基于核糖核酸测序探讨马尔尼菲篮状菌感染致小鼠脑皮层损伤的机制

目的应用核糖核酸测序(RNA-seq)技术探讨马尔尼菲篮状菌(TM)致小鼠脑皮层损伤的可能机制。方法(1)将10只C57/BL6小鼠随机分为TM感染组和健康对照组(5只/组)后,分别经尾静脉注射TM分生孢子悬液、生理盐水。将BV2细胞和N2a细胞均随机分为TM感染组和空白对照组,TM感染组加入TM分生孢子悬液,空白对照组加入等量培养液。(2)建模成功后,取小鼠脑皮层组织进行RNA-seq后分析差异表达基因(DEGs);采用R 4.1.2软件对DEGs进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析和基因本体论(GO)功能富集分析等。取两组小鼠脑皮层组织及两组BV2细胞、N2a细胞,采用实时荧光定量PCR对富集通路相关DEGs、促炎因子进行体内体外验证。结果(1)共获得871个DEGs,其中上调基因373个、下调基因498个。KEGG通路富集分析结果显示,显著性最大的通路为氧化磷酸化通路(Q=9.60×10^(-3)),基因数目比例最大的通路为神经退行性病变-多种疾病通路;GO功能富集分析结果显示,DEGs主要涉及细胞因子产生的正向调节、突触组织等生物学过程和组织。(2)体内体外验证结果表明,与对应对照组相比,TM感染组小鼠脑皮层组织和N2a细胞中Atp4a、Abcg3的mRNA表达水平均上调,Med8 mRNA表达水平下调,N2a细胞中Ifi47、AA388235的mRNA表达水平上调(均P<0.05),TM感染组小鼠脑皮层组织及BV2细胞中白细胞介素6、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的mRNA表达水平均上调(均P<0.05),均与RNA-seq结果一致。结论TM感染可能通过直接改变神经元细胞糖代谢,或间接激活小胶质细胞炎症反应,从而导致脑皮层损伤。

射频热凝对兔脑皮层损伤的凋亡作用

目的 探讨射频热凝对兔脑皮层损伤过程中凋亡的作用。方法 兔脑分别以 5 1～ 80℃ 60s和70℃ 15～ 12 0s射频热凝 ,术后 2 4h或 14d处死动物 ,取出兔脑 ,固定、包埋、切片。对大体标本进行HE染色 ,采用透射电镜 (TEM )、原位末端标记法凋亡检测 (TUNEL染色 )观察病理变化。结果 2 4h组兔脑组织均表现出由中心向外周的坏死、凋亡、正常的梯度变化。 14d组可见坏死、胶质增生及正常组织的梯度变化。结论 射频热凝兔脑皮层过程中 ,凋亡参与细胞损害过程。在特定温度区间 ,主要表现在坏死与正常脑组织的交界区 ,区带宽度为 ( 1.2 96± 0 .481)mm ,2 4h病理变化显著 。

黄芪苷Ⅳ防治大鼠脑皮层缺血-再灌注损伤的作用和对APE／Ref-1表达的研究

目的：研究黄芪苷Ⅳ（Astragaloside Ⅳ，AST）对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及探索AST治疗脑缺血-再灌注损伤的可能药物作用靶点。 方法：实验大鼠被随机分为4个实验组：缺血-再灌注模型组（M组），低剂量治疗组（AST1），高剂量治疗组（AST2），假手术组（Sham）。AST1和AST2组大鼠在缺血前30min腹腔注射AST 1mg／kg、4mg／kg。所有接受手术的鼠均采用线栓法制备局灶性大脑中动脉阻塞模型（Middle cerebral artery occlusion，MCAO）。再灌注后6h处死大鼠前进行神经行为评分，应用TYC染色法检测脑梗塞范围，HE染色观察病理变化；

粉防己碱对体外培养大鼠脑皮层神经元损伤的保护作用

兴奋性氨基酸类神经毒剂与粉防己碱（tetrandrine,Tet)共同作用于原代培养胎鼠大脑皮层神经元24小时，发现10^-7,10^-6mol·L^-1, Tet明显降低50μmol·L^-1谷氨酸（glutamate,GLu),300μmol·L^-1β－N－methylamino-L-alanine(BMAA,NMDA受体激动剂)昨20μmol·L^-1β－N－oxalylamino-L-alanine(BOAA,non-NMDA受体激动剂）导致的培养液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH)活性的增高，细胞形态损害减轻，细胞数量增加，对20μmol·L^-1NMDA介导的神经元损伤改变无影响，提示Tet对某些Glu类神经毒剂引起的胎鼠大脑皮层神经元损伤有一定保护作用，其机制可能是抑制细胞膜上的Na^+通道开放，阻止膜去极化而影响电压依赖性Ca^2+通道启动，对NMDA受体可能亦有一定作用。

新生鼠大脑皮层局灶性缺血区的神经前体细胞移植

目的观察神经前体细胞植入新生鼠局灶性缺血区内的存活和融合情况。方法应用含表皮生长因子+碱性成纤维生长因子诱导因子的无血清D/F12(1:1)培养获得新生鼠神经前体细胞球并在培养中掺人5-溴-2＇-脱氧尿嘧啶标记,免疫酶技术检测nestin标志和分化诱导实验证明所获得的细胞球是神经前体细胞,去脑膜结扎小动脉手术制作新生鼠脑皮层局灶性缺血动物模型,将标记好的神经前体细胞直接注射到缺血损伤灶的边缘区,定期免疫组化染色观察植入细胞的分布、存活和与宿主脑组织的融合情况。结果缺血损伤侧的脑皮层内带标记的细胞量明显要多于实验对照的对侧,植入的神经前体细胞主要向损伤灶的颗粒层聚集,未见远部位迁移,与宿主脑皮层组织有很好的融合。结论大脑皮层缺血性损伤可刺激神经前体细胞发育,提示新生动物缺血性脑损伤疾病有希望通过神经前体细胞移植获得治疗。

山莨菪碱对实验性脑损害所致认知障碍的改善作用

用自行建立的大鼠内侧额叶皮层损伤和急性脑缺血再灌流损伤两种手术方法，能造成动物学习和记忆的缺陷并可作为“痴呆”模型。从手术当天起，用山莨菪碱（６５４～２）（３０ｍｇ．ｋｇ^（－１）／ｄ，ｉｐ）慢性给药共１０次。首次发现６５４－２对两种脑损害所致的动物对回避反应学习和记忆能力的下降都有改善作用。实验结果还表明，６５４－２能增强皮层损伤后前脑超氧化物岐化酶（ＳＯＤ）的活力，并抑制脂质过氧化物（ＭＤＡ）含量的升高。提示６５４－２可能有抗自由基损伤和保护脑细胞的作用。

食蟹猴骨髓源性神经干细胞自体脑内移植的研究

目的探讨食蟹猴自体骨髓基质细胞诱导分化成神经干细胞后移植到脑内的生长情况.方法对6只食蟹猴进行骨髓基质干细胞体外培养、诱导分化成神经干细胞,经BrdU标记后进行自体脑移植.动物分为即时移植组和延迟移植组,采用立体定向多点注射的方法将神经干细胞悬液移植到猴皮层创伤灶.结果HE染色显示即时移植和延迟移植的创伤区细胞数量都明显多于假移植治疗对照;免疫组织化学染色显示两组动物在干细胞移植后1～6个月脑皮层创伤灶内均有BrdU阳性表达细胞,移植后半年的动物在移植区邻近的脑白质内也可观察到有BrdU阳性表达的细胞,而创伤对照动物、假移植治疗动物和正常脑组织中则未见BrdU阳性表达. 结论BMSCs体外培养得到的神经干细胞经过自体移植能在脑皮层内存活,并且能增殖、分化和迁移,可成为神经干细胞的替代细胞或来源细胞;干细胞移植到陈旧性的脑皮层损伤灶也具有成活、增殖和迁移能力.