Hedgehog信号通路转录因子Gli1蛋白在结直肠癌组织中的表达

目的探讨Hedgehog信号通路转录因子脑胶质瘤相关癌基因1(Gli1)蛋白在结直肠癌组织中的表达及作用。方法免疫组化法检测Gli1蛋白在147例手术切除结直肠癌组织中的表达;Western blotting法检测Gli1蛋白在19例结直肠癌新鲜组织和2个结肠癌细胞系中的表达;同时用共聚焦激光显微镜观察Gli1转录水平的抑制剂GANT61对8例直肠癌组织中直接分离的肿瘤细胞的影响。结果 147例结直肠癌根治切除标本中,Gli1蛋白在78.2%(115/147)的结直肠癌组织中表达升高,阳性信号表达在肿瘤细胞的细胞核和细胞浆。Gli1蛋白在结直肠癌组织中的表达与结直肠癌浸润前缘肿瘤细胞团数目、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)。在5例Gli1蛋白阳性的结直肠癌组织中,间质细胞,包括肿瘤相关纤维母细胞和内皮细胞内高表达Gli1蛋白。Gli1蛋白在结直肠癌组织和2个结肠癌细胞系中的表达也升高。对结直肠癌组织中直接分离出的肿瘤细胞,培养以后加入GANT61,可以明显抑制肿瘤细胞内Gli1蛋白的表达,而对肿瘤相关纤维母细胞没有显著影响。结论 Gli1蛋白的活化可能增强肿瘤细胞的侵袭和转移能力,从而促进结直肠癌的进展;GANT61可能为进展期结直肠癌的治疗提供新的契机。

Gli1在幽门螺杆菌相关胃癌及癌前病变中的表达及意义

目的探讨脑胶质瘤相关同原癌基因1(Gli1)在幽门螺杆菌(H.pylori)相关胃癌及癌前病变中的表达及意义。方法采用改良Giemsa染色法对160例胃癌及癌前病变组织进行H.pylori检测并分组;免疫组织化学二步法检测各组标本中Gli1蛋白的表达;分析H.pylori感染与Gli1蛋白表达的关系。结果 Gli1蛋白在胃癌及癌前病变各组间表达有显著差异(H=39.85,P<0.001),胃癌组显著高于慢性浅表性胃炎及化生性萎缩性胃炎组(P均<0.001),胃癌组与异型增生组比较差异无统计学意义(P>0.05);各病变组再分为H.pylori阴性及阳性亚组,在化生性萎缩性胃炎组中,H.pylori阳性亚组Gli1的表达显著高于H.pylori阴性亚组,其余病变组中,H.pylori阴性及阳性组间无显著差异(P>0.05)。结论 Gli1蛋白在胃癌组织中异常高表达;H.pylori感染可能在胃黏膜癌前病变阶段上调Gli1蛋白的表达,以促进胃黏膜癌变的发生。

胰腺癌组织中Plexin-B1、Gli1蛋白表达及其与临床特征的关系

目的 探讨胰腺癌组织中从蛋白B1(Plexin-B1)、脑胶质瘤相关癌基因-1(Gli1)蛋白表达及其与临床特征的关系。方法 选取经手术后病理学证实的69份胰腺癌组织标本为胰腺癌组,胰腺癌旁3cm的34份正常组织标本为对照组。采用免疫组化染色检测组织标本中Plexin-B1、Gli1蛋白表达情况,并分析其与胰腺癌患者临床特征的关系。结果 胰腺癌组Plexin-B1、Gli1蛋白表达阳性率均明显高于对照组(均P<0.05)。胰腺癌组织中Plexin-B1、Gli1蛋白表达与临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移等有关(均P<0.05)。胰腺癌组织中Ple xin-B1与Gli1蛋白表达呈正相关(r=0.885,P<0.05)。结论 胰腺癌组织中Ple xin-B1、Gli1蛋白表达阳性率明显升高,与患者的临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移等有关。

Hh信号通路相关因子Shh、Ptch-1和Gli-1在前列腺癌中的表达及意义

目的探讨刺猬信号通路(hedgehog,Hh)信号通路相关因子Sonic刺猬信号通路(Sonic hedgehog,Shh)、Patched-1(Ptch-1)、脑胶质瘤相关癌基因1(glioma related oncogene homology-1,Gli-1)在前列腺癌中的表达及意义。方法收集60例前列腺癌、前列腺癌旁正常组织标本,通过免疫组织化学法检测各标本中Shh、Ptch-1、Gli-1阳性表达情况,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测各标本中Shh、Ptch-1、Gli-1 mRNA表达情况,分析Shh、Ptch-1、Gli-1与前列腺癌临床分期、分化程度及血清前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)含量的相关性。结果Shh、蛋白阳性信号主要表达于细胞质或细胞膜;Ptch-1蛋白阳性信号主要表达于细胞质中;Gli-1蛋白阳性信号主要表达于细胞核或细胞质中。前列腺癌组织标本Shh、Ptch-l、Gli-l阳性表达率均显著高于癌旁组织(P<0.05)。前列腺癌组织标本中Shh与Ptch-1呈正相关(P<0.05),Shh与Gli-1,Ptch-1与Gli-1无相关性(P>0.05)。不同临床分期、分化程度、血清PSA含量前列腺癌组织Shh、Ptch-1、Gli-1 mRNA表达量差异均有统计学意义(P<0.05)。前列腺癌组织Shh、Ptch-1、Gli-1 mRNA表达情况与临床分期、分化程度、血清PSA含量均呈正相关(P<0.05)。结论前列腺癌组织中Shh、Ptch-1、Gli-1表达水平上调,其表达水平与前列腺癌临床分期及分化程度有关,提示Shh、Ptch-1、Gli-1与前列腺癌的发生与进展有密切关联,抑制Hh信号通路对前列腺癌的诊治具有重大意义。

脑胶质瘤相关癌基因1对人胰腺癌PANC-1细胞增殖的影响

目的:探讨脑胶质瘤相关癌基因1(glioma-associated oncogene1,GLI1)对人胰腺癌PANC-1细胞增殖的影响。方法:构建靶向GLI1基因的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)慢病毒重组载体pLVTHM-GLI1-shRNA(以空载体pLVTHM-GFP为对照),经包装后感染胰腺癌PANC-1细胞,应用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法检测各组细胞中GLI1、bcl-2、bcl-xl和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA和蛋白的表达;CCK8(cell counting kit-8)法分析各组细胞的生长情况。结果:成功构建了稳定低表达GLI1的GLI1-shRNA-PANC-1细胞,与PANC-1细胞和GFP-PANC-1细胞比较,GLI1-shRNA-PANC-1细胞中GLI1mRNA和蛋白表达水平分别下调了(82.1±3.2)和(76.7±2.2)(P<0.01),bcl-2mRNA和蛋白表达分别下调了(49.7±5.4)、(43.5±9.4)(P<0.01);而blc-xl和PCNAmRNA和蛋白表达水平无明显变化。GLI1-shRNA-PANC-1细胞的增殖抑制率明显高于GFP-PANC-1、PANC-1细胞(P<0.05)。结论:干扰GLI1基因的表达可抑制人胰腺癌PANC-1细胞的增殖,其机制可能与下调bcl-2的表达有关。

脑胶质瘤相关癌基因-1及CD105在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨脑胶质瘤相关癌基因-1（Gli1）和CD105标记的微血管密度（MVD）与胰腺癌生物学行为的关系.方法 采用免疫组织化学方法观察36例胰腺癌组织和19例癌旁组织中GLI1和CD105标记的MVD表达.结果 Gli1在胰腺癌组织中表达率明显高于癌旁组织（52.78％比21.05％,P＜0.05）,CD105标记的MVD在胰腺癌组织的表达强度为39.99±7.88,明显高于在癌旁组织的表达强度（16.50±2.16）,两者差异有统计学意义（P＜0.01）;Gli1表达水平与胰腺癌肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移明显相关（P＜0.05）,CD105标记的MVD表达强度与胰腺癌TNM分期、淋巴结转移明显相关（P＜0.05）.结论 联合检测Gli1和CD105有助于评估胰腺癌的侵袭、转移及预后.

信号传导及转录活化因子3和脑胶质瘤相关癌基因1在大肠癌组织中表达及其临床意义

目的 探讨信号传导及转录活化因子3（STAT3）和脑胶质瘤相关癌基因1（Gli1）在大肠癌组织中的表达水平及临床意义.方法 原发性大肠癌患者69例,采用免疫组织化学法检测STAT3和Gli1在大肠癌组织及相应癌旁组织中的表达水平,分析STAT3和Gli1的表达水平与大肠癌临床病理学之间的关系.结果 STAT3在大肠癌组织中表达率明显高于癌旁组织（60.87％比11.59％,P＜0.01）,Gli1在大肠癌组织中表达率明显高于癌旁组织（75.36％比37.68％,P＜0.01）;STAT3表达水平与大肠癌组织学分级、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移明显相关（P＜0.05）,Gli1表达水平与大肠癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移明显相关（P＜0.05）.结论 联合检测STAT3和Gli1有助于评价大肠癌的恶性程度,判断其转移潜能.

Gli1在胰腺癌细胞侵袭和迁移中的作用

目的 探讨脑胶质瘤相关癌基因-1（Gli1）在胰腺癌细胞侵袭和迁移中的作用及可能机制.方法 体外培养胰腺癌细胞株Capan-2,通过RNA干扰技术分别干扰Capan-2细胞中的Gli1、小鼠双微体基因2（MDM2）和p53基因的表达.应用实时定量（qRT）-PCR试验进行干扰效应的验证;通过细胞侵袭和迁移实验观察干扰Capan-2细胞中Gli1、MDM2和p53表达对胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响.同时通过Western blot法检测干扰Gli1表达后,金属基质蛋白酶-9（MMP-9）、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（pERK）及磷酸化蛋白激酶B（pAKT）在Capan-2细胞中表达的变化.采用配对t检验对实验数据进行统计学分析.结果 qRT-PCR试验结果显示,干扰Gli1、MDM2、p53表达后,其mRNA水平较仅加脂质体组和对照组相比分别下调了70.5％和74.5％、61.8％和65.3％、73.8％和78.2％.在p53野生型Capan-2细胞中,干扰Gli1表达后胰腺癌细胞侵袭（94±8）和迁移能力（143±8）较对照组（150 ±7,190±10）均明显减弱（=6.584,P=0.022;t=8.266,P=0.014）;干扰MDM2表达亦降低了细胞的侵袭（实验组：85±12,对照组：138 ±6）和迁移能力（实验组：127 ±9,对照组：180±10）（t=5.097,P=0.036;t =4.860,P=0.040）.然而,体外干扰p53基因表达后,Capan-2细胞的侵袭（153 ±11）和迁移能力（209±13）较干扰前（106 ±7,164±8）却明显增强（t=4.669,P=0.043;t=4.990,P=0.038）.Western blot法检测结果显示,体外干扰Gli1表达后MMP-9蛋白表达水平下调,但pERK和pAKT蛋白水平表达无改变.结论 Gli1可能通过调控MDM2、p53及MMP-9的表达水平促进胰腺癌细胞的侵袭和迁移.