银星养脑片联合阿替普酶治疗急性缺血性脑卒中的临床观察

目的观察银星养脑片治疗急性缺血性脑卒中的临床疗效,并探讨其作用机制。方法80例患者采用随机数字表法随机分为研究组与对照组各40例。两组均予阿替普酶静脉溶栓治疗,研究组在对照组治疗基础上加用银星养脑片治疗。比较两组入院时、治疗后1周及2周血清丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)、神经功能缺损评分(NIHSS)及日常生活能力(ADL)的水平,记录两组不良反应及临床疗效。结果两组治疗后2周、治疗后1周与入院时比较,血清MDA水平下降、SOD水平则上升(均P<0.01),且研究组治疗后1周、治疗后2周血清MDA水平低于同期对照组,而SOD水平则高于同期对照组(均P<0.01)。两组治疗后NIHSS评分呈下降趋势、ADL评分呈上升趋势,组内比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);研究组治疗后1周、治疗后2周NIHSS评分低于同期对照组、ADL评分高于同期对照组(均P<0.01)。研究组总有效率为95.00%,高于对照组的80.00%(P<0.05)。对照组溶栓后脑出血2例(5.00%),研究组1例(2.50%),脑出血仅微量,未特殊干预,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿替普酶静脉溶栓后联合银星养脑片治疗急性缺血性脑卒中安全有效,可改善患者缺损神经功能、恢复日常生活能力,其机制可能与抗氧化应激、抗炎等相关。

银星养脑片联合醒脑开窍针法治疗首发缺血性脑卒中后抑郁患者的临床效果及对生活质量的影响

目的 观察银星养脑片联合醒脑开窍针法治疗首发缺血性脑卒中后抑郁患者的临床效果及对生活质量的影响。方法 选取2019年2月—2020年2月浏阳市中医医院收治的首发缺血性脑卒中后抑郁患者80例,以随机数字表法分为观察组和对照组,各40例。对照组予盐酸阿米替林片治疗,观察组予银星养脑片联合醒脑开窍针法治疗,2组均治疗2个月。比较2组临床疗效,治疗前后汉密顿抑郁量表(HAMD)评分、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、生活质量量表(QOL)评分、血清因子[5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)及脑源性神经营养因子(BDNF)]水平。结果 观察组治疗总有效率为92.50%,高于对照组的75.00%(χ^(2)=4.501,P=0.034)。治疗2个月后,2组HAMD、NIHSS评分较治疗前降低,QOL评分较治疗前升高,且观察组变化幅度大于对照组(P均<0.01);2组5-HT、DA、BDNF水平较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论 银星养脑片联合醒脑开窍针法治疗首发缺血性脑卒中疗效显著,可减轻患者抑郁症状,改善脑神经缺损,提高生活质量,同时增加5-HT、BDNF、DA等可调节机体精神状态的细胞因子释放。

芪七醒脑片制备工艺的优化

目的 优化芪七醒脑片制备工艺。方法 以冰片∶黄芪总苷∶三七总皂苷(7.5∶10∶25)为药粉原料,在单因素实验基础上,以颗粒收率、粒度分布、颗粒休止角、硬度、崩解时限的综合评分为评价指标,采用熵权法结合正交试验优化制备工艺。结果 设计片重0.4 g/片,药粉提取物与糊精∶乳糖(3∶1)混合,采用内加法加入崩解剂CMS-Na(用量5%),黏合剂含0.5%PVP的80%乙醇(用量23%)制备软材,挤压过16目筛,将湿颗粒置于80℃烘箱中,干燥60 min,整粒,加入硬脂酸镁(用量0.3%)混合均匀,压片。颗粒吸湿性高于片剂,临界相对湿度约70%。结论 该方法稳定可靠,所制的片剂外观完整光洁,硬度、崩解时限等指标良好,为规模化生产提供理论基础。

氯化胆碱和蔗糖切片液制作的小鼠脑片下丘脑视前区神经元电生理特性的比较

目的比较不同切片液对小鼠下丘脑视前区(mPOA)脑片神经元电生理特性的影响。方法选取6~8周龄C57雌性小鼠,异氟烷麻醉后心脏灌注(通混合气950 mL/L O_(2),50 mL/L CO_(2))4℃氯化胆碱切片液或蔗糖切片液后取脑,振动切片机制备含mPOA脑区的冠状脑片,全细胞膜片钳记录mPOA电生理特性。结果采用蔗糖切片液制作的脑片mPOA神经元的内在兴奋性要优于氯化胆碱切片液,具体表现为细胞静息膜电位更超极化,动作电位幅度、不同电流刺激平均放电幅度、放电个数均高,半宽、基强度较小。而氯化胆碱切片液制作的脑片突触活性要更好,表现为兴奋性微小突触后电流频率高于蔗糖切片液制作脑片的细胞。结论蔗糖切片液和氯化胆碱切片液在保证细胞活性的情况下,蔗糖切片液更适合记录mPOA神经元的内在兴奋性,而氯化胆碱切片液更适合突触特性的记录。

药物对小鼠脑片缺氧缺糖／再灌损伤的作用

目的：在离体脑片缺血性损伤模型上，建立药物快速筛选与作用评价方法。方法：小鼠离体脑片缺氧缺糖／再灌诱导(OGD／RP)的模型上，以2，3，5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物formazan定量测定评价脑片活性，观察不同药物离体给药或整体预给药7d对脑片损伤的保护作用。结果：抗氧化剂依达拉奉。

马桑内酯在大鼠海马脑片上引起的癫痫样放电活动

马桑内酯(Coriaria lactone CL)是从抗精神病中草药—马桑寄生中提取的有效成分,它具有致痫作用。目前,运用C1在整体动物身上建立急、慢性癫痫模型的实验已获成。为了进一步从细胞水平探讨C1的致痫作用及可能的电生理学机制,本实验采用离体海马脑片技术,在40例海马脑片标本上进行了以下研究:

钩藤对致痫大鼠海马脑片诱发场电位的影响

目的 :研究钩藤对癫痫模型海马脑片诱发场电位的影响。方法 :以毛果芸香碱致痫大鼠为实验对象 ,采用脑片旁滴注给药 ,用细胞外玻璃微电极记录方法 ,观察钩藤对癫痫模型离体海马脑片CA1区锥体细胞诱发群锋电位(populationspike,PS)的影响。结果 :给予钩藤后使致痫大鼠海马脑片PS幅度平均降低 2 7.64% ,平均 8.71min恢复(n =14,P <0 .0 1)。结论 :钩藤能降低致痫大鼠海马脑片CA1区顺向诱发PS幅度 ,提示钩藤对中枢神经系统的突触传递过程有明显的抑制效应 。

大鼠脑片损伤模型和新型定量评价方法的建立

目的 建立不同性质脑损伤实验模型和一种方便、快速、灵敏的定量评价方法。方法 制备大鼠皮层和海马脑片 ,检测活性后 ,分别接受缺氧缺糖 (OGD)、谷氨酸、过氧化氢 (H2 O2 )损伤 ,氯胺酮、D AP5、异丙酚预处理 ,随后与TTC溶液共同孵育 ,有机溶剂抽提 ,酶标仪测定OD4 90 值 ,同时测定孵育上清液乳酸脱氢酶 (LDH)释放率。结果 室温下恢复孵育 90min后 ,海马脑片CA1区锥体细胞层可记录到群体峰电位。随着OGD时间延长 ,皮层和海马脑片TTC染色明显降低 ,孵育上清液LDH释放率逐渐增加 ,组织损伤百分率与LDH释放率明显正相关 :皮层r =0 960 9,P <0 0 1 ;海马r =0 892 1 ,P <0 0 5。和对照组相比 ,谷氨酸 1mmol·L- 1 和H2 O2 2mmol·L- 1 明显降低脑片TTC染色。氯胺酮5μmol·L- 1 、D AP550 μmol·L- 1 、异丙酚 5μmol·L- 1 分别抑制OGD 1 0min、谷氨酸、H2 O2 损伤所致脑片TTC染色降低。结论 利用大鼠脑片建立的缺氧缺糖、谷氨酸和过氧化氢损伤实验模型 ,以及新鲜脑片与TTC溶液共同孵育 ,有机溶剂抽提、比色的定量评价方法具有方便、快速、灵敏的特点 。

巴曲酶对海马脑片缺氧损伤的保护作用

本实验采用离体大鼠海马脑片缺氧模型，观察巴曲酶对缺氧后海马脑片ＣＡ１区诱发突触电位的影响。结果可见：用三种浓度巴曲酶孵育的海马脑片缺氧后ＰＶ消失时间均明显延迟，但对ＰＳ的消失时间无明显影响。提示：巴曲酶对海马神经元缺氧损伤具有一定保护作用。

大鼠海马脑片缺氧诱导Ca^(2+)/CaM PKII活性抑制机理的研究

采用大鼠海马脑片体外缺氧模型，观察了Ca2+和氯胺酮对海马脑片Ca2+／CaMPKⅡ活性的影响，同时观察了缺氧对神经元胞外谷氨酸堆积的影响。结果如下：（1）有钙或无钙培养时，酶活性随缺氧时间的延长均下降，但前者比后者酶活性下降更显著，提示外ca2+在神经元缺氧损伤中起重要作用。（2）海马脑片在体外缺氧30min，谷氨酸在胞外的堆积增加2倍多。（3）单纯过量外源性谷氨酸能引起酶活性显著下降，提示脑缺氧时酶活性的抑制与兴奋毒性有关。（4）氯胺酮对缺氧和单纯外源性谷氨酸所诱导的酶活性抑制均有明显的拮抗作用，说明脑缺氧引起酶活性下降与NMDA受体介导有关。我们的结论是：脑缺氧时该酶活性的抑制是与下列途径有关：谷氨酸→NMDA受体→Ca2+→Ca2+靶酶。

GABA对大鼠海马脑片缺氧损伤的保护作用

目的 :研究GABA对大鼠海马脑片急性缺氧损伤的保护机制。方法 :采用成年大鼠离体海马脑片 ,用胞外记录的电生理技术 ,观察GABA对急性缺氧后海马脑片诱发电位的影响。结果 :①GABA可明显延迟PV的消失 ,但对PS却无影响 ;②给予GABAA 受体拮抗剂荷包牡丹碱 (bicuculine)以及Cl 通道阻抗剂NPPB可阻断GABA的保护作用。结论 :GABA可提高海马脑片耐缺氧妮力 ,其机制可能与GABA通过GABAA 受体提高Cl

芍药苷对MPP^+所致大鼠黑质脑片多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的研究芍药苷(paeoniflorin,PF)对MPP+所致大鼠黑质脑片多巴胺能神经元损伤的保护作用,并观察PF对α-synuclein(α-syn)mRNA表达水平的影响。方法离体培养SD大鼠黑质器官型脑片,培养的d10给予不同浓度的MPP+(0.1、0.5、1.0mmol·L-1)处理24h,并在0.5mmol.L-1MPP+处理的基础上,给予1μmol·L-1或10μmol·L-1的PF进行干预。免疫组化法计数黑质致密部酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞数,定量RT-PCR法检测α-syn mRNA的表达丰度。结果MPP+(0.1、0.5、1.0mmol.L-1)处理导致黑质致密部TH+细胞数较正常对照组减少,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);MPP+(0.5mmol.L-1)使α-syn mRNA的表达水平明显升高(P<0.01)。PF(10μmol·L-1)有效增加了TH+细胞的数量(P<0.01),并明显下调了α-syn mRNA的表达(P<0.05)。结论PF能有效拮抗MPP+导致的多巴胺能神经元受损死亡,其机制可能与下调α-syn的表达有关。

丹龙醒脑片对沙土鼠脑缺血再灌注保护作用的实验研究

目的:研究丹龙醒脑片(DLXNP)对脑缺血再灌注沙土鼠模型脑组织兴奋性氨基酸(EAAs)含量的影响及对海马区神经元的保护作用。方法:用双侧颈总动脉反复夹闭再灌注方法建立脑缺血再灌注沙土鼠模型。用高效液相色谱分析荧光法(HPLC)检测脑组织谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)浓度,用病理光学显微镜观测其双侧海马CA_1区神经元数目。结果:模型组与正常对照组和假手术组相比,Glu、Asp含量明显升高(P<0.01),海马区神经细胞数明显减少(P<0.01)。丹龙醒脑片3个剂量组脑组织中Glu、Asp的含量明显低于模型组(P<0.01～0.05),海马区神经细胞数明显多于模型组(P<0.01)。结论:丹龙醒脑片能调节缺血再灌注大鼠脑组织兴奋性氨基酸含量、减轻其兴奋性毒性,保护大脑海马区神经元,这可能是丹龙醒脑片的作用机制之一。

海马脑片盲法膜片钳全细胞记录技术

本文较为详细地介绍了海马脑片盲法膜片钳全细胞记录技术 ,对其关键步骤和需要注意的问题进行了重点说明 ,同时对CA1区锥体神经元突触活动的特点、电压门控性Ca2 +通道以及谷氨酸 (glutamate ,Glu)、γ 氨基丁酸 (GABA)受体通道电流性质等进行了观察和分析。实验结果为采用海马脑片盲法膜片钳全细胞记录技术研究海马神经元离子通道动力学性质和中枢神经系统药物对突触活动的影响提供了可靠的依据。

双孔脑片电生理实验系统及其在脑缺氧研究中的应用

脑片标本兼有在体和离体细胞培养的某些特点。与离体细胞培养相比,其神经环路较完整,可研究原有神经环路不同神经元之间的相互作用,已经证明离体脑片能重复出整体动物大多数电生理现象。与整体动物相比,离体脑片排除了血脑屏障,可在解剖显微镜直视下将电极插到特定部位,不需立体定位;改变灌流人工脑脊液或气体成分即可控制标本环境、调节或改变神经元兴奋性;有较高的机械稳定性,有利于长时间观察。由于上述优点,近年来国内外越来越多的实验室建立起脑片实验方法,用于生理、病理和药物学研究。

刺五加皂甙对大鼠海马脑片长时程增强效应的影响

目的探讨刺五加皂甙对大鼠海马脑片长时程增强效应(LTP)的影响。方法采用高频电刺激离体海马脑片诱导LTP,通过顺向群峰电位波幅相对增长率、峰潜伏期相对缩短率二项指标,观察刺五加皂甙对LTP的影响。结果1.25～5mg/100ml的刺五加皂甙对大鼠海马脑片LTP均有明显易化作用,研究组顺向群峰电位的波幅相对增长率和峰潜伏期的相对缩短率均比未加用刺五加皂甙对照组明显增高。结论刺五加皂甙对大鼠海马脑片LTP有明显促进作用,表明其可提高大脑学习、记忆能力。

不同浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的探讨高浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型,设立对照组(Control)、缺氧缺糖损伤组(OGD)、芬太尼50μg.L-1组(F50)、芬太尼500μg.L-1组(F500)。利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH)、免疫组化、电镜评价高浓度芬太尼对脑损伤的保护作用。同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化。结果不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)抑制脑片OGD损伤所致的TTC染色降低;减少LDH释放;减轻神经元凋亡,改善神经元超微结构的病理损伤。OGD损伤增加bax和bc l-2蛋白表达,增加胞内钙离子浓度。不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)进一步上调bc l-2蛋白表达,降低bax蛋白表达,同时抑制胞内钙离子浓度。与芬太尼500μg.L-1相比,芬太尼50μg.L-1作用较强。结论高浓度芬太尼具有脑保护作用,能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程,且芬太尼对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一。随着芬太尼的剂量增加,其保护作用减弱,但在临床应用的剂量范围内未见明显的毒性作用。

膜片钳技术在成年大鼠海马脑片应用的初步研究

目的:制备成年大鼠海马脑片,使其适应于膜片钳全细胞记录,并观察海马锥体神经元的电生理特性。方法:选200 g左右的成年SD大鼠,雌雄不拘,10%水合氯醛腹腔注射麻醉,四肢固定,剪开胸腔,夹闭下腔静脉,以0℃切片液进行心脏灌注,断头,取下全脑,置入0℃切片液中冰镇3 min,再修块,切片,厚度约350μm,移入37℃预热的人工脑脊液中孵育1 h后,转入23℃水浴中孵育30 min备用。倒置相差显微镜和红外微分干涉相差显微镜观察脑片的神经元形态;全细胞膜片钳记录脑片神经元的电生理学特性。结果:海马CA1区神经元光泽度好,立体感强且突起明显;在进行膜片钳全细胞记录时,封接顺利,并且可以记录到电流和动作电位的变化图形。结论:本方法制备的成年大鼠脑片,可以耐受离体后缺血缺氧造成的损伤,保持电生理活性而适应膜片钳全细胞记录模式。