酒川芎联合吉非替尼或厄洛替尼治疗EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的作用机制

目的:探讨酒川芎(wine-processed Chuanxiong Rhizoma,WCR)联合吉非替尼或厄洛替尼治疗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变型非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)脑移植瘤的作用机制。方法:建立ABCB1-MDCK细胞和PC9细胞共培养体系,采用流式细胞术检测WCR(2 g·L^(-1))联合吉非替尼或厄洛替尼(10μmol·L^(-1)、20μmol·L^(-1))作用于PC9细胞的凋亡情况。通过ABCB1-MDCK细胞单层转运模型评估WCR(0.5 g·L^(-1)、1 g·L^(-1)、2 g·L^(-1))联合吉非替尼或厄洛替尼(8μmol·L^(-1))的跨膜转运情况,并计算表观渗透系数(Papp)。体外培养ABCB1-MDCK细胞,采用透射电镜法、免疫荧光法(immunofluorescence,IF)和蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)检测超微结构和紧密连接蛋白-1(zonula occludens^(-1),ZO-1)、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达水平。建立裸鼠NSCLC脑移植瘤模型,检测WCR联合吉非替尼或厄洛替尼对裸鼠脑内肿瘤生长、生存时间和药物含量的影响。结果:与单用吉非替尼或厄洛替尼比较,WCR联合吉非替尼或厄洛替尼可增加PC9细胞的凋亡率(P<0.05)。WCR联合吉非替尼或厄洛替尼的Papp(AP→BL)较吉非替尼或厄洛替尼增加(P<0.05),且与WCR浓度呈正相关。透射电镜结果显示,WCR可破坏ABCB1-MDCK细胞的紧密连接结构。IF和WB结果显示,WCR可降低ABCB1-MDCK细胞的ZO-1、P-gp表达水平(P<0.01)。WCR联合吉非替尼或厄洛替尼可抑制脑内肿瘤生长、延长裸鼠生存时间并增加吉非替尼或厄洛替尼含量。结论:WCR联合吉非替尼或厄洛替尼可能通过促进细胞凋亡、改善药物转运以及下调ZO-1、P-gp表达水平,从而发挥治疗EGFR突变型NSCLC脑移植瘤的作用。

CX43对S24细胞裸鼠脑移植瘤放射敏感性影响

目的:研究缝隙连接蛋白43(CX43)对胶质母细胞瘤(S24-GBM)细胞间网络连接的影响及其在GBM放射抵抗中的作用。方法:采用基因敲除S24-GBM干细胞(S24-GBMSCs)表面CX43的表达或生胃酮(CBX)特异性阻断CX43的功能后,用多光子激光扫描显微镜观察S24-GBMSCs移植裸鼠大脑中肿瘤细胞表面微管(TMs)的形成和小分子物质(Ca^2++和SR101)在细胞间的传递。采用MRI检测放射对GBM体积变化的影响,记录和分析裸鼠生存时间。结果:与对照组相比,敲除CX43基因后S24-GBMSCs的TMs明显缩短,TMs参与形成的网络连接减少;细胞间Ca^2+同步性和SR101扩散能力下降,肿瘤体积缩小,荷瘤裸鼠生存时间显著延长(P均<0.01);CBX可以抑制Ca^2+和SR101的扩散,延缓GBM的生长,但不影响TMs的形成(P>0.05)。采用CBX阻断TMs形成缺陷的S24-GBMSCs表面CX43的功能可以进一步增强上述效应,提高S24-GBM对放射的敏感性(P均<0.05)。结论:CX43参与S24-GBM细胞间网络连接的形成,影响细胞间信号分子的传递,在S24-GBM放射抵抗中起着重要作用。

VEGF在小鼠活体移植脑肿瘤生长过程中的表达研究

目的通过连续测定血管内皮生长因子(VEGF)在小鼠Lewis肺癌活体移植脑肿瘤生长过程中的表达变化,分析其变化的规律和特点,探讨这些规律和特性与肿瘤生长的相互作用。方法采用小鼠Lewis肺癌皮下移植肿瘤组织悬液,经直接穿破颅骨注入法建立小鼠脑移植瘤模型。荷瘤鼠分别选取实施肿瘤移植手术后第6,7,8,9,10,1l,12,13日时处死,取脑。对各日龄组标本进行以下测定:(1)HE染色和免疫组织化学染色检测VEGF的表达:(2)逆转录一聚合酶链方法(RT—PCR)与定量PCR检测VEGF mRNA的表达;(3)测定VEGF的蛋白含量。结果10日龄前区间VEGF的表达符合肿瘤血管形成期的生长特点,10日龄后区间VEGF的表达符合肿瘤血管生长期的生长特点。10日龄可以作为肿瘤血管形成期和生长期的分界点。10日龄前区间内VEGF的表达呈缓慢上升趋势。自10日龄始,VEGF的表达显著上调,并伴随肿瘤的生长呈爆发性指数增长趋势。结论VEGF的表达强度和蛋白含量作为肿瘤新生血管多少的判定指标与肿瘤生长的时间存在密切关联性和规律性。其表达伴随肿瘤的生长逐渐增强,且存在一个显著上调的分界点。此分界点对肿瘤生长阶段的诊断判定具有重大的意义。

人脑转移癌组织裸小鼠脑内移植模型的建立

目的建立人肺腺癌脑转移瘤的裸小鼠原位移植模型，并分析移植瘤的生物学特征。方法取人肺腺癌脑转移瘤组织块，接种于裸小鼠右尾状核。致瘤后即用裸小鼠的瘤组织进行其原位传代接种，观察致瘤率及荷瘤鼠生存期；MRI观察移植瘤在鼠脑内的大体形态；HE染色分析各代移植瘤的组织学形态；免疫组化染色观察移植瘤中CEA的表达；Alcian blue／PAS特殊染色检测移植瘤中粘液的性质。结果移植瘤组织在裸小鼠右尾状核已连续传至6代，共65只鼠。荷瘤鼠生存期：原代为（47．6±1．8）d，2～3代有所缩短，4～6代稳定在（38．0±0．9）d；移植瘤MRI类圆形，瘤周无水肿。移植瘤病理为低分化腺癌，不向周围正常鼠脑组织浸润；移植瘤中CEA表达阳性，有酸性粘液存在。结论人肺腺癌脑转移瘤组织块接种于鼠脑内建立的原位移植模型能更好地模拟临床原发肿瘤的病理学特征，本方法为研究人肺腺癌脑转移瘤的生物学特性及实验治疗提供了一个可靠的动物模型。

犬脑内移植大鼠胰岛细胞的凋亡状况

目的 观察生物半透膜包裹异种胰岛样细胞团(ICCs) ,结合相对免疫特赦部位脑实质内移植的凋亡状况 .为异种胰岛细胞脑内移植可能的临床应用提供实验依据 .方法 SD大鼠ICCs分离、纯化与培养 ,生物半透膜包裹后犬脑实质内移植 .电镜观察移植后的细胞形态 ,胰岛素 TUNEL双标记染色鉴定胰岛β细胞凋亡 ,免疫组化染色观察凋亡相关基因bcl 2和bax的表达 .结果 胰岛素 TUNEL双标记染色证明了胰岛β细胞发生了凋亡 ,电镜下可见典型的凋亡细胞 ,有凋亡小体形成 .移植 1mo和 2mo,白细胞数分别为 2 4± 5和 93± 9(P <0 .0 1) ,白细胞数 /胰岛素阳性细胞数之比为 8± 3和2 0± 8(P <0 .0 1) ,随着移植时间的延长 ,白细胞增多 ,胰岛细胞减少 .Bcl 2和bax基因均有不同程度的表达 ,bax染色更浓 .结论 异种移植后的胰岛细胞死亡与凋亡有关 .半透膜包裹异种ICCs结合免疫特赦部位脑内移植的方法对克服免疫排斥反应有一定的作用 .

慢病毒介导的胶质瘤模型在教学中的应用

目的比较移植性肿瘤动物模型与慢病毒介导的胶质瘤模型在教学中的应用效果。方法选取50名临床8年制5年级学生,根据不同的实验操作,将学生随机分为移植性肿瘤动物模型组(n=25)以及慢病毒介导的胶质瘤模型组(n=25)。移植性肿瘤动物模型组以大鼠胶质瘤细胞系9L脑纹状体注射Wistar大鼠模型进行实验操作;而慢病毒介导的胶质瘤模型组则以慢病毒载体介导Ras的表达以及Akt的激活,注射胶质纤维酸性蛋白(GFAP)-Cre基因小鼠进行实验操作。教学结束后比较两组的教学反馈和教学成果。结果与移植性肿瘤动物模型组相比,慢病毒介导的胶质瘤模型组成员对该模型的教学反馈评价更高,该模型的重复性更好,使学生对肿瘤分子水平的认识更深入,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导的胶质瘤模型在教学中应用具有可行性,不仅提供了一个较新的模型,也使得学生能够从分子水平认识肿瘤,对于肿瘤的理解更为深入。