脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的免疫效果

目的研究原核重组表达的B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(rNMB0315)在诱导小鼠产生特异性免疫应答中的作用、免疫血清抗体体外杀菌活性和重组蛋白的免疫保护效果,初步评价rNMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的潜力。方法将构建的原核表达载体p ET30a-NMB0315转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白,纯化鉴定后的重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平;测定血清抗体在补体介导下的体外杀菌活性,观察rNMB0315蛋白疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。结果 rNMB0315具有良好的免疫原性,能诱导产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG3、IgG2b和生殖道黏膜特异性分泌型IgA(s IgA),免疫后第6周抗体效价分别为1∶150 000、1∶85 000、1∶60 000、1∶35 000、1∶30 000和1∶30 000;也能激发较高水平的细胞免疫应答,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的刺激指数(SI)值明显高于PBS、Freund佐剂对照组。在免疫的2、4、6周,血清IgG2a/IgG1比值均小于1,提示rNMB0315疫苗以诱导Th2细胞性体液免疫应答为主。rNMB0315疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1∶128;72 h内,对实验小鼠的免疫保护率为90%。结论原核表达的rNMB0315具有良好的免疫活性和免疫保护效果,NMB0315外膜蛋白具有作为预防B群流脑蛋白疫苗候选抗原的潜力。

1例Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿皮肤坏疽的护理

目的:总结1例Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿皮肤及皮下组织坏疽护理经验。方法:根据伤口的不同恢复周期选择不同的护理方法,结合多学科的治疗和护理优势为患儿选择伤口护理技术、负压及植皮治疗,对患儿实行换药时预防性镇痛干预,并积极给予1年的延续性照护等。结果:住院时间2月余,双下肢伤口瘢痕愈合出院。随访1年,该患儿经过多次激光、瘢痕松解等康复训练,基本能够正常行走。结论:针对Y群脑膜炎奈瑟菌脑膜炎患儿的皮肤护理,利用多学科的治疗和护理,积极给予疼痛干预及康复指导,结合长期有效的延续性照护,对该患儿的预后起重要作用。

2017-2019年济宁市健康人群脑膜炎奈瑟菌流行病学和基因组学分析

目的了解济宁市健康人群脑膜炎奈瑟菌流行情况及其基因组特征。方法采集2017-2019年流行前期、流行期、流行后期不同年龄组健康人群的咽拭子标本,进行菌株分离培养、生化试验、血清凝集试验,分离到的菌株进行基因测序,利用PubMLST数据库进行多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)、疫苗抗原分析,利用IQ-TREE和Splits Tree构建系统发育树。结果2017-2019年共检测1086份健康人群咽拭子标本,分离出21株脑膜炎奈瑟菌,健康人群平均带菌率为1.93%。其中流行前期带菌率为0.93%,流行期带菌率为2.30%,流行后期带菌率为1.83%。17~19岁人群带菌率较高,3~5岁儿童及≥20岁成人中未检出阳性菌株。检出的21株菌株中,B群15株,C群1株,不可分群5株。通过基因组分析,主要的ST型为ST-12301和ST-14655,ST-17464、ST-17465、ST-17466、ST-17467和ST-17468为本研究新发现的ST型。进行基因测序的19株菌株中,有8株属于4821克隆群,其余菌株不属于确定的克隆群,有3株血清型为不可分群的菌株但其基因型为B型。结论济宁市2017-2019年健康人群中脑膜炎奈瑟菌血清群以B群为主。本研究新发现5种MLST序列型,提示近几年菌株基因组存在微进化。MLST序列型的变迁有可能导致流行模式发生改变,有必要开展持续监测。17~20岁人群带菌率高,应密切关注菌株在人群中的扩散传播,以防引起流脑病例。

B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用初步研究

目的:构建B群脑膜炎奈瑟菌pc DNA3.1(+)/NMB0315真核表达重组质粒,检测其诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效果及免疫保护作用,初步探讨NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护效果,为研制一种新的预防B群流脑的核酸疫苗提供实验依据。方法:以B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板设计引物,PCR扩增NMB0315基因,克隆至pc DNA3.1(+)真核表达载体中,经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切及测序鉴定重组质粒。构建成功的pc DNA3.1(+)/NMB0315重组质粒转染COS-7细胞和RAW264.7细胞,免疫细胞化学染色法和Western blot法检测重组蛋白在真核细胞中的表达。大量提取重组质粒,肌注免疫BALB/c小鼠,检测小鼠体内抗NMB0315的特异性体液免疫和细胞免疫水平;测定免疫血清体外杀菌滴度,观察核酸疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。结果:构建的核酸疫苗pc DNA3.1(+)/NMB0315能够在真核细胞中有效转录和表达;免疫小鼠后能诱导产生特异性体液免疫应答和细胞免疫应答。在疫苗免疫后的2、4、6周,pc DNA3.1(+)/NMB0315组和pc DNA3.1(+)/NMB0315+Cp G组血清总Ig G及Ig G1、Ig G2a、Ig G2b和Ig G3亚类抗体水平呈递增趋势,均明显高于PBS、pc DNA3.1(+)、Cp G对照组(P<0.001);小鼠血清Ig G2a/Ig G1比值均小于1;生殖道灌洗液中特异性s Ig A水平均明显高于PBS、pc DNA3.1(+)、Cp G对照组(P<0.01)。免疫第6周,脾淋巴细胞刺激指数(SI)均明显高于对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。pc DNA3.1(+)/NMB0315+Cp G、pc DNA3.1(+)/NMB0315疫苗组免疫血清补体介导的体外杀菌效价分别为1∶128和1∶64;在致死量B群脑膜炎奈瑟菌MC58攻击后72 h存活率分别为70%和65%,对照组[PBS,pc DNA3.1(+),Cp G]72 h存活率为0。结论:NMB0315核酸疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫(包括黏膜免疫)和细胞免疫应答;免疫血清补体介导的体外杀菌活性较高;NMB0315核酸疫苗对感染B群脑膜炎奈瑟菌小鼠具有较强的免疫保护作用。

49株脑膜炎奈瑟菌体外抗菌药物敏感性检测

目的了解2005-2006年中国脑膜奈瑟菌分离株(Neisseria meningitides,Nm)的抗菌药物敏感性变化趋势,为选择抗菌药物对流行性脑脊髓膜炎(流脑)患者进行治疗提供参考。方法采用肉汤稀释检测最低抑菌浓度(MICs)方法、药敏纸片扩散(K-B)法和E-test试纸条检测方法对本实验室收集的49株(16株A群、33株C群)2005-2006年分离的患者Nm菌株进行体外抗菌药物敏感性检测。结果16株A群Nm菌株对复方新诺明、四环素、左氧氟沙星、萘啶酸4种抗菌药物耐药,对环丙沙星耐药或中度敏感。33株C群Nm菌株对复方新诺明耐药,31株(93.9%)C群菌株对萘啶酸耐药,20株(60.6%)C群菌株对左氧氟沙星耐药,17株(51.5%)C群菌株对环丙沙星耐药。分别发现对青霉素不敏感的4株A群和1株C群Nm菌株。结论2005-2006年,中国的A群和C群Nm菌株对磺胺类药物和喹诺酮类药物普遍耐药,此两类药物不适合中国流脑的临床用药及人群预防性给药。K-B药敏纸片和肉汤稀释MICs及E-test方法具有较高的一致性。

江西省2005-2015年脑膜炎奈瑟菌血清分型和分子分型分析

目的对江西省2005-2015年分离的脑膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitidis,Nm)进行血清分型和分子分型研究,揭示菌群特征和变迁情况。方法对2005-2015年分离的200株脑膜炎奈瑟菌采用血清凝集的方法鉴定血清群,对引起流脑流行的血清群进行脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST),使用BioNumerics软件构建最小生成树。分析不同来源、不同年份分离株的血清型和分子型别以及变迁情况。结果 200株脑膜炎奈瑟菌中,有168株可鉴定为已知血清群,包括C群(101株)、B群(50株)、A群(12株)、W135群(2株)、Y群(2株)和X群(1株),另外32株为不可分群菌株。临床病人、密切接触者和健康人群分离株中分别有100%、86.0%和28.9%的菌株为C群。针对健康人群分离株,2005年、2007年、2008年、2012年分离的菌株中,C群分别占1.9%、58.8%、81.5%和0%。95株C群菌株分为14个PFGE型,其中NMNh.JX0001和NMNh.JX0002为优势带型,分别包含46和30株菌。NMNh.JX0001型菌株在2005-2006年、2007-2008年、2013-2014年3个时间段在C群菌株中所占比例分别为97.2%、28.6%、10.0%;而NMNh.JX0002型菌株在2005-2006年、2007-2008年、2013-2014年3个时间段在C群菌株中所占比例分别为2.8%、57.1%、90.0%。挑选优势带型以及相似带型的33株菌株进行MLST分型,均为ST-4821型。结论江西省2005-2015年的流脑病例均为C群菌株引起。在健康人群中存在C群脑膜炎奈瑟菌。虽然近10年流行的C群菌株MLST序列型未发生改变,但是PFGE型别发生了变迁,提示菌株基因组存在微进化。PFGE型别的变迁有可能导致流行模式发生改变,所以有必要开展持续监测,密切关注新型菌株在人群中的传播扩散以及引起的流脑病例。

江西省C群脑膜炎奈瑟菌药物敏感性及PFGE分子特征分析

目的分析江西省2006-2010年分离的C群脑膜炎奈瑟菌的药物敏感性及分子特征。方法采用E-test试纸条检测方法对38株C群脑膜炎奈瑟菌菌株进行体外抗菌药物敏感性检测,利用脉冲场凝胶电泳技术(Pulsed-Field Gel Electrophoresis,PFGE)进行分子特征分析。结果所有菌株对氯霉素、美洛培南、阿奇霉素、米洛环素、头孢噻肟、头孢曲松和利福平均敏感;15(39.5%)株菌株对青霉素不敏感,18(47.4%)株对氨苄西林不敏感,25(65.8%)株对环丙沙星耐药,23(60.5%)株对左氧氟沙星耐药,11(28.9%)株对复方新诺明不敏感。PFGE分型显示以AH1和AH2型为主,并且同一地区的带型以同一种带型为主。结论江西省2006-2010年分离C群脑膜炎奈瑟菌株对喹诺酮类药物具有较高的耐药性,还有大部分菌对磺胺类和青霉素类药物也不敏感。PFGE分型特征虽然呈多态性,但是以AH1和AH2型为优势克隆型。

中山地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌的带菌率及血清分型调查

目的 :获取本地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌携带情况 ,为政府制定预防和控制流行性脑脊髓膜炎暴发流行提供科学决策依据。方法 :随机抽检正常人群 (按人群防疫监测共分四组 :2～ 4岁、6～ 8岁、9～ 12岁、2 5～ 39岁组 )鼻咽拭子进行培养、分离、鉴定及血清分型 ,按《全国临床检验操作规程》进行。结果 :4 0 3人共检出 2 2株脑膜炎奈瑟菌 ,总检出率为 5 .4 6 %。男性检出 9株 ,检出率 4 .4 6 % ,女性检出 13株 ,检出率为 6 .4 7%。其血清分型为 A群 3株 ,B群 14株 ,C群 2株 ,1892型 1株 ,未定型 2株。 2～ 4岁组检出 6株 ,检出率 8.5 7% (6 /70 ) ;6～ 8岁组检出 4株 ,检出率 7.4 1% (4/5 4 ) ;9～ 12岁组检出 6株 ,检出率8.0 0 % (6 /75 ) ;2 5～ 39岁组检出 6株 ,检出率 2 .94 % (6 /2 0 4 )。男女性别之间及少年不同组别正常人群鼻咽部脑膜炎奈菌携带率经 X2 检验差异均无显著性 ,而少年组与成人组比较相差有显著性意义。结论 :调查显示 ,本地区正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌携带率为 5 .4 6 % ,处于较低水平。血清分型以 B群为主 ,本地为非流行株。不同性别正常人群鼻咽部脑膜炎奈瑟菌的携带率无差别 ,儿童携带率较成人高。调查结果显示本地区目前不具备流行特点 ,A群脑膜炎奈瑟菌未造成本地流行性?

湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起流脑局部流行的调查

目的了解湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起的流脑局部流行疫情特征。方法依据《全国流行性脑脊髓膜炎防治指南(试行)》和GB16884—1997进行调查和实验室检测。结果从患者的脑脊液中分离到奈瑟菌。经湖南省CDC实验室复核鉴定为C群脑膜炎球菌。结论此次疫情为湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起的流脑疫情。隔离治疗病人、在疫区易感人群中紧急接种流脑(A+C)疫苗是控制疫情扩散的有效方法。

深圳市2005～2006年健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌调查

目的了解2005—2006年深圳市健康人群脑膜炎奈瑟菌（Nm）的带菌状况，为制定有效的防制方案提供依据。方法将健康人群分为0-、5-、10-、15-、25-、35-和45-岁以上7个年龄组，采集咽拭子，进行Nm培养分离和鉴定，用血清学诊断和PCR方法分群。结果2005—2006年深圳市健康人群Nm带菌率为4．4％（55／1255），其中B群49株（89．1％），c群4株（7．3％），29E2株（3．6％）。在两次流脑疫情中各分离到1株B群Nm。结论2005—2006年深圳市健康人群主要携带B群Nm，未检出A群Nm，A群流脑传染源较少。

脑膜炎奈瑟菌ABC血清群的PCR快速诊断

[目的]建立特异、敏感、快速的脑膜炎奈瑟菌检测方法。[方法]分别以Nm保守ctrA基因、荚膜表达基因orf-2和siaD基因设计引物,根据PCR扩增的特异性产物对Nm进行鉴定与分群。[结果]PCR扩增NmctrA基因得到111bp的特异性产物,非Nm菌株结果为阴性;再以PCR扩增orf-2和siaD基因,分别得到大小400bp(A群)、450bp(B群)、250bp(C群)的特异性片断。对60株Nm试验菌进行PCR鉴定,其结果与血清学分型结果一致。[结论]所建立方法可用于Nm的快速诊断。

脑膜炎奈瑟氏菌NspA基因重组乳酸菌表达载体的构建及原核表达

用NcoⅠ和KpnⅠ双酶切克隆质粒pMD-18T-NspA及可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的载体质粒pW425et,将NspA基因与pW425et表达载体用T4DNA连接酶相连,构建出重组质粒pW425et-NspA,将其转入至E.coliDH5α感受态细胞中,筛选阳性重组子进行SDS-PAGE和Western-blot检测,经蛋白电泳可见约18 kD的融合蛋白,Western-blot分析表明该蛋白具有与脑膜炎奈瑟氏菌抗体的反应原性。

脑膜炎奈瑟氏菌对常用抗菌药物敏感性监测

本文就１９６６～１９９３年２１个省市分离的２１８株Ａ、Ｂ和Ｃ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）对７种常用抗菌药物的敏感性进行了监测。在１０８株Ａ群Ｎｍ中２０株（１８．５％）对ＳＭＺ耐药，其中１７．３％的病人菌株，２１．２％的带菌者菌株耐药；３１株（２８．７％）对ＡＳＰ耐药。在１０１株Ｂ群Ｎｍ中４０株（３９．６％对ＳＭＺ耐药。其中４３．３％的病人菌株和３４．１％的带菌者菌株耐药，１７株（１６．８％）对ＡＳＰ，１０株（９．９％）对ＣＦ耐药。在９株Ｃ群Ｎｍ中５株对ＳＭＺ，２株对ＡＳＰ耐药。未发现Ｎｍ对Ｃｈｌ耐药。实验结果提示我们今后在流脑治疗和化学预防上应加强Ｎｍ对抗菌药物敏感性的监测，这有助于提高这些药物对流脑防治的效果。

脑膜炎奈瑟菌病原学及药物敏感性分析

目的了解某省各市、县疾病预防控制中心2007-2008年分离的8株脑膜炎奈瑟菌的病原学特征及药物敏感性。方法经培养及生化鉴定后,对菌株进行血清学及聚合酶链反应(PCR)鉴定分群,最后采用最低抑菌浓度(MIC)琼脂稀释法进行药敏试验。结果 8株脑膜炎奈瑟菌中有5株C群、1株B群、1株Y群及1株不可分群菌株。所有菌株对青霉素、氨苄西林、米诺环素、头孢曲松、头孢噻肟、美罗培南、利福平敏感,对复方磺胺甲(口恶)唑则全部耐药,对环丙沙星和左氧氟沙星各有4株耐药,对氯霉素和阿奇霉素各有1株耐药。结论 8株脑膜炎奈瑟菌的流行株中以C群为主;青霉素、头孢曲松、头孢噻肟、美罗培南等可作为治疗流行性脑脊髓膜炎的一线药物,脑膜炎奈瑟菌对喹诺酮类及大环内酯类抗生素的耐药现象需引起重视。

脑膜炎奈瑟菌疫苗研制进展

由脑膜炎奈瑟菌引起的流行性脑脊髓膜炎是一种对人类危害严重的传染性疾病,曾在全球引起多次大流行,所以关于其预防引起了全世界的高度重视。目前应用和研究的脑膜炎奈瑟菌疫苗主要有荚膜多糖疫苗、多糖与蛋白结合疫苗、B群改良疫苗、去毒脂多糖结合疫苗等,本文就以上疫苗的研制情况进行综述。

陕西省健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率调查及其血清群分布特征

目的了解陕西省健康人群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)带菌状况,为流脑防治提供科学依据。方法2016年10月至2017年7月选取西安市、宝鸡市、安康市和延安市,按年龄分层采取整群随机抽样方式采集健康人群咽拭子,通过细菌培养与Real-time PCR检测Nm阳性率,结合流行病学调查资料对Nm检出情况进行分析。结果共调查1539例,分离到Nm46株,阳性率为2.99%,Nm中不可分群占63.04%,B群占23.91%,C群占10.87%,A群占2.17%;Real-time PCR检测Nm阳性110例,阳性率为7.15%,高于细菌培养结果,鉴定Nm中不可分群者占67.27%,B群占17.27%,C群占14.55%,A群占0.91%;不同地区研究对象Nm核酸阳性率比较差异具有统计学意义(χ^2=11.88,P<0.01),安康市Nm阳性率最高(10.71%);不同年龄组Nm核酸阳性率差异比较具有统计学意义(χ^2=1200.08,P<0.01),其中15~24岁组Nm核酸阳性率最高(16.36%),0~2岁组Nm核酸阳性率最低(4.03%)。经多分类Logistic回归分析,影响Nm带菌情况的的危险因素有年龄(15~24岁)、性别和所在地区(安康市和延安市)。结论陕西省流脑健康人群带菌率相对较低,建议进一步加强健康人Nm带菌状况的监测,并根据Nm分布特征及菌群变迁趋势及时调整流脑防控措施。

脑膜炎奈瑟菌基因分群方法建立与评价

目的建立流脑实验室快速诊断及基因分群方法,进行群别分布研究及分群效率评估。方法应用多重PCR进行同步核酸鉴定及基因分群。平板菌落计数法评估敏感性,基因序列分析确定特异性。结果PCR敏感性为83个菌落形成单位(CFU)/反应;多重PCR分群效率(100%)优于血清凝集法(82.02%),差异有统计学意义。其中带菌者分离株基因分群效率为100%,血清凝集法为65.71%;对与血清凝集分群法结果不同的菌株进行基因测序,分析结果与PCR分群结果相符;分离株菌群分布为A群60.69%,B群24.69%,C群14.62%,未检出其他群别。结论所建立的基因鉴定及分群方法敏感性和特异性均优于血清凝集法,分群效率优于血清凝集法。

55株脑膜炎奈瑟菌对12种抗生素体外敏感性试验

目的了解脑膜炎奈瑟菌(Nm)的耐药性,为指导预防和临床用药。方法采用2006年美国临床试验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)推荐的纸片扩散法和最低抑菌浓度法测定深圳市55株Nm对抗生素的敏感性并进行分析。结果所有菌株对青霉素、氨苄西林、头孢曲松、头孢噻肟、美洛培南、米诺环素、氯霉素、利福平敏感,而全部菌株对复方新诺明耐药,32.7%(18/55)的菌株对环丙沙星耐药,38.2%(21/55)的菌株对萘啶酸耐药,有多重耐药现象。结论Nm菌株对磺胺类药物耐药情况严重。在临床和预防用药时,应慎重使用。