脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白结合肽序列的亲和筛选

应用噬菌体展示肽库技术,以重组的脑膜炎大肠杆菌致病蛋白IbeA作为靶分子,经过吸附-洗脱-扩增-再吸附的亲和筛选,随机挑选亲和力强的噬菌体克隆,进行ELISA、竞争抑制实验和序列测定。结果显示,经3轮淘选后,间接ELISA鉴定得到高亲和性结合IbeA蛋白的15个阳性克隆。竞争抑制实验结果表明,游离IbeA蛋白能竞争抑制噬菌体结合肽克隆与固相包被的IbeA蛋白的结合,其抑制作用随游离IbeA蛋白浓度的降低而减弱。测序结果得到5种阳性噬菌体克隆展示肽序列。上述结果提示以脑膜炎大肠杆菌IbeA蛋白为靶筛选所获得的噬菌体12肽克隆,具有特异性,其结合肽序列呈现相对保守性。建立的从噬菌体随机肽库筛选IbeA蛋白结合肽的方法具有方便、灵活和高效可行的特点。

利用转录物组数据挖掘致脑膜炎大肠杆菌候选非编码RNA

细菌非编码RNA(ncRNAs)是细菌生长和感染过程中至关重要的转录调控因子,对致病菌快速响应环境变化,调整自身基因表达抵御环境胁迫尤为重要。本研究通过对新生儿脑膜炎大肠杆菌K1 RS218的高通量转录物组测序,发现新生儿脑膜炎大肠杆菌K1 RS218(NMEC)表达丰富的ncRNAs。经生物信息学分析,在新生儿脑膜炎大肠杆菌K1 RS218中,共发现45个潜在的ncRNAs。通过与非致病性大肠杆菌K-12基因组比对,发现新生儿脑膜炎大肠杆菌K1 RS218基因组有300个大于100 bp的特异性序列。结合分析获得的非编码RNA,发现共有9个ncRNAs是新生儿脑膜炎大肠杆菌K1 RS218特异的。随机选择Nsr21,用小鼠尾静脉注射模型验证其作用,发现与野生型RS218对照组相比,注射Δnsr21的小鼠血液中的含菌量显著增加(P<0.01)。说明缺失Nsr21后,更有利于新生儿脑膜炎大肠杆菌K1 RS218在小鼠血液内生存和繁殖。通过qRT-PCR检测Nsr21表达发现,与体外培养环境相比,小鼠血液环境中Nsr21的表达显著下调(P<0.001)。说明新生儿脑膜炎大肠杆菌K1 RS218,是通过下调Nsr21的表达使其更有利于在血液中生存和繁殖。本研究提示,新生儿脑膜炎大肠杆菌K1 RS218基因组中包含大量的ncRNA,这些ncRNA可能与调控NMEC致病性相关。NMEC在感染血液过程中,通过下调Nsr21的表达使NMEC在血液中的繁殖能力增加。

清开灵注射液辅助治疗对兔大肠杆菌脑膜炎脑损伤保护作用及机制

目的探讨清开灵注射液对大肠杆菌脑膜炎脑损伤的保护作用机制。方法在采用氨苄青霉素治疗兔大肠杆菌脑膜炎模型的基础上,加用清开灵注射液辅助治疗。在注菌前、注菌后16、26h分别测定脑脊液中白细胞数、蛋白质含量和脑组织水、钠、钾、钙含量,并观察脑组织中基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。结果清开灵注射液辅助治疗后可明显减轻单纯抗生素治疗后细菌性脑膜炎模型兔脑脊液中白细胞数、蛋白质及脑组织水、钠、钙含量的增加和钾含量的下降,减弱脑组织MMP9的表达。结论清开灵注射液辅助治疗可防止单纯抗生素治疗细菌性脑膜炎时所引起的一过性炎症反应和脑损伤加重,其机制与钙拮抗作用和减弱脑组织中MMP9的表达有关。

清开灵和黄芩苷辅助治疗对兔大肠杆菌脑膜炎的保护作用的比较

目的探讨黄芩苷和清开灵对兔大肠杆菌脑膜炎的辅助治疗作用及比较。方法观察在氨苄青霉素治疗兔大肠杆菌脑膜炎模型的基础上,加用黄芩苷、清开灵辅助治疗。在注菌后14.0、14.5、15.0、16.0、17.0、18.0和19.0h观察颅内压和平均动脉压;在注菌后14.0和19.0h分别测定脑脊液中白细胞数、蛋白质、白细胞介素-1、肿瘤坏死因子-α和脑组织水含量,并与20%甘露醇相比较。结果黄芩苷、清开灵辅助治疗可降低ICP,缓解MAP的异常升高,并可明显减轻单纯抗生素治疗后大肠杆菌脑膜炎模型兔脑脊液中白细胞数、蛋白质含量、IL-1、TNF-α及脑组织水含量的升高。结论黄芩苷、清开灵辅助治疗大肠杆菌脑膜炎时降低ICP作用较甘露醇更持久,并可缓解MAP的异常升高,同时显著减轻单纯氨苄青霉素治疗早期所致的脑膜炎症反应,两种药物疗效相仿,其机制与减少CSF中IL-1、TNF-α等炎性因子有关。

禽源大肠杆菌致新生儿大肠杆菌型脑膜炎小鼠模型的构建研究

禽致病性大肠杆菌(APEC)临床分离株TW-XM可引起禽类和哺乳动物的脑膜炎,具有感染人类新生儿的潜能并受到医学和学术界极大关注。为探索不同感染剂量的APEC TW-XM感染情况,对新生小鼠进行腹腔接种,通过临床症状观察、存活率差异分析、同一时间点处死发病濒死的小鼠收集样品、脑组织病理学检测、血脑屏障损伤程度及脑膜炎相关炎症因子表达检测等评估,成功构建小鼠脑膜炎模型。基于新生小鼠大肠杆菌型脑膜炎模型建立,为防控大肠杆菌型脑膜炎提供研究基础。

脑膜炎大肠埃希菌侵袭素IbeA结合多肽的初步研究

目的脑膜炎大肠埃希菌(E.coli)侵袭素IbeA通过与脑微血管内皮细胞表面受体结合,从而介导细菌穿透血脑屏障引起新生儿细菌性脑膜炎。为通过肽库筛选获得与IbeA蛋白结合的多肽,建立噬菌体随机肽库筛选IbeA结合多肽模体的方法。方法首先制备靶分子,用PCR扩增出全长ibeA基因序列,克隆至表达载体pET28a中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白,经变性复性后通过Ni2+-NTA亲和层析柱得到纯度达90%的重组蛋白。然后以固相化IbeA重组蛋白为靶亲和筛选噬菌体线性12肽库。结果经过3轮淘选,得到能和IbeA结合的24个重组噬菌体克隆;挑选15个亲和力高的克隆进行DNA测序,对比分析所得的短肽序列。固相Fmoc法合成短肽,并进行结合实验、阻断实验和竞争抑制实验。结论以重组表达的IbeA融合蛋白为靶筛选得到的重组噬菌体十二肽克隆,能够和IbeA蛋白结合,为IbeA蛋白结合多肽。结果提示所筛选的阳性噬菌体克隆及其合成肽可能模拟IbeA受体表位的结构。

细菌性脑膜炎抗菌药物的选择

细菌性脑膜炎的主要病原菌包括脑膜炎球菌、肺炎球菌、金葡菌、流感杆菌、大肠杆菌和绿脓杆菌等,特效治疗时抗菌药物的选择至关重要,一方面要求对病原菌敏感,