慢病毒介导的shRNA对大鼠脑纹状体GCDH蛋白的沉默效应研究

目的：利用已成功构建的慢病毒载体，检测慢病毒介导的GCDH基因沉默对大鼠脑纹状体GCDH蛋白表达下调的能力。方法：30只健康雄性刚断乳34周SD大鼠随机分为绿色荧光蛋白（GFP）对照病毒注射组（对照组）和GCDH慢病毒注射组（GCDH组）各15只。各组分别在脑立体定位仪下定位纹状体组织后单侧给予GFP对照病毒2耻L和GCDH慢病毒原液2灿。注射后14d及1、3月，分别处死大鼠，并取注射区域的脑纹状体组织蛋白质通过Westemblot及石蜡切片免疫组化法检测大鼠纹状体GCDH蛋白表达水平，同时测定肝。肾功能、血清有机酸及Rotarod行为学。结果：GCDH慢病毒注射14d及l、3月后，GCDH组可检测到注射区域GCDH蛋白在脑纹状体区域表达有明显降低，同对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），2组肝肾功能、血清有机酸及行为学未发现明显差异。结论：成功注射GCDH慢病毒到刚断乳34周SD大鼠脑纹状体，并在注射后不同时间均检测到GCDH蛋白的表达稳定下调。

大脑前额皮层Nrg1基因敲低对小鼠精神分裂症样行为形成的影响

目的:研究成年小鼠大脑前额皮层神经调节素1(neuregulin 1,Nrg1)基因敲低对精神分裂症样行为的影响及其潜在机制。方法:取成年雄性C57BL/6小鼠45只,基于旷场实验将小鼠分为3组:正常对照组,阴性对照组和Nrg1-siRNA组,每组15只。采用脑立体定位对阴性对照组和Nrg1-siRNA组小鼠前额皮层两侧部位分别注射2μL阴性对照siRNA和Nrg1-siRNA,正常对照组注射2μL PBS。采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测小鼠前额皮层Nrg1 mRNA和NRG1蛋白表达,通过前脉冲抑制实验、旷场实验和高架十字迷宫实验评价前额皮层Nrg1基因敲低对小鼠行为的影响,采用蛋白免疫印迹法检测小鼠前额皮层囊泡γ-氨基丁酸转运体(vesicular GABA transporter,VGAT)和囊泡谷氨酸转运体1(vesicular glutamate transporter 1,VGLUT1)蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,Nrg1-siRNA组小鼠前额皮层Nrg1 mRNA和NRGI蛋白表达水平显著降低(P均<0.01)。行为学结果显示,与正常对照组相比,Nrg1-siRNA组小鼠前脉冲抑制率显著降低(P<0.05),自发性运动的总距离和平均速度显著增加(P均<0.01),进入开放臂的次数百分比和时间百分比显著减少(P均<0.01);蛋白免疫印迹结果显示,与正常对照组相比,Nrg1-siRNA组小鼠前额皮层VGLUT1/VGAT蛋白表达比值显著增加(P<0.01)。结论:大脑前额皮层Nrg1基因敲低可导致小鼠出现以前脉冲抑制损伤、自发活动量增加以及焦虑为特征的精神分裂症样行为,其机制可能与抑制性和兴奋性神经递质转运蛋白平衡失调有关。

Bafilomycin A1对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用及其机制

目的:探讨洛霉素A(Bafilomycin A1, Baf A1)对脑缺血再灌注损伤(middle cerebral artery occlusion-reperfusion, MCAO/R)小鼠的保护作用及机制。方法:Atg7f/f-Mx1-Cre小鼠15只,随机分为:假手术组(C)、模型组(M)、氟西汀组(M + F)、Baf A1组(M + B)和ATG7敲除组(M + ATG7 KO)。M + B组术前24小时给与脑立体定位注射,M + F组给与氟西汀灌胃连续14 d;其他组均于术前14天开始给予等体积生理盐水。缺血2小时再灌注24 h后,对各组小鼠进行神经行为学评分、脑含水量测定和脑梗死面积检测,Western blotting检测自噬相关蛋白Beclin 1和LC3的表达。结果:与C组相比,M组神经行为评分、脑含水量、脑梗死面积、自噬相关蛋白Beclin 1和LC3的表达显著增加,M + F组、M + B组和M + ATG7 KO组逆转以上结果,差异具有统计学意义。结论:Baf A1通过降低前期和后期细胞自噬水平实现对脑缺血再灌注损伤小鼠的保护作用。

室旁核VGlut2神经元投射通路

囊泡型谷氨酸转运蛋白2(VGlut2)作为兴奋性神经递质表达于下丘脑室旁核(PVNVGlut2),调节摄食和能量代谢,对维持机体稳态具有重要作用。但尚不清楚PVNVGlut2神经元上、下游投射网络,阻碍了解析谷氨酸能神经元环路功能。因此,本研究采用脑立体定位注射技术,将顺行和逆行示踪病毒注射到VGlut2小鼠的PVN,寻找PVNVGlut2神经元的输入和输出核团。顺行示踪结果表明,PVNVGlut2神经元投射到下游内侧杏仁核(MeAD)和弓状核(ARC)。逆行示踪结果表明,PVNVGlut2接受前置核(Pr)、桥脑网状被盖核(RtTg)、舌下神经核(12N)输入。此外,在PVN发现VGlut2与神经元型一氧化氮合酶(nNOS)神经元共表达。通过病毒追踪工具解析PVNVGlut2神经元的解剖学网络,为后续研究剖析PVNVGlut2功能调控奠定基础。