miR-205-5p/E2F1信号抑制经典Wnt/β蛋白通路调控脑胶质瘤细胞放射敏感性

目的探索miR-205-5p/E2F1信号轴在脑胶质瘤U251、U87细胞放射耐受中的调控机制。方法利用X射线逐步递增递间歇诱导方法照射U251、U87细胞,建立放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞。对两种细胞进行形态学、细胞运动、侵袭及增殖能力分析。通过荧光素酶基因检测系统及点突变技术分析E2F1基因对U251/TR、U87/TR细胞的调控机制。结果放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞分别比251、U87细胞的增殖活力增强,运动、侵袭能力增强,X射线照射下细胞凋亡下降。miR-205-5p mimics转染能够下调U251/TR细胞E2F1因子表达,抑制细胞增殖、侵袭及运动,增加放射敏感性。miR-205-5p mimics转染协同E2F1下调是通过抑制细胞Wnt/β-catenin信号通路活性发挥抑制肿瘤作用,并降低细胞耐受。结论逐步递增递间歇诱导方法能较好地建立U251/TR、U87/TR细胞。miR-205-5p/E2F1信号轴通过经典Wnt/β-catenin信号通路发挥抑癌作用,可以作为提高胶质瘤放射敏感性的治疗靶点。

木犀草素联合替莫唑胺治疗脑胶质瘤及其机制的研究

目的:探讨木犀草素联合替莫唑胺治疗脑胶质瘤的效应,并阐明木犀草素的低毒性和抑制作用机制。方法:利用MTT法测定木犀草素和替莫唑胺对脑胶质瘤细胞系U87-MG和人正常脑细胞细胞生长的抑制作用,并利用荧光染色法检测细胞形态的变化;分光光度法检测木犀草素对细胞凋亡蛋白caspase-3活性,采用Transwell小室法分析木犀草素和替莫唑胺对U87-MG细胞转移能力;采用非放射性NF-κB EMSA试剂盒测定U87-MG细胞中NF-κB表达。结果:随着木犀草素和替莫唑胺浓度的增加,U87-MG细胞生长抑制率从(0.08±0.01)%分别增加到(87.30±8.45)%和(81.94±7.32)%,木犀草素和替莫唑胺对的半抑制率IC50分别为(30.54±2.98)和(32.79±3.08)μmol/L;但木犀草素作用下的正常脑细胞的生长并未受到明显的抑制。木犀草素与替莫唑胺联合使用时,对U87-MG细胞的生长抑制起到了良好的协同作用;与空白对照组比较,木犀草素和替莫唑胺存在下的U87-MG细胞的侵袭能力从(100.36±8.91)%分别降到了(15.48±1.23)和(27.66±2.76);U87-MG细胞中凋亡蛋白caspase-3相对活性增加了(90.44±5.61)%,并能够NF-κB信号的表达下调了(89.64±6.77)%。结论:低毒性的木犀草素可能通过下调NF-κB信号通路和激活凋亡caspase-3酶联反应的方式对U87-MG细胞的侵袭、增殖产生抑制作用,并与低浓度的替莫唑胺联合使用有良好的协同作用。