·kg^(-1))、温笑散低、高剂量组(3.27、6.54 g·kg^(-1)),正常组和模型组给予等体积的生理盐水,除正常组外其他各组在灌胃0.5 h后皮下注射皮质酮诱导抑郁模型。给药结束后检测小鼠抑郁样行为;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清皮质酮含量;尼氏染色观察海马神经元损伤情况;免疫荧光检测海马齿状回(DG)中双皮质素(DCX)表达;蛋白免疫印迹法检测海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路相关蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠糖水偏好率显著降低、悬尾不动时间显著增加(P<0.01),旷场中心区域的停留时间和运动总距离明显减少(P<0.05,P<0.01),血清皮质酮水平显著升高(P<0.01),海马DG区神经元体积明显缩小、细胞核染色加深,DG区的DCX表达减少,海马中BDNF、磷酸化(p)-TrkB、p-ERK、p-CREB蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,温笑散低剂量组糖水偏好、旷场、悬尾行为学指标明显改善(P<0.05,P<0.01),温笑散高剂量组糖水偏好、旷场行为学指标明显好转(P<0.05,P<0.01);温笑散给药组血清皮质酮水平均显著降低(P<0.01),海马DG区神经元结构和形态正常,细胞核明显、尼氏体丰富,DG区DCX的表达均升高,温笑散高剂量组海马中BDNF、p-TrkB、p-ERK、p-CREB蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:温笑散能改善皮质酮诱导的小鼠抑郁样行为,促进神经发生,其作用机制可能与激活BDNF/TrkB/ERK/CREB信号通路相关。

电针对脑缺血再灌注损伤诱导的学习记忆障碍大鼠BDNF/TRKB/CREB信号通路和海马突触可塑性的影响

目的:观察电针对脑缺血再灌注损伤学习记忆障碍模型大鼠海马中脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TRKB)/磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路蛋白、突触可塑性标志蛋白及突触超微结构的影响,探讨电针改善脑卒中后认知障碍的机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和电针组,每组12只。采用改良的Zea Longa线栓法构建并结合神经功能缺损评分筛选出脑缺血再灌注后学习记忆障碍大鼠模型。电针组予“神庭”“百会”电针治疗,30 min/次,1次/d,连续14 d。采用Zea Longa神经功能评分评价大鼠神经功能缺损程度,Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,尼氏染色观察大鼠海马CA1区神经元形态,透射电镜观察海马CA1区突触超微结构并测量突触间隙宽度和突触后致密物(PSD)厚度,免疫荧光染色法观察海马CA1区BDNF、PSD-95、突触素(SYN)阳性表达水平,Western blot法检测海马组织BDNF、TRKB、CREB、PSD-95和SYN的蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,模型组的神经功能评分显著升高(P<0.01),逃避潜伏期(EL)显著延长(P<0.01),穿越原平台次数显著减少(P<0.01),海马CA1区神经元数量减少、形态不完整,突触间隙增宽(P<0.01),PSD厚度显著减小(P<0.01),BDNF、PSD-95、SYN阳性表达显著降低(P<0.01),BDNF、TRKB、CREB、PSD-95和SYN蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,治疗后电针组的神经功能评分显著降低(P<0.01),在造模后的第12、13天EL显著缩短(P<0.05,P<0.01),穿越原平台次数显著增加(P<0.01),神经元形态改善,突触间隙缩窄(P<0.01),PSD厚度显著增大(P<0.01),BDNF、PSD-95、SYN阳性表达显著升高(P<0.05),BDNF、TRKB、CREB、PSD-95和SYN蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:电针可能通过上调BDNF/TRKB/CREB通路蛋白,促进突触可塑性标志蛋白PSD-95、SYN的表达,改善突触超微结构,增强突触可塑性,减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的认知障碍。

当归补血汤及其主要活性成分阿魏酸对糖尿病抑郁症模型大鼠的影响及机制研究

目的探讨当归补血汤及其主要活性成分阿魏酸对糖尿病抑郁症(Diabetes mellitus with depression,DD)模型大鼠的影响及机制。方法将32只雄性自发性2型糖尿病(Goto-Kakizaki,GK)大鼠随机分为模型组、氟西汀组(2.20 mg·kg^-1)、当归补血汤组(4.0 g·kg^-1)和阿魏酸组(1.36 mg·kg^-1),每组8只,另取8只普通Wistar大鼠作为正常对照组。采用慢性温和不可预知性应激抑郁(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型复制方法造模,同时按上述剂量灌胃给药(10 mL·kg^-1),每日1次,连续4周。全程监测动物体质量及随机血糖;末次给药后,采用悬尾试验、强迫游泳和旷场实验观察动物行为学变化;采用ELISA法测定大鼠血清和海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)的含量;采用HE染色法进行大鼠海马组织病理形态学观察。结果与正常对照组比较,模型组大鼠体质量逐渐下降,血糖值始终明显升高(P <0.01);大鼠悬尾和强迫游泳的不动时间明显增加,而在旷场的自主运动总距离明显减少(P <0.001);血清BDNF及海马组织CREB、BDNF、TrkB的含量均明显降低(P <0.001)。与模型组比较,各给药组大鼠体质量逐渐增加,在给药2周后开始随机血糖值均明显下降(P <0.05,P <0.01);悬尾和强迫游泳不动时间明显缩短,自主运动距离明显增加(P <0.01,P <0.05);血清BDNF及海马组织CREB、BDNF、TrkB含量均明显上升(P <0.05,P <0.01)。结论当归补血汤及其主要活性成分阿魏酸能够显著改善糖尿病抑郁模型大鼠的抑郁样行为,保护海马神经元,其作用机制可能与CREB/BDNE/TrkB信号通路有关。

芍甘木瓜汤通过BDNF/TrkB/CREB信号通路改善脑卒中偏瘫痉挛状态大鼠神经行为学研究

目的观察芍甘木瓜汤对脑卒中偏瘫痉挛状态大鼠神经行为学的影响,并探讨对脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路的调控机制。方法取50只SD大鼠采用改良线栓法制作大脑中动脉梗死模型,选取建模成功大鼠随机分为模型组、巴氯芬(0.008 g/kg)组和芍甘木瓜汤低、中、高剂量(0.05、0.10、0.15 g/kg)组。另取10只SD大鼠不栓塞大脑中动脉作为假手术组,于再灌注2 h后ig给药,每天1次,连续2周,假手术组和模型组ig等量生理盐水。干预前后分别采用Zea Longa量表、改良Ashworth量表评价神经行为学、肌张力变化,采用大鼠多导生理记录仪测定上肢伸直幅度;酶联免疫法检测大鼠干预前后血清BDNF、TrkB水平;苏木素-伊红(HE)染色观察缺血半暗带脑组织病理变化,透射电镜下观察缺血半暗带脑组织神经元超微结构;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测缺血半暗带脑组织BDNF、TrkB-FL、TrkB-T1、CREB mRNA表达;Western blotting检测BDNF、TrkB-FL、TrkB-T1、CREB蛋白表达及p-CREB水平。结果干预后巴氯芬组和芍甘木瓜汤各剂量组的Zea Longa量表、改良Ashworth量表分级均较干预前和模型组(干预后)显著改善(P<0.05),上肢伸直幅度均较干预前和模型组(干预后)均显著增加(P<0.05),血清BDNF、TrkB水平均较干预前和模型组(干预后)显著升高(P<0.05),缺血半暗带脑组织病理变化和神经元超微结构均较模型组明显改善。模型组缺血半暗带脑组织BDNF、TrkB-FL mRNA与蛋白表达,p-CREB蛋白水平均显著低于假手术组(P<0.05),巴氯芬组和芍甘木瓜汤各剂量组均较模型组显著升高(P<0.05);模型组缺血半暗带脑组织TrkB-T1 mRNA与蛋白表达显著高于假手术组(P<0.05),巴氯芬组和芍甘木瓜汤各剂量组均较模型组显著下降(P<0.05)。各组缺血半暗带脑组织CREB mRNA表达差异无统计学意义。结论对脑卒中偏瘫痉挛状态大鼠ig予以芍甘木瓜汤可改善其神经行为学,降低肌张力,增加血清BDNF、TrkB水平,减轻缺血半暗带脑组织病理和神经元超微结构变化,推测与激活BDNF/TrkB/CREB通路,上调BDNF、TrkB-FL mRNA与蛋白表达,下调TrkB-T1 mRNA与蛋白表达,增加p-CREB水平有关。

“通督调神”针刺对脑卒中后抑郁大鼠海马CREB/BDNF/TrkB信号通路的影响

目的:观察“通督调神”针刺对脑卒中后抑郁(PSD)大鼠抑郁样行为以及海马环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)通路的调节作用,探讨其改善PSD的可能机制。方法:将36只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、通督调神组,每组12只。模型组、通督调神组大鼠采用Zea Longa线栓法和慢性不可预知性温和应激(CUMS)法复合制备PSD模型。通督调神组大鼠于造模结束后第4天予针刺“大椎”“水沟”“百会”“神庭”,每次干预40 min,每天1次,每周6次,连续干预4周。分别于PSD模型造模结束后第2天和干预4周后进行大鼠Zea Longa神经行为学评分、蔗糖水消耗实验和敞箱实验;生化法检测大鼠海马CA1区超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;ELISA法检测大鼠血清BDNF含量;实时荧光定量PCR法检测大鼠海马CA1区BDNF、Trk B、CREB mRNA表达;Western blot法检测大鼠海马CA1区BDNF、Trk B、CREB,p-CREB蛋白表达。结果:与假手术组比较,造模后、干预后模型组及造模后通督调神组大鼠Zea Longa神经行为学评分升高(P<0.05),蔗糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分降低(P<0.05)。与模型组比较,通督调神组大鼠干预后Zea Longa神经行为学评分降低(P<0.05),蔗糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分升高(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区SOD、CAT活性及血清BDNF含量降低(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05);与模型组比较,通督调神组大鼠海马CA1区SOD、CAT活性及血清BDNF含量升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马CA1区BDNF、TrkB、CREB mRNA及BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,通督调神组大鼠海马CA1区BDNF、TrkB、CREB mRNA及BDNF、Trk B、p-CREB蛋白表达、p-CREB/CREB比值升高(P<0.05)。结论:“通督调神”针刺可改善PSD大鼠抑郁样行为,其作用机制可能与抑制海马神经组织氧化应激,增强CREB/BDNF/Trk B信号通路活性有关。

基于cAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤抗抑郁的作用机制

目的:该研究基于环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路探究柴胡加龙骨牡蛎汤对慢性不可预见性温和应激(CUMS)法制备的大鼠抑郁模型的干预作用。方法:随机数字表法将60只SD大鼠分为正常组、模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组和氟西汀组。除正常组外,其他各组进行49 d的CUMS制备大鼠抑郁模型。第29天开始给药,柴胡加龙骨牡蛎汤组低、中、高剂量组分别给予柴胡龙骨牡蛎汤颗粒剂2.89、5.78、11.56 g·kg^(-1),氟西汀组给予盐酸氟西汀胶囊2.06 mg·kg^(-1)。旷场实验和强迫游泳实验观察大鼠行为学表现,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠海马组织5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、cAMP水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马组织PKA、CREB、BDNF mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织PKA、BDNF蛋白表达水平;免疫组化法(IHC)检测CREB定位表达;苏木素-伊红(HE)染色和尼氏染色观察海马组织形态学的变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠强迫游泳不动时间显著增加(P<0.01);运动总距离、中央区停留时间、中央区进入总次数、中央区运动距离均显著降低(P<0.01),海马5-HT、NE、cAMP含量显著降低(P<0.01),PKA蛋白表达、BDNF蛋白表达和mRNA水平、CREB蛋白表达和mRNA水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤给药组大鼠强迫游泳不动时间均显著降低(P<0.01),柴胡加龙骨牡蛎汤给药组大鼠运动总距离、中央区停留时间、中央区运动距离显著、央区进入次数明显增加(P<0.05,P<0.01),柴胡加龙骨牡蛎汤给药组海马5-HT含量、NE含量、cAMP含量明显增高(P<0.05,P<0.01),柴胡加龙骨牡蛎汤给药组海马PKA蛋白表达、CERB和BDNF的mRNA及蛋白表达都显著增加(P<0.01)。HE和尼氏染色显示海马神经元结构恢复。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤调节抑郁大鼠海马单胺类神经递质5-HT、NE水平,激活cAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路,上调BDNF表达,保护海马神经元的结构和功能,缓解大鼠焦虑、抑郁情绪。

杜仲腰痛丸对腰椎间盘突出症慢性下肢痛大鼠海马BDNF-TrkB-CREB信号通路的影响

目的:探讨杜仲腰痛丸对腰椎间盘突出症(L D H)慢性下肢痛大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)-络氨酸激酶受体B(TrkB)-环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法:72只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、模型治疗组,每组24只。模型组、模型治疗组采用自体髓核移植法进行造模,正常组与模型组给予相同剂量0.9%氯化钠溶液灌胃;模型治疗组给予杜仲腰痛丸药液灌胃,灌胃剂量为0.26 g/kg,2次/d。用疼痛行为学(机械痛阈值和热痛阈值)评价造模是否成功,造模成功后,各组大鼠在给药前1天、给药后14、28d取大鼠海马切片,利用免疫荧光技术观察BDNF、TrkB和CREB蛋白在海马神经元细胞内的分布情况、实时荧光定量PCR技术观察海马神经元中BDNF、TrkB、CREB mRNA表达水平、蛋白免疫印迹考察BDNF、TrkB和CREB蛋白在各组大鼠海马神经元中的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠海马神经元中BDNF蛋白及其特异性受体TrkB和CREB蛋白表达及mRNA水平在给药前1天(造模后14 d)显著受到抑制(P<0.05,P<0.01);杜仲腰痛丸干预之后,与模型组比较,模型治疗组海马中BDNF、TrkB、CREB蛋白及mRNA表达和分布在给药后14、28 d显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论:杜仲腰痛丸通过上调大鼠海马神经元BDNF、TrkB和CREB蛋白及mRNA的表达水平,治疗LDH慢性下肢痛,因此,其治疗LDH的效应机制可能与激活海马神经元BDNF-TrkB-CREB信号通路相关。

穴位电刺激对卒中后抑郁大鼠行为学及神经递质水平影响

目的:观察穴位电刺激对卒中后抑郁模型大鼠抑郁样行为及神经递质水平的影响,探讨其治疗卒中后抑郁的可能机制。方法:将36只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组与治疗组,每组12只。模型组、治疗组采用改良Zea Longa线栓法联合慢性不可预知温和刺激法建立卒中后抑郁模型,假手术组仅作颈动脉分离,不进行造模。治疗组于造模结束后1 d对百会、内关、大椎与太冲进行电刺激治疗,每次干预15 min,1次/d,连续干预21 d。于造模结束后及干预21 d后对各组大鼠进行Zea Longa神经行为学评分、糖水消耗实验与敞箱实验;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清5-羟色胺(5-HT)、脑源性神经营养因子(BDNF)含量;实时荧光定量PCR法检测大鼠海马组织BDNF、酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)和环磷腺普效应元件结合蛋白(CREB)mRNA表达情况。结果:与假手术组比较,造模后模型组及治疗组大鼠Zea Longa神经行为学评分升高,差异具有统计学意义(P<0.05),糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分降低,差异具有统计学意义(P<0.05),提示模型构建成功。经穴位电刺激干预后,模型组、治疗组与假手术组Zea Longa神经行为学评分依次降低,糖水消耗百分比、敞箱实验水平与垂直运动评分依次增高,血清5-HT、BDNF含量依次增高,海马组织BDNF、TrkB与CREB mRNA表达水平依次增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:穴位电刺激可改善卒中后大鼠抑郁样行为、提高神经递质水平,其作用机制可能与上调CREB/BDNF/TrkB信号通路表达有关。

大补元煎通过上调BDNF/TrkB/CREB信号通路改善APP/PS1双转基因痴呆小鼠海马突触可塑性

目的:观察大补元煎对APP/PS1痴呆小鼠海马突触可塑性及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的作用,并探讨其改善突触可塑性的可能机制。方法:将APP/PS1小鼠36只分为模型组、多奈哌齐组(6.5×10-4g·kg-1·d-1)和大补元煎组(13.2 g·kg-1·d-1),野生鼠12只设为正常组,正常组和模型组给予等体积生理盐水,各组连续灌胃30 d。应用Morris水迷宫检测各组小鼠的学习记忆能力,应用尼氏染色和高尔基染色观察海马区神经元和突触的病理形态变化,应用免疫荧光(IF)观察海马突触后致密蛋白95(PSD95)及突触素(SYN)的蛋白表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马中BDNF,TrkB,CREB及磷酸化CREB(p-CREB)的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠平台潜伏期和游泳总路程增加(P<0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间减少(P<0.01),小鼠海马CA3区神经元胞内尼氏体减少或消失,小鼠海马CA3区神经元及树突分支数量、树突棘密度减少(P<0.01),小鼠海马SYN,PSD95,BDNF,TrkB及p-CREB的蛋白表达水平减少(P<0.01)。与模型组比较,多奈哌齐组和大补元煎组小鼠平台潜伏期和游泳总路程减少(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间增加(P<0.05,P<0.01),小鼠海马CA3区神经元胞内尼氏体数量增多,小鼠海马CA3区神经元及树突分支数量,树突棘密度增加(P<0.05,P<0.01),小鼠海马SYN,PSD95,BDNF,TrkB及p-CREB的蛋白表达水平增加(P<0.05,P<0.01)。结论:大补元煎改善APP/PS1双转基因小鼠突触可塑性的机制可能与其上调小鼠海马中BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。

耳穴电刺激配合声音掩蔽对耳鸣大鼠听觉皮层的CREB蛋白、BDNF及其受体TrkB表达的影响

目的:探讨耳穴电刺激配合声音掩蔽对耳鸣大鼠听觉皮层的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)表达的影响。方法:将27只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组。模型组及治疗组大鼠采取腹腔注射水杨酸钠诱导制作耳鸣模型;对照组注射0.9%NaCl溶液。造模成功后,治疗组采用耳穴"神门""胰胆"电刺激配合声音掩蔽法治疗,每天1次,治疗15d。采用声音惊吓反应监测系统监测各组大鼠的停顿声音预刺激抑制惊吓反应(GPIAS)及预刺激抑制反应(PPI),以WesternBlot法检测各组大鼠听觉皮层的BDNF及其受体TrkB,CREB和磷酸化CREB(p-CREB)蛋白表达。结果:①与对照组比较,模型组大鼠在12、16、20、28 kHz高频背景声音的GPIAS比值均下降(均P<0.05);与模型组比较,治疗组在12、16、20、28 kHz高频背景声音的GPIAS比值均升高(均P<0.05)。②与对照组比较,模型组BDNF蛋白表达、p-CREB蛋白表达均升高(均P<0.01),TrkB表达升高(P<0.05);治疗组与模型组BDNF和TrkB表达、CREB及p-CREB蛋白表达比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:耳穴电刺激配合声音掩蔽法能改善耳鸣大鼠高频背景声音的GPIAS比值变化,此作用可能与抑制耳鸣大鼠听觉皮层的BDNF/TrkB/CREB信号通路相关蛋白表达下调,进而逆转不良可塑性改变有关。

跑台运动对血管痴呆大鼠学习记忆的影响及其作用机制

目的 观察4周低强度跑台运动对血管痴呆(VD)大鼠空间学习记忆能力,前额叶皮质(PFC)氨基酸水平及蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路蛋白表达的影响。方法 39只SD大鼠随机分为假手术组(sham,n=13)、血管痴呆组(VD,n=13)及血管痴呆运动组(VD+EX,n=13)。VD组及VD+EX组大鼠采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备慢性脑缺血大鼠模型,然后VD+EX组大鼠进行4周低强度跑台运动。运动结束后,利用水迷宫实验(MWM)评估大鼠学习记忆能力,高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠PFC区神经递质谷氨酸(Glu)及γ-氨基丁酸(GABA)水平,利用Western blotting检测大鼠PFC组织PKA、CREB及BDNF蛋白表达。结果 MWM实验结果显示,VD组大鼠第1~5天平均逃避潜伏期较假手术组显著增加,初次找到原平台时间延长,穿越平台次数显著下降(P<0.01)。经过4周低强度跑台运动,VD+EX组大鼠第1~5天平均逃避潜伏期较VD组显著下降,初次找到原平台时间缩短,穿越平台次数显著增加(P<0.01,P<0.05)。HPLC及Western blotting检测显示,与sham组比较,VD组大鼠PFC区Glu、GABA水平及PFC组织PKA、CREB及BDNF蛋白表达均显著下降(P<0.01);与VD组大鼠比较,VD+EX组大鼠PFC区Glu水平及PFC组织PKA、CREB及BDNF蛋白表达均显著增加(P<0.01,P<0.05),GABA水平两组之间差异无显著性(P>0.05)。结论 4周低强度跑台运动可通过增加VD大鼠Glu的释放,并激活PKA/CREB/BDNF通路提升PFC区BDNF表达,从而改善VD大鼠的学习记忆能力。

水合橙皮内酯通过BDNF/TrkB/CREB信号通路对阿尔兹海默症的保护作用

目的探究水合橙皮内酯对阿尔兹海默症大鼠的保护作用及可能机制。方法SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、阿尔兹海默症组(AD组)和水合橙皮内酯组(MH组),每组10只。水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;HE染色观察大鼠海马组织病理学变化;尼氏染色观察大鼠海马组织神经元存活;ELISA方法检测大鼠海马组织神经递质及相关因子水平;TUNEL实验检测大鼠海马组织细胞凋亡;Western blot检测大鼠海马组织BDNF、TrkB和p-CREB蛋白表达水平。结果水合橙皮内酯降低阿尔兹海默症大鼠逃避潜伏期,增加大鼠穿越平台次数和海马组织神经元细胞数,降低大鼠海马组织TUNEL阳性细胞数,增加大鼠海马组织BDNF、TrkB和p-CREB蛋白表达水平。结论水合橙皮内酯通过激活BDNF/TrkB/CREB信号通路改善AD大鼠学习记忆能力。