piRNA-514对心肌细胞肥大的调控作用及其机制

目的探讨piwi互作RNA-514(piRNA-514)对心肌细胞肥大的调控作用及其机制。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测8周龄雄性C57小鼠肾、肝、脾、肺和心脏中的piRNA-514相对表达量;采用qPCR检测异丙肾上腺素(ISO)分别诱导乳鼠原代心肌细胞0、8、12、24 h后细胞中piRNA-514以及心肌肥厚标记物心房肽(ANF)的相对表达量;采用qPCR检测piRNA-514的类似物agomir-piR-514转染进原代心肌细胞后,细胞中piRNA-514、ANF和脑利钠肽(BNP)的相对表达量,采用鬼笔环肽(phalloidin)和DAPI对原代心肌细胞染色,测定细胞表面积;采用qPCR检测agomir-piR-514转染进原代心肌细胞,经ISO诱导24 h后细胞中piRNA-514、ANF和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的相对表达量,phalloidin和DAPI对原代心肌细胞染色,激光共聚焦显微镜观察细胞表型变化并测定细胞表面积。结果qPCR方法检测结果显示,与肾、肝、脾、肺相比,piRNA-514在心脏中的表达量最高(F=24.47,P<0.01);qPCR方法检测结果显示,随着ISO诱导时间延长,原代心肌细胞中piRNA-514表达水平逐渐降低(F=12.26,P<0.01),ANF表达水平逐渐升高(F=4.49,P<0.01);qPCR方法检测结果显示,与对照组相比,转染agomir-piR-514组的心肌细胞中piRNA-514的相对表达量显著增高,ANF以及BNP的相对表达量显著降低(F=7.91~14.25,t=14.84~29.43,P<0.05),对细胞的表面积测定结果显示,转染ago-mir-piR-514组的细胞表面积与对照组相比明显减小(F=36.12,t=8.73,P<0.05);qPCR方法检测结果显示,与ISO组相比,agomir-piR-514+ISO组的原代心肌细胞中piRNA-514相对表达量显著增高,ANF和β-MHC的相对表达量显著降低(F=10.89~21.57,t=6.94~12.96,P<0.05),细胞表面积测定结果显示,agomir-piR-514+ISO组的细胞表面积与ISO组相比显著减小(F=23.82,t=16.41,P<0.05)。结论piRNA-514具有调控心肌细胞肥大的功能,过表达piRNA-514可以抑制ISO诱导的心肌细胞肥大。