脑脊液药理实验条件规范化初探——当归芍药散精简方的神经保护作用

目的:通过观察当归芍药散精简方(FBD)含药脑脊液对过氧化氢所致PC12细胞损伤模型的保护作用,对脑脊液药理实验条件规范化进行初步探讨。方法:以MTT法观察不同实验条件下(给药方案、添加量、处理方法、批次及保存时间),FBD大鼠含药脑脊液对过氧化氢损伤的PC12细胞存活率的影响。结果:过氧化氢损伤的PC12细胞存活率随FBD含药脑脊液添加量增加而提高;相同添加量多次给药(2次/d×3.5 d)含药脑脊液的保护率均高于单次给药的含药脑脊液;未处理含药脑脊液与经56℃、乙醇、丙酮处理含药脑脊液对PC12细胞均有显著的保护作用(P<0.01),各组保护率无明显差异;同时观察到不同批次大鼠及不同保存时间的含药脑脊液对受损PC12细胞均有显著保护作用,但随保存时间的延长,其保护率下降。结论:含药脑脊液的制备可采用连续多次给药方案,无需灭活处理,一般以体外添加终体积的10%,-20℃冻存不超过30 d为宜。

中药复方物质基础研究——脑脊液药理学的应用探微

本文从中药复方物质基础研究的角度,概括了中药复方研究的现状及脑脊液药理学在研究中的应用,着重分析了应用中的不足,探索性提出了脑脊液药理学的应用前景及发展思路,以期更加合理应用。

中药脑脊液药理学方法研究进展

随着中医药研究的不断深入以及心脑血管疾病防治的需要,反映体内真实血药浓度下的中药作用物质基础和作用机制研究,已成为药理方法学研究的重点。血清药理学方法的广泛应用,已为中药体外研究提供了一种科学方法;但存在中药复方应用于离体实验时,体内外环境不完全一致等不足。中药脑脊液药理学方法的提出,初步解决了这一难点,为中医药研究中选择适宜的细胞离体培养体系提供了新途径,更为中药复方作用的物质基础和作用机制研究提供了新思路。

中药脑脊液药理学方法研究的概况

体外实验方法对于药理学研究至关重要,特别是在细胞、亚细胞、分子等水平进行深入的机制研究时,但此方法对于中药而言,存在许多问题。中药血清药理学作为一种新的体外试验方法,其实验结果被证明更加可信,与整体实验的相关性更好。随着中医药研究的不断深入以及中枢神经系统疾病防治的需要,中药复方有效成分是否能通过血脑屏障并产生效用已成为亟待解决的问题。中药脑脊液药理学方法的提出不仅为我们提供了一种科学的方法,更为中药复方作用的物质基础和作用机制研究带来了新思路。

中药脑脊液药理学研究及应用进展

中药脑脊液药理学作为研究治疗中枢神经系统疾病药物的药理作用的体外研究方法,越来越受到关注。但此方法在实际应用中任然存在许多问题,该文从中药脑脊液药理学研究的背景、研究的现状及研究过程中影响因素进行综述,以期为今后的相关研究提供借鉴与思路。

中药脑脊液药理学应用研究进展

脑脊液药理学自2000年被提出后在神经系统疾病的科研中被较为广泛的应用,但关于脑脊液的来源、采集方法、实验动物给药时间及频次以及脑脊液的处理储存等还没有形成规范,通过对近10年脑脊液应用情况进行综述,提炼关于脑脊液使用的方法,将对脑脊液药理学更合理的应用神经科学研究起到积极作用。

中药脑脊液药理学方法在中药复方研究中的应用

随着中医药现代化研究的逐渐深入，中药复方药理研究取得了长足进展，因中药所含成分复杂，其药理作用具有多层次、多途径、多靶点、多功效的特点，且在研究过程中干扰因素较多，因此中药复方研究难度较大。中药脑脊液药理学方法的提出和应用，为中医药研究中选择合适的细胞离体培养体系提供了新途径，为中药复方作用的物质基础和作用机制研究提供了新思路。现对近年来中药脑脊液药理学方法在中药复方研究中的应用作简要综述。

Beagle犬含药脑脊液干预急性脑出血体外细胞模型时间窗的实验研究

目的:探讨中药复方DSQ-03 Beagle犬含药脑脊液对体外培养的皮层神经元凝血酶合并缺血缺氧损伤的保护作用,并探讨其作用的时间窗,为进一步开展临床研究提供依据。方法:(1)采用脑脊液药理学和原代神经细胞培养的方法,用Beagle犬的含DSQ-03脑脊液(CSF)体外培养SD大鼠脑皮层的神经细胞。(2)用凝血酶合并缺血缺氧损伤神经细胞,建立急性脑出血(AICH)的体外细胞模型(TIH)。(3)在TIH损伤后6,12,24,72 h,用MTT法检测神经细胞线粒体活力,并测定细胞外液LDH漏出率。结果:AICH后,神经细胞内线粒体活力、LDH漏出和神经细胞凋亡在0~72 h都有动态变化,Beagle犬含药脑脊液干预ICH的时间窗有:增加细胞活力在6 h内效果最好,0~72之内都有作用;减少LDH漏出方面,48~72 h的效果最好,0~72 h都有作用。结论:(1)凝血酶合并缺血缺氧损伤的体外培养神经细胞模型(TIH)是研究急性脑出血较好的细胞模型。它更加符合ICH后对神经细胞损伤的病理生理机制。(2)DSQ-03是一个神经细胞保护剂,可以增加细胞线粒体活力,抑制LDH漏出。(3)DSQ-03干预AICH的时间窗为0~72 h。

补阳还五汤含药脑脊液对受损皮质神经细胞应激反应的调节作用

目的:观察补阳还五汤含药脑脊液对受损皮质神经细胞应激反应的调节作用。方法:在离体培养5天的大鼠皮质神经细胞中分别加入不同的含药脑脊液,37℃孵育24h,然后加入10μmol/L谷氨酸继续孵育60min。通过MTT法检测细胞生存活力;RT-PCR法检测即早基因的表达;扫描电镜观察细胞形态变化。结果:补阳还五汤含药脑脊液能很好的提高细胞生存活力,抑制即早基因的表达。结论:中药复方补阳还五汤能对抗皮质神经细胞的谷氨酸损伤,其机制可能通过抑制即早基因c-fos、c-jun的表达,防止皮质神经细胞凋亡。

尼莫地平含药脑脊液对体外PC12细胞损伤的保护作用

目的观察尼莫地平含药脑脊液对多种PC12细胞损伤模型的保护作用,对脑脊液药理实验条件的规范化及其应用进行探讨。方法采用噻唑蓝(MTT)法,观察不同取样时间、不同添加量、不同灭活方法处理的尼莫地平大鼠含药脑脊液对氯化钾损伤的PC12细胞存活力的影响,确定尼莫地平大鼠含药脑脊液的制备条件。并进一步考察该条件制备的尼莫地平大鼠含药脑脊液对过氧化氢、连二亚硫酸钠及谷氨酸钠等因素引起的PC12细胞损伤的保护作用。结果尼莫地平含药脑脊液对氯化钾致PC12细胞损伤的保护率随添加量的增加而提高;相同添加量多次给药(2次·d-1×3.5d)含药脑脊液的保护率均高于单次给药的含药脑脊液;热灭活、乙醇灭活及丙酮灭活含药脑脊液对PC12细胞均有显著保护作用,其保护率与未灭活含药脑脊液无显著性差异;根据确定条件制备的尼莫地平大鼠含药脑脊液对过氧化氢、连二亚硫酸钠及谷氨酸钠等因素损伤的PC12细胞均具有显著的保护作用。结论尼莫地平含药脑脊液的制备以连续多次给药方案,无需灭活处理,体外添加终体积的10%为宜;对氯化钾等多种原因引起的PC12细胞损伤均具有明显保护作用。

MPP^+对PC12细胞中细胞色素c和caspase-3表达的影响及镇肝熄风汤的调控作用

目的:研究甲基-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)对PC12细胞细胞色素C(Cytc)和caspase-3蛋白表达的影响及镇肝熄风汤载药脑脊液的干预作用。方法:不同浓度的镇肝熄风汤载药脑脊液预处理体外培养的PC12细胞后30min后,加入250μmol/L MPP+共孵育24h。采用实时定量PCR检测PC12细胞caspase-3mRNA的表达,采用ELISA法检测PC12细胞细胞浆中Cyt c浓度变化。结果:MPP+诱导24h,PC12细胞中caspase-3mRNA表达明显增多,细胞浆中Cyt c浓度也明显升高,而镇肝熄风汤载药脑脊液能剂量依赖性地抑制MPP+诱导的caspase-3mRNA表达增多和细胞浆中Cyt c浓度升高。结论:MPP+诱导PC12细胞caspase-3mRNA表达和Cyt c浓度的增加,镇肝熄风汤其增加具有抑制作用。

乳黄片对高氨环境中的星形胶质细胞的活力及GFAP表达的影响

目的:探讨乳黄片脑脊液药对高氨环境中星形胶质细胞CRL-2541活力和神经胶质纤维酸性蛋白GFAP表达的影响。方法:运用中药脑脊液药理学方法把体外培养成熟的CRL-2541细胞分为空白对照组、氨损伤组、正常脑脊液组、中药乳黄片脑脊液组。除空白对照组外的各组加入氯化铵(终浓度为5Mm),作用48H后,MTT法检测CRL-2541细胞活力,免疫细胞染色法检测GFAP的表达情况。结果:MTT法检测CRL-2541细胞活力表达情况,中药脑脊液吸光度0.204±0.008,氨损伤组吸光度0.125±0.003,空白脑脊液0.178±0.004。GFAP的表达情况:中药脑脊液组0.174±0.020,氨损伤组0.122±0.012,空白脑脊液组0.150±0.015。结论:MTT法检测CRL-2541活力及GFAP的表达情况,中药脑脊液组比氨损伤组、空白脑脊液组的吸光度提高,表明乳黄片脑脊液能保护高氨环境中受损细胞CRL-2541。