脑性瘫痪儿童脑脊液内外泌体的蛋白质组学分析

背景:脑性瘫痪(简称脑瘫)是一种广泛的神经损伤性疾病,其病因在很大程度上仍不明确,用于该病分类或监测的分子指标也尚未见报道。目的:分离培养儿童脑瘫患者脑脊液来源的外泌体,使用无标记定量质谱蛋白质组学方法分析其外泌体的蛋白质组表达谱特征,为儿童脑瘫群体的分型、诊断和预后评估等提供分子生物学依据。方法:选择在北京中医药大学东直门医院进行选择性脊神经后根切断术的脑瘫患者,其中痉挛型脑瘫患者4例,混合型脑瘫患者3例,每位患者抽取3 mL脑脊液,通过超速离心法分离儿童脑瘫患者脑脊液中的外泌体,并使用纳米颗粒跟踪分析、透射电镜和蛋白质质谱分析对外泌体进行表征。结果与结论:①透射电镜观察显示,儿童脑瘫患者脑脊液内存在外泌体形态的囊泡。Western blot检测到外泌体标志蛋白Syntenin-1和Flotillin-1的表达;②纳米颗粒跟踪分析显示囊泡的大小和浓度符合外泌体的异质性特征。对痉挛性脑瘫、混合性脑瘫的脑脊液外泌体进行蛋白质谱分析,共鉴定出551个蛋白;③生物信息学分析显示,鉴定出的脑脊液外泌体蛋白与负责外泌体功能和神经发育过程的分子信号机制相关,这些蛋白主要富集于额叶皮质、运动皮质等脑部区域,与脑瘫病理密切相关。研究结果提示儿童脑瘫患者脑脊液内存在外泌体,外泌体蛋白可能与脑瘫分子病理机制相关。

iTRAQ技术在急性脊髓损伤脑脊液蛋白质组学研究中的应用

目的急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)是一种严重的神经系统创伤。研究旨在建立ASCI后脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)差异蛋白质谱,从分子水平研究ASCI后继发性损伤的机制。方法运用SD大鼠建立ASCI模型,损伤后取CSF用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术鉴定大鼠ASCI后CSF的差异蛋白质。结果共鉴定到722个蛋白,其中差异表达的蛋白107个,包括63个下调的差异蛋白和44个上调的差异蛋白。其中相关炎症反应的差异蛋白13个、相关急性炎症反应的差异蛋白5个、相关慢性炎症反应的差异蛋白2个、调节炎症反应的差异蛋白7个、积极调节炎症反应的差异蛋白2个、消极调节炎症反应的差异蛋白2个。结论鉴定了ASCI后脑脊液差异蛋白及相关炎症因子,为ASCI后继发性损伤的机制和过程的动态监测及相关治疗靶点提供理论依据。

急性脑梗死患者脑脊液蛋白质组学分析

目的寻找急性脑梗死患者和对照组脑脊液差异蛋白,从分子水平探讨脑梗死患者脑脊液蛋白整体变化规律。方法取脑梗死患者及对照组脑脊液,用三氯乙酸(TCA)沉淀后,加入裂解液使蛋白质裂解,离心后取上清液上样,行双向电泳(2-DE),染色脱色后,分析所得蛋白质点。结果对照组和急性脑梗死患者脑脊液2-DE图谱上均可得到近200个蛋白质点,其中6个蛋白质在急性脑梗死患者脑脊液中含量增加,3个蛋白质在急性脑梗死患者脑脊液中含量减少,11个蛋白质点为急性脑梗死患者脑脊液特有。结论对照组和急性脑梗死患者脑脊液的2-DE图谱存在明显差别,此发现可为研究急性脑梗死病理机制提供线索。

脑脊液蛋白质分析的临床意义

脑脊液充满于脑和脊髓的生理腔隙中 ,可视为中枢神经系统的组织液。随着人们对神经系统疾病的不断发现与认识 ,相应地对这些疾病的有价值的实验室诊断的研究也越来越多。

尿液分析仪在脑脊液蛋白质分析中的临床应用

目的探索一种快速、实用的检测脑脊液蛋白质的方法。方法用尿液分析仪对脑脊液蛋白质进行分析,并用生化分析仪进行微量总蛋白检测,通过对比两种仪器检测结果的符合程度,评价尿液分析仪用于脑脊液蛋白质检测的可行性。结果两种方法分析蛋白质符合率达90%以上。结论尿液分析仪可用于脑脊液蛋白质定性或半定量分析,(++)以上为有临床意义。

用尿液分析仪和化学定量法测定脑脊液糖和蛋白质

目的探讨脑脊液糖和蛋白质的尿液分析仪测定和化学定量法的差异。方法用尿液分析仪和常规的化学定量法同时测定临床送检的65例脑脊液标本的糖和蛋白质。结果尿液分析仪测定脑脊液糖和蛋白质结果与常规化学定量法存在较大的差异。结论尿液分析仪的糖和蛋白质试纸只能用于尿液的过筛性试验 ,不能代替临床脑脊液的常规分析 ,否则会造成临床误诊。

多发性硬化患者脑脊液蛋白质组学的研究

目的:筛选并鉴定多发性硬化患者脑脊液特异蛋白,探讨多发性硬化的发病机制。方法:以实验室确诊型和临床怀疑型多发性硬化患者的脑脊液为研究对象,采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离总蛋白质,凝胶经银染色后,Image Master 2D Platinum 5.0图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果:从双向电泳图谱上获得蛋白质斑点,共鉴定出35种蛋白,并且发现其中大多是在正常的脑脊液中存在的,其中有6种是在多发性硬化双向凝胶谱库中已有的,有4种是本实验所发现的。结论:本研究识别并鉴定了4种多发性硬化患者脑脊液特异蛋白,但这4种蛋白质与多发性硬化的关系有待进一步研究。

尿液分析仪不能定量测定脑脊液糖和蛋白质的探讨

目前国内有报道用尿液分析仪对脑脊液标本进行糖和蛋白质指标的测定。我们用常规的化学定量法和尿液分析仪同时测定65例脑脊液标本中的糖和蛋白质,发现两法结果存在较大差异,现报道如下。材料和方法一、仪器:MA—4210型尿液分析仪,并使用其专用试纸条。二。

双向凝胶电泳脑脊液蛋白质提取方法的比较

目的对3种常用的双向凝胶电泳脑脊液蛋白质提取方法进行比较,优选脑脊液蛋白质提取方法。方法收集新诊断尚未经药物治疗的16例帕金森病患者和7例头痛患者的脑脊液,分别以3种不同的方法提取脑脊液中的蛋白质。①透析法:用PluseOne微透析试剂盒处理脑脊液样品。②丙酮沉淀法:以冷丙酮溶液处理脑脊液样品,丙酮的终浓度为80%。③三氯醋酸(TCA)/丙酮沉淀法:以4倍体积的10%TCA/丙酮溶液处理脑脊液样品,TCA的终浓度为8%,丙酮的终浓度为80%。取沉淀物进行双向凝胶电泳,用银染法对电泳后的凝胶进行染色,比较经3种不同方法提取的脑脊液蛋白质的双向凝胶电泳图谱。结果经透析法处理样品的电泳图谱显示的蛋白点较清晰、较圆,条纹较少,但所见几乎都是高丰度蛋白,低丰度蛋白很难显现;经丙酮沉淀法处理样品的电泳图谱显示横竖条纹均较多,大部分蛋白堆积在凝胶的上部,下面的点也显示不清晰,蛋白点出现横向漂移;经TCA/丙酮沉淀法处理样品的电泳图谱显示横条纹相对较少,低丰度蛋白能较清晰显现,样品中所含高丰度蛋白明显少于以上两种方法处理的样品。结论以TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质进行双向凝胶电泳时聚焦效果较好,而且同时去除了大部分白蛋白,使低丰度蛋白能很好地显现出来,优于丙酮沉淀法和透析法。

自动尿分析仪对脑脊液等样品中葡萄糖及蛋白质的定量探讨

笔者发现有个别实验室为图方便直接用尿自动分析仪来定量脑脊液、胸、腹水标本中的葡萄糖和蛋白质。为探讨这一做法是否可行,用以下方法作以试验。

脑脊髓液β_2-微球蛋白类测定的临床意义

用放射免疫法测定53例小儿中枢神经系统疾病的脑脊髓液中β_2-微球蛋白类(以下简称β_2-M)。结果结核性脑膜炎(结脑)组和化脓性脑膜炎(化脑)组的测定值均明显高于正常对照级(P<0.001)。病毒性脑炎(病脑)组28例中,仅有7例高于对照组。病脑、中毒性脑病、癫痫及格林巴利综合征组均与对照组无明显差异(P>0.05)。提示检测脑脊髓液β_2-M对鉴别中枢神经系统感染性和非感染性疾病以及结脑、化脑和病脑的鉴别诊断有一定的临床意义。

三种脑脊液蛋白质测定方法比较

有文献报道用尿液分析仪法和双缩脲比色法测定脑脊液蛋白质。本组于2003年1月～2006年8月对30例脑脊液标本用双缩脲比色法、磺基水杨酸-硫酸钠比浊法、尿液分析仪法测定蛋白质，发现尿液分析法测定脑脊液蛋白质与化学法（双缩脲比色法、磺基水杨酸比浊法）存在很大差异，而两种化学方法无明显差异。

脊髓神经外科中切口脑脊液漏23例临床分析

目的 :探讨脊髓手术后并发切口脑脊液漏的有效防治方法。方法 :14 8例脊髓手术并发脑脊液漏 2 3例 (占 15 5 4% ) ,治疗方法包括加压包扎、加强漏口缝合、腰穿置管持续引流以及手术修补等。结果 :2 3例病人均于3～ 15d脑脊液漏停止 ,随访 1～ 5个月无复发。结论 :提示术中严密缝合切口 ,术后出现脑脊液漏后采用加压包扎、漏口缝合 。

特殊类型脊髓灰质炎的临床与脑脊液分析

特殊类型脊髓灰质炎的临床与脑脊液分析聊城地区人民医院（２５２０００）聊城地区卫生学校侯秀荣李伊玲陆俊仪程风英林景珠脊髓灰质炎（下称脊灰）是由脊髓灰质炎病毒引起的急性传染病。因人体免疫机能差别较大，故感染后可出现瘫痪型、无瘫痪型及亚临床型；瘫痪型根据发...

疼痛患者脊髓脑脊液中强啡肽含量的分析

本文观察了疼痛患者脊髓脑脊液中强啡肽含量的变化。共收集３１例急性疼痛患者和１４例慢性疼痛患者的脊髓脑脊液，测定其中的强啡肽含量，与２７例无痛患者的结果进行比较，并结合被测者的性别、年龄、体重、血压、脉搏、体温等一般情况进行分析。结果表明，慢性痛患者脑脊液中强啡肽含量显著升高，而急性痛患者则略有降低。判别分析表明，急性痛患者的强啡肽含量及其他临床资料有明显的特点（判别准确率８２％）；慢性痛患者未见明显特征。作者认为，在更广泛地收集临床资料和检验结果的基础上，进一步研究不同病因的疼痛患者的临床特征。

急性脊髓损伤模型大鼠蛋白质组学研究：iTRAQ技术的验证

背景:同位素标记相对和绝对定量(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ)质谱分析技术依据串联质谱中信号离子表达质荷比峰值的不同来研究相关对应蛋白质的信息。目的:建立急性脊髓损大鼠模型,观察其脑脊液差异蛋白谱,从微观分子水平研究急性脊髓损伤后继发性损伤的机制及有效治疗方法。方法:建立SD大鼠急性脊髓损伤模型,取脑脊液应用i TRAQ技术鉴定SD大鼠急性脊髓损伤后脑脊液的差异蛋白质。结果与结论:共鉴定蛋白数722个,差异表达蛋白107个:下调的差异蛋白有63个,上调的差异蛋白数是44个。其中相关神经再生的差异蛋白19个:上调14个,下调5个;调节神经再生的差异蛋白7个。实验中检测到的多种差异蛋白及表达明显的神经再生因子可能作为急性脊髓损伤的生物标记物或可能作为临床管理监测急性脊髓损伤的损伤进程、靶向治疗及评估疗效的强有力证据。

双缩脲双波长自动分析法测定脑脊液总蛋白含量的临床应用

目的 在全自动分析仪上建立一种快速简便的脑脊液蛋白双缩脲测定法。方法 在日产 7170A全自动分析仪上 ,用双缩脲法测定脑脊液蛋白含量。结果 双缩脲法测定脑脊液蛋白准确度高 ,精密度好 ,与磺基水杨酸比浊法有很好的相关性 ,而且重现性优于比浊法 ,两法相比 ,P <0 .0 1,有较显著的差异。结论 在全自动分析仪上用双缩脲法测定脑脊液蛋白是一种简使、快速。