超滤液用量对C群脑膜炎奈瑟球菌精制多糖质量的影响

目的:研究不同的超滤液用量对C群脑膜炎奈瑟球菌精制多糖质量的影响。方法:对C群脑膜炎奈瑟球菌多糖苯酚法去蛋白后的多糖液进行超滤,超滤液为0.5 mol/L氯化钙溶液,反复浓缩超滤。当超滤液用量达到20 L、30 L、40 L和50 L时,分别从截留管处取多糖液5 mL用于苯酚残留量的检测。对比超滤液用量为20 L和50 L时精制多糖的分子量、回收率、细菌内毒素和收率结果。结果:随着超滤液用量的增大,苯酚残留量逐渐降低;超滤液用量为50 L时,多糖分子量升高,精制多糖收率略有提高;细菌内毒素没有明显变化。结论:当超滤液用量为50 L时,多糖液中苯酚残留量降为0 g/L,多糖分子量升高,精制多糖收率略有增加,从而提高了多糖产品的质量。

b型流感嗜血杆菌奈瑟球菌荚D蛋白作为载体的膜多糖C群脑膜炎-蛋白结合物的免疫效果评价

目的对b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)D蛋白(protein D,PD)作为载体的C群脑膜炎奈瑟球菌荚膜多糖(group C meningococcal polysaccharide,GCMP)-蛋白结合物进行免疫效果评价,以确定PD作为GCMP蛋白载体的可行性。方法采用1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸(CDAP)活化法,将重组PD、破伤风类毒素(tetanus toxin,TT)分别与GCMP结合制备结合物;将GCMP及结合物分别经腹部皮下免疫雌性BALB/c小鼠,分为GCMP、GCMP-PD、PD、GCMP-TT、TT及阴性对照(生理盐水)组,每组12只,共免疫3次,分别于每次加强免疫前及末次免疫后7 d,经眼眶采血,分离血清,用于抗体水平检测及血清杀菌力试验(serum bactericidal assay,SBA);同时在末次免疫后7 d取脾脏,进行细胞免疫水平检测。结果蛋白与GCMP结合后能增强抗-GCMP抗体IgG水平,第3次免疫后,与单独GCMP组相比,GCMP-PD和GCMP-TT组小鼠血清抗-GCMP IgG水平均显著升高(F分别为5.294、14.917,P均<0.05),且产生免疫记忆,诱导IgG1产生,但GCMP-PD组低于GCMP-TT组(F=5.828,P<0.05);CMP-PD、PD组小鼠血清抗-PD IgG抗体水平各次免疫后均显著增长,第3次免疫后,GCMP-PD组抗-PD IgG抗体水平显著高于PD组(F=15.426,P<0.01),而GCMP-TT组低于TT组(F=211.207,P<0.001)。SBA结果显示,GCMP-PD组杀菌抗体滴度高于GCMP组(F=11.797,P<0.05),但低于GCMP-TT组(F=8.688,P<0.05)。流式细胞术结果显示,GCMP-PD组Th1、Th2细胞亚群比值与GCMP及GCMP-TT组相比,差异均无统计学意义(F分别为0.073、3.021,P均>0.05)。结论重组PD与GCMP结合后,既能增强多糖疫原性,提高体液免疫反应能力,也能激发细胞免疫反应,同时免疫后血清杀菌效果显著,提示PD具备作为GCMP蛋白载体的可行性。

梅州市首次C群流行性脑脊髓膜炎聚集性病例病原学分析

目的对梅州市首次C群流行性脑脊髓膜炎(流脑)聚集性病例进行病原学分析。方法对梅州市首次C群流脑聚集性病例进行流行病学调查,标本采集,菌株分离、鉴定、血清学分群及药物敏感性检测,并进行多位点序列分型(MLST)分析。结果梅州市首次从2例流脑病例中分离到2株C群脑膜炎奈瑟菌(Nm),第2例病例脑脊液标本PCR检测出C群siaD基因阳性。第2例及17例密切接触者咽拭子标本均未检出脑膜炎奈瑟菌。菌株对环丙沙星、萘啶酸、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑耐药,但对头孢噻肟、头孢曲松、美罗培南、阿奇霉素、咪诺霉素、氯霉素、利福平、青霉素、氨苄西林敏感。首例患者分离菌株MLST分型为ST-4821型。结论此为近年梅州市首次报告的C群流脑聚集性疫情,提示应加强对C群奈瑟菌的监测,密切关注C群流脑的发病及流行趋势。

张家界市首例C群流脑死亡病例及其密接人群中分离的脑膜炎奈瑟菌实验室分析和PFGE分型

目的了解张家界市首例C群流脑死亡病例及其密切接触人群中分离到的11株脑膜炎奈瑟菌的病原学特征及其流行关系。方法经培养及生化鉴定后,对菌株进行血清学及聚合酶链反应(PCR)鉴定分群,最后采用最低抑菌浓度(MIC)琼脂稀释法进行药敏试验;脉冲场凝胶电泳对菌株进行PFGE分型分析。结果通过生化、血清学和PCR实验共鉴定到9株C群脑膜炎奈瑟菌和2株W135群脑膜炎奈瑟菌,药敏试验中所有菌株对青霉素、氨苄西林、米诺环素、头孢曲松、头孢噻肟、氯霉素、阿奇霉素、美罗培南和利福平全部敏感;对复方磺胺甲口恶唑全部耐药;对环丙沙星和左氧氟沙星部分耐药,PFGE结果显示11株菌株共分为两个带型,其中9株C群脑膜炎奈瑟菌菌株带型完全相同。结论 C群和W135群可能成为新的流脑流行群引起疾病,分离的菌株对大部分抗生素仍较敏感,但要注意耐药趋势,造成该病例死亡的病原菌为C群脑膜炎奈瑟菌,与其密接同学中分离到的C群脑膜炎奈瑟菌的PFGE分型呈现高度一致性,提示为同一克隆群。

冻干A+C群脑膜炎球菌结合疫苗的安全性和免疫原性

目的观察冻干A+C群脑膜炎球菌结合疫苗的安全性和免疫原性。方法遵循随机、对照、盲法的原则,选择6～9月龄和≥3岁人群,分别接种观察组(冻干A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗)和对照组(6～9月龄:A群脑膜炎球菌多糖疫苗;≥3岁:对照A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗)疫苗,观察接种反应、血清抗体含量及抗体阳转率。结果免疫后6～9月龄观察组和对照组全身反应总发生率分别为1.67%和4.58%,局部反应总发生率分别为0.83%和2.08%;≥3岁观察组和对照组全身反应总发生率分别为2.50%和3.33%,局部反应总发生率均为0.83%。6～9月龄观察组和对照组免后A群抗体含量分别为22.27和3.61μg/ml,抗体阳转率分别为99.01%和66.67%,两组差异有统计学意义(P<0.05);≥3岁观察组A、C群抗体含量分别为21.28和17.94μg/ml,抗体阳转率分别为99.04%和98.08%;≥3岁对照组A、C群抗体含量分别为34.43和22.66μg/ml,抗体阳转率均为98.04%,两组间抗体含量差异有统计学意义(P<0.05),但阳转率差异无统计学意义(P>0.05)。结论冻干A+C群脑膜炎球菌结合疫苗在6～9月龄组与3岁及以上组人群中接种具有良好的安全性和免疫原性。

C群脑膜炎球菌结合疫苗的制备及其免疫原性

目的 制备由不同分子大小C群脑膜炎球菌多糖（group C meningococcal polysaccharide,CPS）与破伤风类毒素（tetanus toxoid,TT）共价偶联而成的结合疫苗（CPS-TT）,并检测其在小鼠中的免疫原性.方法 将CPS降解成不同大小的片段,经碳二亚胺（carbodiimide,EDAC）或溴化氰（cyanogen bromide,CNBr）活化后偶联到TT上制成CPS-TT.NIH小鼠皮下注射制备的不同CPS-TT,用ELISA法测定小鼠血清抗CPS和TT IgG抗体.结果 EDAC活化的降解CPS的衍化率（3.9％～5.7％）和多糖回收率（11.4％～21.3％）均高于CNBr活化的降解CPS的衍化率（0.4％～1.2％）和回收率（2.4％～11.5％）.EDAC或CNBr活化的降解CPS制备的CPS-TT在小鼠中均具有较强的免疫原性,但EDAC活化的降解CPS制备的CPS-TT免疫小鼠的抗CPS抗体滴度高于CNBr活化的降解CPS制备的CPS-TT免疫小鼠.结论 EDAC活化的降解CPS可用于制备C群脑膜炎球菌结合疫苗.

检测C群脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖含量的脱氧胆酸钠沉淀法的建立

目的 建立检测C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗（group C meningococcal polysaccharide-tetanus toxoid conjugate vaccine,CPS-TT）中游离多糖的脱氧胆酸钠沉淀法.方法 在不同pH条件下用脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）对CPS和TT进行沉淀,确定可有效分离游离多糖和结合多糖的最适沉淀条件,并对该法进行验证.结果 DOC沉淀法的最适pH为3.5,在此pH条件下用DOC沉淀法检测3批CPS-TT显示,上清TT含量平均为2.3％.DOC沉淀法具有较好的准确度和精密度,3批CPS-TT的批内变异系数均小于5％.结论 DOC沉淀法可用于C群脑膜炎球菌结合疫苗的质量控制.

发达国家控制C群脑膜炎球菌病的免疫策略

在发达国家,C 群脑膜炎球菌病的流行病学特点是不可预见的暴发和病例的双峰分布,1岁以下幼儿发病率最高,其次是十几岁少年。C 群脑膜炎球菌结合疫苗能诱导幼婴产生 T 细胞依赖性免疫应答、保护性抗体和记忆应答。免疫原性和效力研究显示免疫力随时间而下降,1岁前接种提供的保护作用似较短。全球实施了多种不同的控制策略,现有的免疫接种程序并非最佳。在大多数流行病学方案中,1岁左右接种第1剂、12岁左右接种第2剂的免疫程序似是最具成本-效益的选择。

2012年柳州市3～23月龄儿童流行性脑脊髓膜炎抗体水平及保护率分析

目的：分析2012年柳州市3～23月龄儿童流行性脑脊髓膜炎（流脑）抗体水平及保护率。方法于2012年5—8月，选择柳州市柳江县、融安县、三江县作为研究场所。研究对象的纳入标准为3～23月龄、未患过流脑、未接种过含C群脑膜炎奈瑟菌的疫苗、距离上次A群脑膜炎球菌多糖疫苗接种时间≥30 d的儿童，采用方便抽样，共抽取603名。采用自行设计的调查表收集研究对象的基本信息及A群脑膜炎球菌多糖疫苗的免疫史，并采集每名研究对象静脉血2.0 ml。流脑抗体测定采用脑膜炎奈瑟菌抗体血清杀菌力试验。血清杀菌抗体几何平均滴度（GMT）≥1∶2为阳性，≥1∶8为抗体具有保护性。采用χ2检验或Fisher确切概率法分别比较不同特征儿童A群和C群脑膜炎奈瑟菌血清抗体阳性率和保护率差异；采用Kruskal-Wallis H检验分别比较不同特征儿童A群和C群脑膜炎奈瑟菌血清抗体GMT差异。结果603名儿童中，男童和女童分别为325名（53.9%）和278名（46.1%）；接种A群脑膜炎球菌疫苗0剂次276名（45.8%），1剂次143名（23.7%），2剂次184名（30.5%）。A群脑膜炎奈瑟菌血清抗体GMT为1∶1.11，抗体阳性率为7.6%（46名），保护率为2.0%（12名）；接种1剂次A群脑膜炎球菌多糖疫苗儿童的抗体GMT为1∶1.16，保护率为3.5%（5名），均高于接种2剂次儿童[抗体GMT为1∶1.2，保护率为2.7%（5名）]，但差异均无统计学意义（GMT：H=0.64，P=0.728；保护率：Fisher确切概率法，P=0.080）。接种过1和2剂次A群脑膜炎球菌多糖疫苗的儿童在≤180 d时的抗体GMT分别为1∶1.12和1∶2.30。C群脑膜炎奈瑟菌血清抗体GMT为1∶1.18，抗体阳性率为14.6%（88名），保护率为2.2%（13名）。结论3～23月龄儿童对A、C群脑膜炎奈瑟菌普遍易感，A群脑膜炎球菌多糖疫苗在3～23月龄儿童中免疫效果较差，抗体水平下降较快。