局灶预缺血诱导脑缺血耐受的动物模型

目的 建立一种简便可靠的 SD大鼠局灶性脑缺血预处理模型。方法 将大鼠随机分为 3组 ,分别给予 10 m in大脑中动脉缺血 ( MCAO)预处理 ( PC) ;10 min PC后 2 h MCAO( PC+MCAO)及假手术 ( SS)后 2 hMCAO( SS+MCAO) ,再灌注 2 2 h后处死 ,观察各组神经功能缺损、梗死体积及脑含水量变化。结果 PC+MCAO组神经功能评分、梗死体积及含水量均明显低于 SS+MCAO组 ,PC组无神经功能缺损及梗死灶形成。结论 2次线栓法建立的大鼠局灶脑缺血预处理模型 ,能有效减轻 MCAO所致的神经损伤 ,操作简便 ,稳定性好 ,是一种研究局灶脑缺血耐受的有用工具。

毛冬青总黄酮提高大鼠脑缺血耐受作用研究

目的观察毛冬青总黄酮对脑缺血预处理大鼠的保护作用及对皮层、海马CA1区脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(Glial-derived neurotrophic factor,GDNF)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达的影响,探讨毛冬青总黄酮提高脑缺血耐受的作用机制。方法采用阻断大鼠双侧颈总动脉血流10min做为脑缺血预处理(Cerebral ischemic preconditioning,CIP)模型,72h后阻塞大脑中动脉(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)2h作为脑缺血再灌注模型。Wistar大鼠随机分为5组:假手术组(Sham),脑缺血再灌注损伤组(cerebral ischemia reperfusion,I/R),脑缺血预处理组(CIP+MCAO),毛冬青总黄酮高剂量组(IPTF,200mg/kg),毛冬青总黄酮低剂量组(IPTF,100mg/kg)。采用神经缺损评分(NDS)法评价行为学改变,TTC染色法评价脑梗死体积,免疫组化法观察BDNF、GDNF、VEGF的表达变化。结果毛冬青总黄酮能明显改善脑缺血预处理大鼠神经功能缺损评分,减小脑梗死体积;增加皮层、海马CA1区BDNF、VEGF蛋白阳性表达面积和积分光密度值。结论毛冬青总黄酮提高脑缺血耐受的作用与上调BDNF、VEGF内源性保护蛋白的表达有关。

代谢型谷氨酸受体阻断剂α-methyl-(4-tetrazolyl-phenyl)glycine对大鼠海马脑缺血耐受诱导的影响

实验采用大鼠四血管闭塞全脑缺血模型 ,用硫堇染色法和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组化法 ,观察右侧脑室内注射Ⅱ型代谢型谷氨酸受体 (metabotropicglutamatereceptor 2 / 3 ,mGluR2 / 3 )阻断剂α methyl ( 4 tetrazolyl phenyl)glycine (MTPG)对海马CA1区神经元缺血耐受 (BIT)诱导的影响 ,以探讨mGluR2 / 3在BIT诱导中的作用。 5 4只大鼠椎动脉凝闭后分为 5组 :( 1)假手术组 (n =8) :游离双侧颈总动脉 ,但不夹闭 ;( 2 )单纯缺血组 (n =8) :夹闭双侧颈总动脉 8min ;( 3 )缺血预处理组 (n =8) :夹闭双侧颈总动脉 3min作为脑缺血预处理 (CIP) ,再灌注 2 4h后再行夹闭 8min ;( 4)MTPG +缺血预处理组 (n =2 2 ) :CIP前 2 0min右侧脑室注射MTPG ,其余步骤同缺血预处理组 ;MTPG的剂量分别为 0 4、0 2、0 0 4和 0 0 0 8mg ,以观察其剂量效应关系 ;( 5 )MTPG +单纯缺血组 (n =8) :右侧脑室注射MTPG0 2mg 2 4h后 ,夹闭双侧颈总动脉 8min。所有动物均在手术后或末次缺血后 7d处死 ,取材观察。结果如下 :( 1)与假手术组相比 ,单纯 8min缺血组海马CA1区组织学分级升高、锥体神经元密度降低 ,GFAP阳性表达增加 (P <0 0 5 ) ;( 2 )缺血预处理组的组织学分级、神经元密度及GFAP表达与假手术组相似 ,未见单纯缺?

不同电针刺激参数对脑缺血耐受效应的研究

目的:探讨不同电针刺激参数及组合对脑缺血耐受效应机理的研究进展,寻求最佳的参数组合。方法:从电针频率、电针强度、电针波形和刺激时间等方面,对近年来研究电针刺激参数对脑缺血耐受效应的文献报道做一综述。结果:不同电针刺激参数产生不同的脑缺血耐受机理。结论:电针参数的选择十分重要,但是缺乏统一的标准。

p38 MAPK反义寡聚脱氧核苷酸阻断肢体缺血预处理诱导的脑缺血耐受

目的:观察p38MAPK反义寡聚脱氧核苷酸(As-ODN)对肢体缺血预处理(LIP)诱导的脑缺血耐受的影响。方法:48只永久凝闭双侧椎动脉的Wistar大鼠分为8组(n=6):sham组、LIP组、脑缺血损伤组、LIP+脑缺血损伤组、双蒸水+LIP+脑缺血损伤组、p38MAPKAs-ODN组和p38MAPKAs-ODN+LIP+脑缺血损伤组,p38MAPKAs-ODN的剂量又分为5nmol/5μl和10nmol/5μl。所有动物均在sham手术后或末次全脑缺血/再灌注后7天断头取脑,硫堇染色观察海马CA1区锥体神经元迟发性死亡情况。结果:sham组和LIP组均未见延迟性神经元死亡(DND)。与sham、LIP组相比,脑缺血损伤组出现了明显的DND,表现为组织学分级(HG)升高和锥体神经元密度(ND)下降(P<0.05)。LIP可显著抑制脑缺血损伤引起的DND。与LIP+脑缺血损伤组相比,p38MAPKAs-ODN+LIP+脑缺血损伤组出现了显著的DND,表现为HG升高、ND降低(P<0.05),且此种变化与p38MAPKAs-ODN的注射剂量呈明显正相关。结论:p38MAPKAs-ODN可阻断LIP诱导的脑缺血耐受,进一步证实了p38MAPK表达上调参与了LIP诱导的脑缺血耐受。

阿片受体在电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受效应中的作用

目的探讨阿片受体在重复电针灸预处理诱导大鼠脑缺血耐受形成中的作用。并研究可能参与作用的阿片肽种类。方法雄性SD大鼠42只,随机分为空白对照组,戊巴比妥钠组,电针(EA)组,EA+δ受体拮抗剂naltrindole(NTI)组,EA+κ受体拮抗剂nor-binaltorphimine(BNI)组,NTI组和BNI组。EA组、EA+NTI组和EA+NBI组接受相同电针灸刺激(疏密波2/15Hz,1mA,30min/d)连续5d,EA+NTI组和EA+BNI组分别于每次电针灸开始前给予NTI(1mg/kg)或BNI(2.5mg/kg)腹腔注射;NTI组和BNI组单纯腹腔注射相同剂量的NTI或BNI。最后一次处理24h后采用MCAO模型。再灌注24h进行神经学评分后取脑,经TTC染色计算脑梗死容积。结果脑梗死容积EA组明显小于空白对照组(P=0.000);EA+NTI组与空白组比较没有明显的统计学差异(P=0.219),而与EA组有明显的统计学差异(P=0.000);EA+BNI组与空白组比较有明显统计学差异(P=0.000),与EA组比较没有明显的统计学差异(P=0.319);说明NTI(1mg/kg)能够阻断EA预处理诱导的脑保护效应,而BNI(2.5mg/kg)不能。结论阿片受体参与了重复电针灸刺激大鼠百会穴诱导的脑缺血耐受效应,δ受体发挥了主要作用。

电针预处理诱导脑缺血耐受的研究进展

电针预处理具有诱导脑缺血耐受降低脑缺血/再灌注损伤的作用,其机制涉及多水平、多通路、多靶点。本研究总结近年来电针预处理在技术参数、作用规律及作用机制方面的研究进展,为电针预处理作为一种脑血管疾病的预防保护策略应用于临床提供理论支持。

脑缺血耐受中亲代谢型谷氨酸受体1α下调的意义

目的:观察局灶脑缺血预处理对亲代谢型谷氨酸受体1α(metabotropicglutamatereceptor1α,mGluR1α)表达的影响并初步探讨其在脑缺血耐受中的意义。方法:SD大鼠单纯随机分为3组,对照组给予两次假手术,其余两组分别在2h大脑中动脉阻塞(MCAO)及22h再灌注前3d给予10min的预缺血或假手术,比较各组梗死体积、脑组织病理变化及mGluR1α免疫组化染色的平均光密度(MOD)和积分光密度(IOD)。结果:预缺血组梗死体积较假手术组减小53.48%(t=8.896,P=0.0006),神经元变性、坏死亦轻于假手术组,同时伴mGluR1α表达降低(PMOD=0.00021,PIOD=0.00012)。图像分析显示3组间MOD(F=359.496,P=0.00038)及IOD(F=285.167,P=0.00036)差异有显著性意义。结论:10minMCAO可有效诱导缺血耐受,减轻二次缺血所致的神经元死亡,减少mGluR1α表达。mGluR1α表达下调可能是局灶性脑缺血耐受产生的分子机制之一。

代谢性谷氨酸受体配体(s)-4C3HPG对大鼠脑缺血耐受性诱导的影响

目的 :观察侧脑室注射代谢型谷氨酸受体 1 /5亚型 (mGluR1 /5)配体 (s) 4C3HPG对海马脑缺血耐受 (BIT)诱导的影响 ,以探讨mGluR1 /5在BIT诱导中的作用。方法 :采用大鼠四血管闭塞全脑缺血模型 (4 vesselocclusion ,4VO) ,应用硫堇染色和GFAP免疫组化法。 36只大鼠椎动脉凝闭后分为sham组、单纯缺血组、BIT组和 (s) 4C3HPG组 ,其中 (s) 4C3HPG组又按所给药物剂量不同 ,分为 0 .2、0 .0 4和 0 .0 0 8mg三个亚组。所有动物均在手术后或末次缺血后 7d处死取材观察。结果 :①单纯 8min缺血可使海马CA1区组织学分级升高、锥体神经元密度降低和胶质纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)阳性表达增加 (P <0 .0 5vssham)。②BIT组未见单纯缺血组的上述变化 ,表明CIP可防止后续 8min缺血造成的神经元损伤。③CIP的这种保护作用可被 (s) 4C3HPG阻断 ,表现为海马CA1区组织学分级升高和锥体神经元密度降低 (P <0 .0 5vssham)。这种变化与 (s) 4C3HPG的剂量呈现明显的相关性 ,即剂量越大 ,上述改变越明显。结论 :(s) 4C3HPG可阻断CIP诱导BIT的作用 ,提示mGluR1

3-硝基丙酸预处理诱导沙土鼠脑缺血耐受与海马星形胶质细胞的激活

目的 :探讨海马区星形胶质细胞的激活与 3 硝基丙酸 (3 NPA)预处理诱导脑缺血耐受的关系。方法 :阻断沙土鼠双侧颈总动脉造成前脑缺血模型 ,通过HE染色和免疫组化观察海马锥体细胞死亡和星形胶质细胞的反应。结果 :对照组海马CA1区已失去正常结构 ,锥体细胞大部分丧失 ,存活神经元计数显著低于假手术组。 3 NPA预处理组存活神经元减少 ,但高于对照组。假手术组海马CA1区仅见少量胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)阳性细胞 ,染色较弱 ,突起不明显。对照组海马CA1区GFAP阳性细胞增多 ,多为弱阳性。 3 NPA预处理组海马CA1区GFAP阳性细胞数目明显增多 ,染色较深 ,突起增粗。结论 :星形胶质细胞形态和机能的改变可能与 3

3-硝基丙酸预处理对脑缺血耐受模型GLUT1和GLUT3表达的影响

目的:探讨3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带区不同再灌注时点GLUT1和GLUT3mRNA及蛋白水平表达的影响。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组(sham组,n=4)、预处理对照组(3-NPA组,n=4)、大脑中动脉缺血组(M组,n=16)、3-NPA预处理组(IPC组,n=16)。M组和IPC组按再灌注时间(4h、12h、24h及48h)不同又分为4个亚组,每组动物4只。将大鼠在相应时点断头取脑,取缺血侧(左侧)冠状面中间1/3皮质,分别采用RT-PCR和Western blotting方法检测GLUT1、GLUT3 mRNA和蛋白水平表达情况。结果:IPC组GLUT1 mRNA表达在缺血再灌注后4h开始升高,48h最大,显著高于sham组和M组相应时点。IPC组GLUT3 mRNA表达在24h增高,48h最高,与M组相应时点24h、48h及sham组比较显著增高。IPC组比M组的GLUT1蛋白、GLUT3蛋白表达增高,有显著差异(F=5.848,P<0.05;F=6.295,P<0.05),尤以缺血再灌注后48h两者差异最明显。结论:3-NPA预处理能诱导脑缺血耐受,其机制可能是上调GLUT1和GLUT3 mRNA及蛋白表达水平,维持脑组织的能量供给。

针刺预处理与脑缺血耐受研究机制进展

针刺预处理具有诱导脑缺血耐受,降低脑缺血损伤和保护脑神经系统的作用。其机制较为复杂,涉及多水平、多靶点、多途径,其中抑制谷氨酸过度活化、调控炎症反应、抑制神经元凋亡以及脑卒中后血脑屏障功能障碍是针刺预处理诱导脑缺血耐受的关键机制。通过这些机制,针刺预处理可减少脑缺血相关神经功能缺失,从而诱导脑缺血耐受。认识到针刺预防的好处可能会使更多的患者接受缺血性脑卒中的针刺治疗。

核因子κB在大鼠脑缺血耐受中的作用及其对细胞间黏附分子-1和Bcl-2表达的影响

目的 探讨核因子κB(NFκB)在大鼠脑缺血耐受中的作用及其可能的参与途径。方法 建立大鼠 4血管闭塞的全脑缺血耐受模型 ,将实验动物随机分为 4组 :假手术组 (sham) ,缺血再灌注组 (I/R) ,缺血预处理加缺血再灌注组 (IP +I/R) ,DTTC(NFκB的特异性抑制剂 )加缺血预处理组加缺血再灌注组 (IPDTTC+I/R)。用凝胶电泳迁移率改变分析法检测NFκB的活性 ,免疫组化技术检测细胞间黏附分子 1(ICAM 1)和Bcl 2的表达。结果 I/R中NFκB被激活 ,IP可抑制其激活 ,DTTC可逆转IP对I/R中NFκB的抑制效应 ;IP +I/R组与I/R组相比 ,神经元计数明显增高 ,ICAM 1的表达降低 ,Bcl 2的表达增加 ;给予DTTC处理后 ,IP的神经保护作用明显减弱 ,IPDTTC+I/R组与I/R组ICAM 1和Bcl 2的表达无显著性差异。结论 IP的神经保护效应依赖于NFκB的激活 ,可能部分通过上调Bcl 2的表达 ,同时抑制I/R中NFκB的活性而减少ICAM 1的产生发挥作用。

诱导脑缺血耐受影响脑组织抗氧化活力

目的 建立诱导脑缺血耐受的缺血预处理模型并研究其对脑组织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）活性的影响。方法 动物分别给予假预处理（ＳＨＡＭ），一侧颈内动脉注射生理盐水（ＳＩ）、双侧颈总动脉夹闭（ＢＣＡＯ）和双侧颈总动脉夹闭同时一侧颈内动脉注射生理盐水（ＢＳ），２４ｈ后腔内线栓法制作大脑中动脉阻断（ＭＣＡＯ）模型。观察ＭＣＡＯ后７２ｈ ４组脑梗死体积，观察各组预处理２４ｈ和 ＭＣＡＯ ２４ｈ、４８ｈ缺血侧脑组织ＳＯＤ和ＧＳＨ－ＰＸ活力。结果 ＢＳ组脑梗死体积明显低于其它３组（Ｐ＜０．０５）．预处理后２４ｈ ＢＳ组缺血侧脑组织ＳＯＤ和ＧＳＨ－ＰＸ活力明显高于其它组（Ｐ＜０．０１）；ＭＣＡＯ ２４ｈ、４８ｈ ４组缺血侧脑组织ＳＯＤ和ＧＳＨ－ＰＸ活力均明显降低，ＢＳ组ＳＯＤ和ＧＳＨ－ＰＸ活力明显高于其它３组（Ｐ＞０．０１）。结论 双侧颈总动脉夹闭同时一侧颈内动脉注射生理盐水能诱导缺血耐受，该缺血预处理增高脑组织抗氧化活力，可能是缺血耐受产生的机制之一。

TLR4及MyD88在大鼠局灶性脑缺血耐受过程中的作用

目的本实验拟探究经脑缺血预处理后Toll样受体4(TLR4)及其下游髓样分化因子88(MyD88)蛋白在脑缺血耐受中的作用。方法采用改进的大鼠大脑中动脉线栓法构造大鼠脑缺血预处理模型,取大鼠脑组织后应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察鼠脑梗死面积变化,干湿法探究脑水肿程度改变,并通过Western blot横向对比各组TLR4及MyD88蛋白表达情况。结果缺血处理后大鼠当其再次面临缺血再灌注损伤时,TLR4蛋白和MyD88蛋白表达在各观察时间点均呈现了不同程度的降低,且梗死面积及脑水肿程度也有所降低。结论经脑缺血预处理后脑组织可产生对致死性再灌注损伤的耐受,这种耐受是通过TLR4及MyD88蛋白的下调表达实现的并具有一定的时效性。

低氧诱导因子-1α、存活素与脑缺血耐受

预先给动物轻微、短暂而不至于引起神经元死亡的脑缺血刺激，可激发机体产生内源性保护机制，提高脑组织对后续较严重缺血损害的耐受能力，减轻脑组织损害，此现象为脑缺血耐受。涉及凋亡、热休克蛋白（ HSP）、兴奋性氨基酸、腺苷、炎症和氧自由基，以及信号传导通路等的变化。对缺血耐受进行研究，有助于阐明机体对缺血性损害的内源性保护机制。低氧诱导因子-1α（ HIF-1α）在缺氧状态下可以激活下游目的基因表达相关蛋白，促进机体产生一系列低氧应答反应[1]。存活素是凋亡抑制蛋白（ IAP）家族的重要成员，有抑制细胞凋亡、促进缺血区新生血管形成的重要作用。现就HIF-1α和survivin在脑缺血耐受中的作用综述如下。

2-4脱氧葡萄糖在内质网应激预处理诱导脑缺血耐受中的作用

目的观察2-脱氧葡萄糖(2-DG)诱导内质网应激(ERS)预处理时GRP78、Bcl-2、Bax的变化,探讨2-DG在脑缺血耐受中的作用。方法将64只SD大鼠随机均分为假手术组(SH组)、缺血/再灌注组(I/R组)、ERS预处理组(IP组)、IP+I/R组。采用原位末端标记法检测海马CA1区凋亡细胞,免疫组化法、Western-Blot法检测GRP78、Bcl-2及Bax蛋白在海马CA1区的表达。结果与I/R组比较,IP+I/R组GRP78、Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达及细胞凋亡明显减少(P<0.05或<0.01)。结论 2-DG上调GRP78时也上调Bcl-2表达,减轻神经细胞凋亡,起到脑保护作用;2-DG可抑制Bax表达,减弱其对神经细胞的损害,使细胞存活。

基于缺血预处理诱导脑缺血耐受临床特点的动物模型分析

通过分析临床上短暂性脑缺血发作(TIA)诱导脑缺血耐受的特点和影响因素,总结脑缺血耐受动物模型的特点和造模方法,比对临床相关症状,对现有动物模型与临床病症的吻合情况进行分析探讨,提出相应动物模型的评价及改进方法。脑缺血耐受造模方法较多,但缺少能反映脑缺血耐受临床特点的动物模型,建立合理的模型量化标准,完善模型评价方法,是脑缺血耐受动物模型的发展方向。

针刺诱导脑缺血耐受研究进展

缺血性脑血管病的防治已成为重点,针刺在诱导脑缺血耐受方面发挥的积极作用已被广泛证实,现从针刺诱导脑缺血耐受的验证性研究与作用规律及针刺诱导脑缺血耐受的相关机制等方面进行综述,以期为临床应用提供理论依据。