针刺预处理脑组织提取液抗大鼠脑缺血再灌注损伤作用探讨

目的 :证实针刺预处理脑组织提取液的抗脑缺血再灌注损伤作用 ,为针刺效应物质的探讨提供初步的实验依据。方法 :先以“肾俞”“百会”穴针刺预处理大鼠脑组织提取液行大鼠腹腔注射 ,再采用颈动脉引流法脑缺血再灌注造模 ,脑组织石蜡包埋切片 ,HE染色 ,观察脑片缺血性病理变化 ,进行顶皮质Ⅰ区Ⅴ层幸存神经元计数。结果 :在 3个时间段F组幸存神经元密度均显著高于C、D、E 3组 (P <0 0 5 )。结论 :针刺预处理脑组织提取液具有明显的抗脑缺血再灌注损伤作用。

针刺预处理脑组织提取液对小鼠缺氧存活时间的影响(英文)

目的:探讨针刺预处理脑组织提取液的抗缺氧损伤作用,为针刺效应物质的探讨提供初步的实验依据。方法:大鼠肾俞、百会穴针刺后不同时间段断脑提取脑组织液,行小鼠腹腔注射,广口瓶密闭缺氧,记录小鼠缺氧存活时间。结果:生理盐水腹腔注射对小鼠标准缺氧存活时间没有影响(F=1.93,P>0.05);大鼠正常脑组织提取液使小鼠标准缺氧存活时间犤(12.0633±2.6964)min犦缩短(F=143.25,P<0.05);针刺预处理后不同时间段犤预处理即时:(38.2697±3.0043)min,针刺预处理后0.5h:(49.2961±4.9740)min,针刺预处理后1h:(31.0870±3.7730)min;针刺预处理后2h:(26.4465±3.4972)min犦脑组织提取液均可使小鼠标准缺氧存活时间明显延长(F=143.25,P<0.05),且呈现明显的时间变化规律,针刺预处理后0.5h脑组织提取液效果最好,使小鼠标准缺氧存活时间延长至(49.2961±4.9740)min(是空白组的2.3倍)。结论:针刺预处理脑组织提取液可提高机体的缺氧耐受能力,具有抗缺氧损伤作用。

脑组织提取液促进体外培养神经干细胞增殖

目的:寻找特异性的具有促神经干细胞分裂增殖作用的物质,为神经系统发育研究和神经系统疾病包括脑退行性疾病的治疗研究提供新资料。方法:制备新生鼠的前脑、中脑、后脑及小脑组织提取液,体外培养新生鼠神经干细胞,观察神经球的生长情况,采用MTT细胞活性检测法和特异性蛋白质免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞的增殖能力。结果:中脑和小脑的提取液加入后有大量神经球生成,神经干细胞的特异性蛋白nestin免疫细胞化学染色呈阳性。结论:中脑和小脑的提取液可促进体外培养的神经干细胞增殖分裂,且呈一定量效关系。

穴位针刺预处理脑组织提取液对小鼠缺氧存活时间的影响

目的:探讨穴位针刺预处理脑组织提取液的抗缺氧损伤作用,为针刺效应物质的探讨提供初步的实验依据。方法:大鼠肾俞、百会穴针刺后不同时间段断脑提取脑组织液,行小鼠腹腔注射,广口瓶密闭缺氧,记录小鼠缺氧存活时间。结果:生理盐水腹腔注射对小鼠标准缺氧存活时间没有影响(P>0.05);大鼠正常脑组织提取液使小鼠标准缺氧存活时间缩短(P<0.05);穴位针刺预处理后不同时间段脑组织提取液均可使小鼠标准缺氧存活时间明显延长(P<0.05),且呈现明显的时间变化规律,穴位针刺预处理后0.5小时脑组织提取液效果最好,使小鼠标准缺氧存活时间延长至(49.2961±4.9740)分钟(是空白组的2.3倍)。结论:穴位针刺预处理脑组织提取液可提高机体的缺氧耐受能力,具有抗缺氧损伤作用。

脑组织提取液对体外培养雪旺氏细胞影响的观察

目的 :了解脑组织提取液对体外培养雪旺氏细胞的影响。方法 :酶消化法培养的雪旺氏细胞分为对照组和加脑组织提取液组 ,对细胞形态和数量进行观察比较。结果 :体外培养的雪旺氏细胞在加入脑组织提取液后细胞增殖加快 ,并出现细胞突起细长 (为对照组的 2～ 3倍 )、互相延伸等形态学改变。结论 :雪旺氏细胞在接触脑组织提取液后 ,表现为细胞增殖加快 ,突起生长明显的功能活跃状态。

胚脑组织提取液神经营养活性成分的分析

目的通过对胚脑组织的分离纯化,分析不同组份中的神经营养物质对神经细胞的营养作用。方法:采用超滤器超滤,透析袋透析以及Sephadex S-200凝胶层析方法将胚胎脑组织提取液分离纯化。得到9种不同分子量组分的脑活性因子(BCF),分别加入原代培养的新生SD大鼠大脑皮层神经细胞悬液中,培养24 h和15 d后以MTT微量快速自动比色法检测细胞活性。结果发现培养24 h后,有5种组分具有促进培养的大脑皮层神经元的存活的作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);培养15 d后,有4种组分具有促进培养的大脑皮层神经元的存活的作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论胚脑组织提取液可促进培养的大脑皮层神经元的成活、成熟和分化。不同的组分蛋白对神经元的作用不一样。

胎脑组织提取液中氨基酸、维生素和化学元素含量分析

采用日本产岛津LC-60A型高速液相色谱仪和美国产PERKIN—ELMER3030型原子吸收分光光度计，对胎脑组织提取液进行了氨基酸、维生素和化学元素的含量测定。结果表明该药含有18种氨基酸，不少于3种的维生素和20几种化学元素。此结果为进一步改进该药物的合理配制方法、研究药理作用和临床应用提供了参考数据。

损伤脑组织提取液对体外神经干细胞存活和分化的影响

目的 模拟颅脑创伤（TBI）后的化学微环境,探讨该微环境对神经干细胞（NSCs）存活和分化的影响.方法 获取TBI大鼠损伤区脑组织的匀浆液,用于模拟TBI后的化学微环境.分离、提取并培养大鼠原代NSCs,采用免疫荧光染色鉴定其表型.将实验分为对照组、正常脑组织提取液组（BTE组）和创伤脑组织提取液组（TBITE组）.动态观察各组细胞的生长情况和形态变化,24 h后行Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3及Cleaved caspase-3的表达水平;3d后采用噻唑蓝实验和Western Blot检测NSCs的增殖情况;7d后行免疫荧光染色检测NSCs向神经元分化的水平.结果 Western Blot结果显示,与对照组相比,BTE组无明显细胞凋亡变化,而TBITE组NSCs凋亡显著增多,Bax（F=18.06,P＜0.01）和Cleaved caspase-3（F=23.86,P＜0.01）表达升高,Bcl-2表达降低（F=22.95,P＜0.01）,差异均具有统计学意义.噻唑蓝实验结果显示,与BTE组相比,TBITE组NSCs增殖水平降低（F=41.99,P＜0.01）,差异具有统计学意义.免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,BTE组神经元分化率升高;而与BTE组相比,TBITE组神经元分化率降低（F=66.93,P＜0.01）,差异均具有统计学意义.结论 TBI后的损伤微环境可显著抑制NSCs的存活和分化能力,从而为明确TBI后内源性神经的再生机制提供了理论基础.

不同浓度缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对PC12细胞缺氧耐受性的影响

目的:探讨缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(HP extract)对PC12细胞缺氧耐受性的影响。方法:复制小鼠急性重复缺氧模型,制备HP extract。在培养PC12细胞中加入HP extract使其终浓度分别为0.2、0.8、3.2、6.4、12.8g/L(HP组)。以同浓度正常小鼠脑匀浆提取液(N extract)作为对照组(N组)。缺氧(2%O2)培养24、48、72h后,采用四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞活力(A570值)并检测缺氧24、48、72h乳酸脱氢酶(LDH)透出率、缺氧24h早期凋亡率(Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测)、缺氧72h晚期凋亡率(Hoechst33258染色荧光显微镜检测)。结果:HP extract浓度低于6.4g/L(包括6.4g/L),缺氧培养24h时,HP组A570值显著高于同浓度N组,其LDH透出率显著低于同浓度N组。随缺氧时间延长,高浓度HP extract逐渐失去细胞保护作用。至72h时浓度高于6.4g/L(包括6.4g/L)HP extract有促细胞凋亡作用,此时HP组A570值显著低于同浓度N组,其LDH透出率和晚期凋亡率均显著高于同浓度N组。结论:缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对PC12细胞缺氧耐受性的影响呈浓度依赖性和时间依赖性。

乳鼠脑组织中牛磺酸的快速检测

建立一种快速、准确的牛磺酸定量检测方法。采用Beckman公司6300黄金系统氨基酸分析仪,在锂柱130 min程序生理体液分析方法基础上,根据牛磺酸(TAU)的特性,建立了脑组织中TAU快速测定方法。用此方法完成TAU分析的时间为17 min,比原方法缩短了123 min。且有较好的重现性(日内RSD 0.42%,日间RSD 0.57%)、回收率高(98.39%)。本方法简便、快速、准确、可靠,适用于临床和科研工作。

挫伤脑组织对人胚神经干细胞影响的体外研究

目的建立人胚胎来源的神经干细胞体外培养方法,初步研究挫伤脑组织提取液(TBITE)对人胚神经干细胞(HNSCs)存活、增殖能力和分化的影响。方法10周龄左右的胎儿大脑皮层细胞体外培养,神经干细胞增殖2～3代后,剔除生长因子,分别加入不同浓度的脑外伤病人的挫伤脑组织提取液,培养2-3周后,免疫细胞化学方法鉴定细胞分化后的类型。用Laemmli凝胶电泳法分析培养液上清。结果成功获得以神经球形式生长的人胚神经干细胞,Nestin表达阳性;与空白对照相比,TBITE组中的神经干细胞有明显的增殖,并分化为神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞。随着TBITE含量的增加,星形胶质细胞的比例增加。结论脑外伤的局部微环境可促进神经干细胞增殖和分化。

影响体外培养成骨细胞增殖和蛋白表达的因素

1猪大脑灰质组织提取液促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖夏新雷（复旦大学附属华山医院骨科，上海市200040）推荐理由：研究表明脑损伤后脑组织突破固有的屏障释放入血液，通过循环起到改变骨代谢的作用。既往实验表明大鼠脑组织提取液能够促进大鼠戍骨细胞和骨髓基质干细胞的增殖，那么，这种促进作用是否跨种属存在呢？实验拟采用跨种属的哺乳类动物猪的不同部位脑组织提取液体外培养大鼠成骨细胞，结果证实，猪脑组织提取液能跨种属促进大鼠成骨细胞的增殖，其中以大脑灰质的促进作用最为显著。

透明质酸水凝胶体外促进骨髓间充质干细胞神经分化的研究

目的观察以透明质酸(hyaluronic acid,HA)水凝胶作细胞支架,骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在HA水凝胶中的生长、增殖和分化情况,探讨HA水凝胶支持、促进BMSCs分化为神经元细胞的作用。方法采用Percoll法从SD雄鼠的骨髓中分离纯化BMSCs,传代培养,倒置显微镜观察BMSCs的生长情况和形态变化。各组以不同的方法诱导BMSCs分化。采用免疫细胞化学法检测各组BMSCs在相应时间点神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经丝蛋白(NF)及巢蛋白(nestin)的阳性细胞数。RT-PCR检测各组BMSCs相应时间点的NSE mRNA、NF mRNA和nestin mRNA表达。结果传代后BMSCs形似纤维细胞。诱导后,HA水凝胶组(A组)和脑组织提取液组(B组)BMSCs分化为神经元样细胞:A组细胞黏附在HA水凝胶表面,长出较多突起和分支;B组细胞出现突起及少量分支。诱导后A组和B组NSE、NF阳性细胞增多(P<0.05)。诱导2d后及7d后A组和B组nestin阳性细胞均增多:2d后,A组高于B组(P<0.05);7d后,A组低于B组(P<0.05)。诱导7d后A组和B组的NSE mRNA、NF mRNA表达均增加,A组增加明显(P<0.05)。诱导2d后A组和B组的nestin mRNA表达增加,A组更显著(P<0.05);7d后A组和B组的nestin mRNA表达则降低,A组更明显(P<0.05)。结论 HA水凝胶有利于BMSCs的黏附,为BMSCs生长、增殖和分化提供了结构支持和适宜的微环境,促使BMSCs向神经元细胞分化、增殖并表达神经元特异性蛋白。