iTRAQ技术在急性脊髓损伤脑脊液蛋白质组学研究中的应用

目的急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)是一种严重的神经系统创伤。研究旨在建立ASCI后脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)差异蛋白质谱,从分子水平研究ASCI后继发性损伤的机制。方法运用SD大鼠建立ASCI模型,损伤后取CSF用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术鉴定大鼠ASCI后CSF的差异蛋白质。结果共鉴定到722个蛋白,其中差异表达的蛋白107个,包括63个下调的差异蛋白和44个上调的差异蛋白。其中相关炎症反应的差异蛋白13个、相关急性炎症反应的差异蛋白5个、相关慢性炎症反应的差异蛋白2个、调节炎症反应的差异蛋白7个、积极调节炎症反应的差异蛋白2个、消极调节炎症反应的差异蛋白2个。结论鉴定了ASCI后脑脊液差异蛋白及相关炎症因子,为ASCI后继发性损伤的机制和过程的动态监测及相关治疗靶点提供理论依据。

多发性硬化患者脑脊液蛋白质组学的研究

目的:筛选并鉴定多发性硬化患者脑脊液特异蛋白,探讨多发性硬化的发病机制。方法:以实验室确诊型和临床怀疑型多发性硬化患者的脑脊液为研究对象,采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离总蛋白质,凝胶经银染色后,Image Master 2D Platinum 5.0图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:从双向电泳图谱上获得蛋白质斑点,共鉴定出35种蛋白,并且发现其中大多是在正常的脑脊液中存在的,其中有6种是在多发性硬化双向凝胶谱库中已有的,有4种是本实验所发现的。结论:本研究识别并鉴定了4种多发性硬化患者脑脊液特异蛋白,但这4种蛋白质与多发性硬化的关系有待进一步研究。

双向凝胶电泳脑脊液蛋白质提取方法的比较

目的对3种常用的双向凝胶电泳脑脊液蛋白质提取方法进行比较,优选脑脊液蛋白质提取方法。方法收集新诊断尚未经药物治疗的16例帕金森病患者和7例头痛患者的脑脊液,分别以3种不同的方法提取脑脊液中的蛋白质。①透析法:用PluseOne微透析试剂盒处理脑脊液样品。②丙酮沉淀法:以冷丙酮溶液处理脑脊液样品,丙酮的终浓度为80%。③三氯醋酸(TCA)/丙酮沉淀法:以4倍体积的10%TCA/丙酮溶液处理脑脊液样品,TCA的终浓度为8%,丙酮的终浓度为80%。取沉淀物进行双向凝胶电泳,用银染法对电泳后的凝胶进行染色,比较经3种不同方法提取的脑脊液蛋白质的双向凝胶电泳图谱。结果经透析法处理样品的电泳图谱显示的蛋白点较清晰、较圆,条纹较少,但所见几乎都是高丰度蛋白,低丰度蛋白很难显现;经丙酮沉淀法处理样品的电泳图谱显示横竖条纹均较多,大部分蛋白堆积在凝胶的上部,下面的点也显示不清晰,蛋白点出现横向漂移;经TCA/丙酮沉淀法处理样品的电泳图谱显示横条纹相对较少,低丰度蛋白能较清晰显现,样品中所含高丰度蛋白明显少于以上两种方法处理的样品。结论以TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质进行双向凝胶电泳时聚焦效果较好,而且同时去除了大部分白蛋白,使低丰度蛋白能很好地显现出来,优于丙酮沉淀法和透析法。

急性脑梗死患者脑脊液蛋白质组学分析

目的寻找急性脑梗死患者和对照组脑脊液差异蛋白,从分子水平探讨脑梗死患者脑脊液蛋白整体变化规律。方法取脑梗死患者及对照组脑脊液,用三氯乙酸(TCA)沉淀后,加入裂解液使蛋白质裂解,离心后取上清液上样,行双向电泳(2-DE),染色脱色后,分析所得蛋白质点。结果对照组和急性脑梗死患者脑脊液2-DE图谱上均可得到近200个蛋白质点,其中6个蛋白质在急性脑梗死患者脑脊液中含量增加,3个蛋白质在急性脑梗死患者脑脊液中含量减少,11个蛋白质点为急性脑梗死患者脑脊液特有。结论对照组和急性脑梗死患者脑脊液的2-DE图谱存在明显差别,此发现可为研究急性脑梗死病理机制提供线索。

脑脊髓液β_2-微球蛋白类测定的临床意义

用放射免疫法测定53例小儿中枢神经系统疾病的脑脊髓液中β_2-微球蛋白类(以下简称β_2-M)。结果结核性脑膜炎(结脑)组和化脓性脑膜炎(化脑)组的测定值均明显高于正常对照级(P<0.001)。病毒性脑炎(病脑)组28例中,仅有7例高于对照组。病脑、中毒性脑病、癫痫及格林巴利综合征组均与对照组无明显差异(P>0.05)。提示检测脑脊髓液β_2-M对鉴别中枢神经系统感染性和非感染性疾病以及结脑、化脑和病脑的鉴别诊断有一定的临床意义。

三种脑脊液蛋白质测定方法比较

有文献报道用尿液分析仪法和双缩脲比色法测定脑脊液蛋白质。本组于2003年1月～2006年8月对30例脑脊液标本用双缩脲比色法、磺基水杨酸-硫酸钠比浊法、尿液分析仪法测定蛋白质，发现尿液分析法测定脑脊液蛋白质与化学法（双缩脲比色法、磺基水杨酸比浊法）存在很大差异，而两种化学方法无明显差异。

急性脊髓损伤模型大鼠蛋白质组学研究：iTRAQ技术的验证

背景:同位素标记相对和绝对定量(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)质谱分析技术依据串联质谱中信号离子表达质荷比峰值的不同来研究相关对应蛋白质的信息。目的:建立急性脊髓损大鼠模型,观察其脑脊液差异蛋白谱,从微观分子水平研究急性脊髓损伤后继发性损伤的机制及有效治疗方法。方法:建立SD大鼠急性脊髓损伤模型,取脑脊液应用i TRAQ技术鉴定SD大鼠急性脊髓损伤后脑脊液的差异蛋白质。结果与结论:共鉴定蛋白数722个,差异表达蛋白107个:下调的差异蛋白有63个,上调的差异蛋白数是44个。其中相关神经再生的差异蛋白19个:上调14个,下调5个;调节神经再生的差异蛋白7个。实验中检测到的多种差异蛋白及表达明显的神经再生因子可能作为急性脊髓损伤的生物标记物或可能作为临床管理监测急性脊髓损伤的损伤进程、靶向治疗及评估疗效的强有力证据。

脑脊液生成、循环代谢及睡眠状态下冲刷作用的研究进展

近年来,随着研究技术和方法的创新,人们对脑脊液的产生、循环代谢有了进一步的认识,这使得脑脊液的经典理论受到了挑战,其中脑膜淋巴管学说及类淋巴系统学说从不同方面给予新的诠释。而睡眠状态下脑脊液的冲刷作用将脑脊液与睡眠联系起来,该作用有助于清除脑内代谢废物,或可为一些疾病的治疗提供新的思路。本文就脑脊液生成、循环代谢的相关研究进展,以及脑脊液在睡眠状态下的冲刷作用进行一综述。

神经蛋白质组学双向电泳技术体系的建立

目的:建立神经蛋白质组学双向电泳技术体系。方法:利用双向电泳技术分别以人脑脊液、人和鼠脑组织为研究对象,通过离心等手段提取蛋白,行双向电泳,硝酸银染色,进行图谱分析。结果:从双向电泳图谱上获得蛋白质斑点:正常人脑脊液359个,多发性硬化人脑脊液397个,正常人脑组织480个,正常鼠脑组织524个。经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。结论:从蛋白质水平探讨多发性硬化症、脑出血等疾病的发病机制,对寻找有效的药物靶点具有重要意义,同时为神经系统其它疾病的研究提供了切实可行的神经蛋白质组学研究技术体系。

脑瘫患儿脑脊液氨基酸类神经递质的变化

目的 :研究痉挛型脑瘫患儿肌痉挛形成的机制。方法 :采用丹酰氯 -聚酰胺薄膜层析法 ,测定 4 5例痉挛型脑瘫患儿和 30例非神经系统疾病儿童脑脊液中兴奋性及抑制性氨基酸水平。结果 :脑瘫组脑脊液中 γ-氨基丁酸明显低于对照组 ,谷氨酸、天冬氨酸明显高于对照组 ,甘氨酸与对照组比较差异无显著性 ;谷氨酸的水平与患者肌张力呈等级正相关 (rs=0 . 6 4 2 ,P<0 .0 5 )。结论 :兴奋性突触功能上升 ,突触前抑制和突触后抑制下降 。

阿尔茨海默病和帕金森痴呆患者脑脊液中tau蛋白和β淀粉样蛋白水平的研究

目的探讨在阿尔茨海默病(AD)和帕金森痴呆(PDD)患者脑脊液(CSF)中tau蛋白和β淀粉样蛋白(Aβ1-42)的水平及临床意义。方法同时将符合美国国立神经病、语言障碍和脑卒中研究所-老年性痴呆及相关性疾病协会的“很可能AD”标准的22例AD组患者与20例PDD组患者和21例性别、年龄相匹配的无中枢神经系统疾患、无痴呆表现的心理疾病患者作为对照组(NC组)进行研究。结果3组CSF中tau蛋白平均浓度比较,AD组明显高于NC组(P<0.05);AD组与PDD组差异无显著性意义(P>0.05)。3组CSF中A1β-42平均浓度比较,AD组明显低于NC组(P<0.05),PDD组与NC组差异无显著性意义(P>0.05)。结论AD患者CSF中tau蛋白和Aβ1-42浓度变化是其重要的实验室表现,可以作为AD的辅助诊断指标和与PDD早期鉴别诊断的可能生物学指标。

脑脊液降钙素原和C-反应蛋白检测对颅脑疾病诊断价值

目的研究脑脊液降钙素原以及C-反应蛋白检测在颅脑疾病中应用价值。方法收集细菌性脑膜炎(32例)、结核性脑膜炎(33例)、病毒性脑炎(38例)以及脑出血(41例)患者脑脊液,应用罗氏E411电化学发光分析仪测定降钙素原浓度,日立7600生化分析仪测定C-反应蛋白浓度,对结果进行统计学分析。结果病毒性脑炎组、细菌性脑膜炎组、结核性脑膜炎组、脑出血组4组降钙素原相互间比较差异无统计学意义(P>0.05)。C-反应蛋白浓度脑出血组比病毒性脑炎组、细菌性脑膜炎组、结核性脑膜炎组高(P<0.05),细菌性脑膜炎组比病毒性脑炎组、结核性脑膜炎组高(P<0.05)。结论颅脑疾病脑脊液检测降钙素原、C-反应蛋白虽有一定价值,但不应作为常规生化指标检查。尤其降钙素原,其检测成本高,其在常见颅脑疾病患者脑脊液中含量比较并无统计学意义。

AQP4-IgG阳性视神经脊髓炎谱系疾病的脑脊液细胞学特点

目的探讨水通道蛋白4抗体(AQP4-IgG)阳性的视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorders,NMOSD)的脑脊液细胞学特点。方法回顾性收集AQP4-IgG阳性的NMOSD患者的脑脊液细胞学、脑脊液常规、生化及寡克隆区带结果,并分析其特点。结果共收集237例AQP4-IgG阳性的NMOSD患者的脑脊液细胞学资料。女∶男=7.8∶1。120例(50.6%)患者脑脊液细胞学可见炎性反应,炎性反应程度为轻、中、重度者分别为63、43、14例。95例为淋巴细胞性炎性反应,20例为淋巴细胞与中性粒细胞性炎性反应,4例为淋巴细胞与嗜酸性粒细胞性炎性反应,1例为淋巴细胞、中性粒细胞与嗜酸性粒细胞性炎性反应。71例(30.0%)患者可见激活淋巴细胞,11例(4.6%)可见激活单核细胞,15例(6.3%)可见浆细胞。176例患者行寡克隆区带检测,其中脑脊液特异性寡克隆区带阳性47例(26.7%)。结论达1/2的AQP4-IgG阳性NMOSD患者脑脊液细胞学可见炎性反应,以淋巴细胞性炎性反应为主,也可见中性粒细胞与嗜酸性粒细胞参与;部分患者脑脊液细胞学可见激活淋巴细胞、激活单核细胞和浆细胞;AQP4-IgG阳性NMOSD患者脑脊液特异性寡克隆区带阳性率较多发性硬化低。上述脑脊液特点有助于NMOSD的诊断和鉴别。

小儿脑炎脑脊液C反应蛋白及β_2-微球蛋白的变化及临床意义

目的观察小儿脑炎患者脑脊液C反应蛋白(CRP)和β2-微球蛋白(β2-MG)的含量变化并探讨其意义。方法分别应用免疫比浊法测定化脓性脑炎18例、结核性脑炎14例、病毒性脑炎26例、对照组20例脑脊液中CRP、β2-MG的含量。结果 (1)化脓性脑炎、结核性脑炎患儿脑脊液中CRP检测值均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),病毒性脑炎组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)3组脑炎患儿脑脊液中β2-MG含量均高于对照组,其中化脓性脑炎高于结核性脑炎和病毒性脑炎组,且与病毒性脑炎组差异有统计学意义(P<0.05),结核性脑炎与病毒性脑炎组比较无明显差异。结论联合检测脑脊液中CRP及β2-MG含量变化,有助于对中枢神经系统感染的鉴别诊断。

脑脊液磷酸化tau蛋白的检测对阿尔茨海默病的诊断价值

目的通过对阿尔茨海默病(AD)患者脑脊液磷酸化tau蛋白检测的研究,探讨其对AD的诊断价值。方法采用ELISA法检测11例AD患者(AD组)、13例血管性痴呆患者(血管性痴呆组)及29例非神经系统疾病患者(正常对照组)的脑脊液磷酸化tau蛋白。结果与血管性痴呆组和正常对照组比较,AD组患者脑脊液中磷酸化tau蛋白含量明显增高(P<0.05)。血管性痴呆组患者脑脊液中磷酸化tau蛋白水平与正常对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论检测脑脊液磷酸化tau蛋白含量可作为AD诊断的辅助指标。

代谢性酸中毒犬脑脊液［HCO－_3］与Pco_2的关系

作者旨在探讨代谢性酸中毒时脑脊液（ＣＳＦ）［ＨＣＯ－３］与ＰＣＯ２的相互关系。两组代谢性酸中毒模型均由静脉内输入０．２ｍｏｌ／ＬＨＣＩ产生，［ＨＣＯ－３］ａ１ｈ内下降到（１２２）ｍｍｏｌ／Ｌ。实验６ｈ时ＣＳＦ［ＨＣＯ－３］：１组（正常碳酸血性代酸）下降了１．６ｍｍｏｌ／Ｌ；组（低碳酸血性代酸）下降了７．０ｍｍｏｌ／Ｌ．ＣＳＦ［ＨＣＯ－３］与ＣＳＦＰｃｏ２，显著正相关（ｒ＝０．８３４，Ｐ＜０．０ｌ）．结果说明代谢性酸中毒时ＣＳＦ［ＨＣＯ－３］并不受［ＨＣＯ－３］ａ的明显影响，主要取决于ＣＳＦＰｃｏ２的变化，其调节机制与脉络丛上皮细胞内ＣＯ２的水化作用和ＣＡ活性有关。

脑脊液特种蛋白测定的临床意义

目的 探讨脑脊液特种蛋白 (Ig ,ALB ,α2 -MG)在各种中枢神经疾病的变化。方法 收集 5 7例中枢神经系统疾病脑脊液标本 ,用美国BN10 0全自动特种蛋白分析仪进行测定。结果 (1) 3种急性中枢神经感染性疾病 (化脑、结脑、病脑 )中 ,结脑、化脑各项指标均显著增高 ,结脑IgG增高最显著 ,化脑IgG增高最显著 ,病脑各项指标正常或轻度增高 ,IgM轻度增高。 (2 )多发性硬化组Ig升高以IgG最显著。 (3)脑梗死各项指标显著增高 ;脑瘤α2 -MG正常 ,其余指标升高。结论 (1)脑脊液总蛋白 (TP)与特种蛋白配套检测比传统TP、潘氏试验更详细反映中枢神经系统病变情况 ;(2 )Ig是区分 3种急性脑膜炎的重要指标。 (3)ALB、α2 -MG是反映血脑屏障通透性改变或损害的良好指标。 (4)TP、ALB同时测定可了解蛋白质商的变化 。

颅脑手术创伤对脑脊液兴奋性氨基酸和甘氨酸代谢的影响

目的 观察颅脑手术创伤对脑脊液兴奋性氨基酸 (EAA )和甘氨酸 (Gly)代谢的影响 ,为手术麻醉过程中如何减少 EAA和 Gly提供理论依据。 方法 于腰椎 3～ 4间隙行蛛网膜下腔穿刺置硬膜外导管长度约 3cm ,分别于麻醉 (BA)、手术结束缝皮时 (PA )采集脑脊液标本 2 m L。采用高效液相色谱仪柱前衍生色谱法 (HPL C)测定颅脑手术前后、脑实质和非脑实质手术、不同手术时程 3种条件下脑脊液中 EAA(谷氨酸 (Glu)、天冬氨酸 (Asp)和甘氨酸 (Gly)水平变化。 结果 EAA在颅脑手术后明显升高 (P<0 .0 5 ) ;对脑组织有直接侵袭损伤类手术于术后 EAA (Glu、Asp)和甘氨酸 (Gly)显著升高 ,且手术时程长者 (>2 h)脑脊液 EAA和 Gly升高幅度更大。 结论 脑脊液 EAA和 Gly水平显著增高的主要原因是直接侵袭脑组织的脑内手术 ,且升高幅度与手术时程长短有关 。