人胚胎脑组织蛋白提取物诱导人胎盘间充质干细胞向神经细胞的分化

背景:选择合适的诱导方法诱导人胎盘间充质干细胞分化为神经元样细胞是临床治疗神经损伤的关键。目的:在人胎盘间充质干细胞中加入商品化的人胚胎脑组织蛋白提取物,观察其诱导分化为神经元样细胞的可行性。方法:采用酶消化法分离培养人胎盘间充质干细胞,传至第3代,将人早期胚胎脑组织蛋白提取物加入诱导培养基培养6 d,加入浓度为20 nmol/L全反式维甲酸和500μg/L音猬因子培养3 d,换新的培养液,包含体积分数为10%胎牛血清,10μg/L脑源性神经营养因子,20μg/L神经胶质细胞源性神经营养因子,50μg/L胰岛素样生长因子Ⅱ型继续培养3 d。结果与结论:胎盘组织经酶消化后获得贴壁细胞,传至第2代细胞形态为梭形,成漩涡样生长,传至第3代细胞形态较均一。诱导后细胞经免疫细胞化学法检测均表达神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43;ELISA法检测细胞培养上清脑源性神经营养因子、神经营养因子3、神经营养因子4为阳性表达;RT-PCR检测细胞微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43均为阳性表达。结果表明人胚胎脑组织蛋白提取物使人胎盘间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。

颅脑创伤后的化学微环境对温敏脐带间充质干细胞增殖和分化的影响

目的:模拟颅脑创伤(TBI)后的化学微环境,探讨损伤组织提取液对温度敏感型脐带间充质干细胞(ts UC)增殖和分化影响。方法:用液压冲击损伤仪建立大鼠颅脑创伤模型,获取损伤区域脑组织的匀浆液,用于模拟TBI后的化学微环境。分离培养人脐带间充质干细胞(UC),通过感染携温度敏感型猿猴病毒40大T抗原(ts-SV40LT)基因的逆转录病毒,以建立ts UC系。在模拟脑组织弹性模量的聚丙烯酰胺水凝胶上进行细胞培养。实验分为UC组(37℃,加入PBS)、ts UC组(33℃,加入PBS)、UC+提取液组(37℃)、ts UC+提取液组(33℃持续3d,后转至37℃)(n=4)。动态观察各组细胞的生长情况和形态变化,24 h后检测细胞的凋亡水平,3 d检测细胞的增殖情况,7 d检测其向神经元和星形胶质细胞分化的水平。结果:与UC+提取液组相比,ts UC+提取液组的凋亡细胞和增殖率分别显著性减少和增加(P<0.01);细胞免疫荧光结果显示,ts UC+提取液组GFAP和Neu N阳性细胞均比UC+提取液组显著性增加(P<0.01)。结论:在模拟脑损伤的化学微环境中,温敏脐带间充质干细胞联合亚低温可显著逆转脑损伤诱导的细胞凋亡,促进细胞的增殖以及向神经细胞的分化,从体外角度证实了温敏脐带间充质干细胞在亚低温环境下对TBI后脑组织微环境的适应性和耐受性。

一种脑代谢研究的有效方法——高分辨率磁共振波谱分析

介绍了一种脑代谢研究的有效方法 .成年大鼠脑经漏斗法液氮冷冻 ,制备脑组织高氯酸提取物并冷冻干燥 ,所得固体溶于D2 O后用1 H和31 P磁共振波谱 (MRS)检测 .结果表明 :脑高氯酸提取物的磁共振波谱有着极好的分辨率 ,31 PMRS可以分辨出ATP、ADP、磷酸肌酸(PCr)、无机磷以及多种磷酯和糖磷 ;1 HMRS可以分辨出乳酸 (Lac)、N 乙酰天冬氨酸 (NAA)、胆碱 (Cho)、肌酸 (Cr)、GABA、肌醇 (Ino)、琥珀酸 (Suc)以及多种氨基酸 .各波峰积分后得到各种物质的相对含量 ,而这些代谢中间产物的相对含量变化可以反应脑内的代谢状况和脑受损伤情况 .