动态浊度法与热原检查法检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的比较

研究A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗生产过程中热原安全性问题,对动态浊度法与热原检查法检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗进行比较。方法 根据《中华人民共和国药典》2020版(三部) 规定的方法,随机抽取10批次A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗为研究样品,分别采用细菌内毒素动态浊度法和热原检查家兔法进行检定。结果 10批A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗热原检查法热原检查均符合规定,动态浊度法能定量检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中细菌内毒素定量检测结果与热原检查家兔法一致。结论 细菌内毒素动态浊度法能定量检测A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中细菌内毒素的含量,在快速检测中优于热原检查法,基于上述的比较研究,表明动态浊度法可作为A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗生产过程控制中热原检查的补充方法,更好地控制产品质量。

A、C、W135、Y群脑膜炎球菌四价多糖疫苗的安全性和免疫原性研究

目的评价2岁以上正常人群接种A、C、W135、Y群脑膜炎球菌四价多糖疫苗的安全性和免疫原性效果。方法2006年在江苏丹阳市对国内生产的A、C、W135、Y群脑膜炎球菌四价多糖疫苗的安全性和免疫原性进行系统研究,并以兰州生物制品研究所生产的A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗作对照,用微量杀菌力试验(TTC法)进行A群、C群、W135群、Y群脑膜炎球菌的杀菌抗体检测。结果A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗和A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗分别接种600人和300人,其发热反应率分别为3.5%和3.0%,局部反应率分别为0.83%和1.67%,两组的差异无统计学意义。两组分别有480人和240人采血做杀菌抗体检测,试验疫苗免疫后,各年龄组A群、C群、W135群、Y群杀菌抗体4倍增长率均>90%,与对照疫苗A、C群抗体4倍增长率>90%差异无统计学意义,与对照疫苗W135群、Y群抗体4倍增长率10%及20%左右差异有统计学意义。各年龄组试验疫苗免疫后A群、C群、W135群、Y群杀菌抗体GMT分别为1:351、1:384、1:170和1:280,均达到人群保护水平。结论A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗反应轻微,安全性好,免疫原性亦好,可以推广使用。

A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗稳定性研究

为确定A +C群脑膜炎球菌多糖疫苗有效期 ,对该疫苗在不同储藏温度下的稳定性进行了系统研究。将C群多糖抗原放置在 37℃ ,A +C群多糖疫苗分别放置在 2～ 8℃、37℃和 5 6℃ ,定期取样 ,用琼脂糖CL - 4B凝胶柱层析后 ,测定Kd值在 0 .5以前的多糖回收率。结果表明 ,C群多糖抗原在 37℃保存 9周 ,A +C群多糖疫苗于 2～ 8℃保存 4年、37℃保存 88周、5 6℃保存 10个月 ,多糖抗原或多糖疫苗的Kd值小于 0 .4 ,多糖回收率大于 75 % ,符合规程要求 ;因而A +C群脑膜炎球菌多糖疫苗的有效期可定为在 2～ 8℃储藏条件下 3年

C群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的研制

目的对C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗进行研制。方法将C群脑膜炎球菌多糖在溴化氰(CNBr)的活化下,以1,6己二酰肼(ADH)作为连接子与精制破伤风类毒素(TT)在碳二亚胺(EDAC)作用下结合,制成C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液,加保护剂冻干后制成C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果制备的冻干C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗各项指标均达到了质控标准。该疫苗安全性及免疫原性良好。结论已成功研制出冻干C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗,该制备工艺是可行的。

C群脑膜炎球菌多糖纯化方法的改进

将C群脑膜炎球菌粗多糖的纯化改进为用1:1容量冷酚提取的生产工艺。结果表明,改进后的方法去除蛋白质效果同样能够达到《中国药典》2005版(三部)的要求,总体结果优于改进前。同时能扩大处理量而降低了生产成本,适合规模化生产。

A+C群脑膜炎球菌多糖疫苗的制备及其接种人体后的血清学效果

在现行的A群脑膜炎球菌多糖原液制造工艺的基础上 ,经部分改进后进行C群脑膜炎球菌多糖原液的生产。 3批中试A +C群脑膜炎球菌多糖疫苗经全面检定后 ,各项指标均符合WHO《生物制品规程》的要求。该疫苗在接种人体后 ,5～ 13岁儿童组 ,抗A群及抗C群脑膜炎球菌的血清杀菌抗体 4倍增长率为 96 5 9%和 92 15 % ;≤2岁儿童组 ,抗A群及抗C群脑膜炎球菌的血清杀菌抗体 4倍增长率为 6 8 6 0 %和 6 9 77%。 2组儿童接种后 1个月的抗A群及抗C群膜炎球菌血清杀菌抗体几何平均滴度 (GMT )与接种前均有显著性差异 (P <0 0 0 1)

不同的甲醛杀菌浓度对A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖内毒素含量的影响

目的研究不同的甲醛杀菌浓度对A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖内毒素含量的影响。方法将A群脑膜炎球菌发酵液分成A、B两组,A组采用体积分数为2.5%甲醛杀菌,B组采用体积分数为2.0%甲醛杀菌。将C群脑膜炎球菌发酵液分成C、D两组,C组采用体积分数为2.5%甲醛杀菌,D组采用体积分数为2.0%甲醛杀菌。分别纯化获得荚膜多糖,用动态浊度法测定荚膜多糖中内毒素的含量。结果 A、C两组荚膜多糖中内毒素含量显著低于B、D两组荚膜多糖中的内毒素含量(P<0.05)。结论使用不同浓度的甲醛杀菌,对A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖内毒素的含量有显著影响。较高浓度的甲醛利于菌体细胞的固定,从而防止细菌自溶释放内毒素,因而高浓度的甲醛能够减少其内毒素的含量,提高了产品质量。

C群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖-TT结合疫苗的制备及其在小鼠体内免疫原性的研究

将C群脑膜炎球菌荚膜多糖以ADH作为间隔剂与TT结合形成GCMP-TT结合疫苗,然后用此结合疫苗免疫NIH小鼠,结果显示使用GCMP免疫小鼠后仅能产生较低水平抗GCMP的IgG抗体,而用GCMP-TT免疫后小鼠血清中产生了较GCMP免疫显著增高抗GCMP的IgG抗体,并且GCMP-TT组第二次和第三次免疫后与初次免疫相比,IgG抗体水平均有显著升高(P<0.01),表明GCMP-TT结合疫苗具有免疫记忆和再次免疫加强应答效应。补体介导的血清抗体体外杀菌试验结果证明,GCMP-TT结合疫苗组免疫小鼠诱导的抗体IgG比GCMP组具有增强的体外杀菌活性。

薄膜过滤法在A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗无菌检查中的应用

采用薄膜过滤法对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法进行验证。结果表明,薄膜过滤法具有取样量大,操作简便,污染几率小,能确保检验结果的准确性、有效性和重现性,该方法适用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗的无菌检查方法。

A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗及b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量检测方法的建立与验证

目的建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并加以验证。方法参照《中华人民共和国药典》三部（2010年版）中＂毛细管柱顶空进样等温法＂,优化色谱条件,建立A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测方法并对该方法进行验证及初步应用。结果色谱条件为顶空平衡温度70℃,顶空平衡时间40 min,汽化室温度200℃,柱箱温度40℃,检测器温度250℃,进样量为1.0 m L,载气（高纯氮气）流量1.3 m L/min,尾吹气（高纯氮气）流量5 m L/min,分流比1∶1。丙酮质量分数在2×10^-6-5×10^-5范围内具有良好的线性关系（r〉0.99）。丙酮的平均回收率及相对标准偏差（RSD）分别为86.05%-105.11%及2.1%-9.5%,检测限为2×10^-6,定量限为3×10^-6。结论本方法的线性、特异性、准确性、重复性等均符合规定,方法准确、稳定,可用于A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗和b型流感嗜血杆菌结合疫苗中丙酮残留量的检测。

C群脑膜炎球菌结合物小鼠免疫原性的研究

目的比较C群脑膜炎球菌多糖蛋白质结合物(简称结合物)的相对分子质量大小和免疫剂量对其在小鼠体内免疫原性的影响,为结合物的分子大小的质控和结合疫苗成品免疫剂量的选择提供实验依据。方法利用CDAP活化法制备C群脑膜炎球菌结合物,通过硫酸铵盐析进行纯化,然后利用Sepharose CL-4B凝胶过滤层析分析,并根据化学检测结果将结合物分为KD0-0.2(组分1)、KD0.2-0.4(组分2)、KD0.4-0.7(组分3)等3个不同相对分子质量组分,每份分别采用1.0μg、0.2μg的免疫剂量免疫小鼠,并对血清进行ELISA分析。结果采用1.0μg免疫剂量时,3种不同相对分子质量的C群脑膜炎球菌结合物均能产生较高水平的抗体,具有典型的加强效应,第2剂免疫即可产生高水平的抗体,而第2、3剂免疫后的抗体水平差异无统计学意义;采用0.2μg免疫剂量时,三种不同相对分子质量的C群脑膜炎球菌结合物只有在第3剂免疫后才能产生较高水平抗体,第1、2剂免疫后的抗体水平差异无统计学意义,组分1和组分2在第3剂免疫后产生的抗体水平优于组分3;对于相同相对分子质量结合物,用1.0μg免疫小鼠产生的抗体水平优于0.2μg免疫组,而且有显著的统计学意义。结论高剂量时,多糖相对分子质量大小对C群脑膜炎球菌结合物的免疫原性没有显著性影响;低剂量时,小相对分子质量结合物对其免疫原性有影响。同等相对分子质量时,1.0μg比0.2μg的免疫剂量可以激发更高的抗体水平。

关于1例接种冻干A、C群脑膜炎球菌-多糖结合疫苗发生过敏性紫癜反应的调查处理报告

2011年12月19日东丰县疾病预防控制中心接到东丰县二龙山乡永合卫生院防保站报告，1例儿童接种冻干A、C群脑膜炎球菌-多糖结合疫苗后，第2天针眼处出现红斑，发热。3天后出现全身斑点，疑似接种疫苗后异常反应。现将调查结果报告如下。

动态浊度法检测C群脑膜炎球菌多糖原液细菌内毒素含量

采用动态浊度法对多批C群脑膜炎球菌多糖原液进行细菌内毒素含量检测,同时设供试品干扰试验,并与凝胶限量法进行对比分析。从而建立了C群脑膜炎球菌多糖原液细菌内毒素定量检测方法和质量控制指标。

A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

目的研制A+C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗。方法A群和C群脑膜炎球菌多糖在溴化氰(CNBr)的活化下,以1,6己二酰肼(ADH)作为连接子,与精制破伤风类毒素(TT)在碳二亚胺(EDAC)作用下结合,再按一定的比例将两者混合,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗原液,加保护剂冻干后,制成A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果经检定,A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗各项指标均达到了质控标准。该疫苗安全性及免疫原性良好。结论已成功研制出冻干A+C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗,该制备工艺是可行的。

接种冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗偶合肠套叠1例报告

患儿,男,2009年8月8日出生。2010年6月24日09：10在市疾病预防控制中心预防接种门诊,于右上臂外侧三角肌肌内注射冻干A、C群脑膜炎球菌结合疫苗0.5 ml[罗益（无锡）生物制药有限公司,批号20091101-4,有效期至2011-11-19]。

CDAP活化制备C群脑膜炎球菌结合疫苗原液的稳定性试验

目的：评价以1－氰基－4－二甲氨基－吡啶四氟硼酸（ CDAP ）活化制备的C群脑膜炎球菌结合疫苗原液的稳定性。方法以变通的现有工艺为基础，选取C群脑膜炎球菌结合疫苗原液连续3批样品，分别放置于（37＆#177;2）℃、（25＆#177;2）℃，和2～8℃三种温度下，根据稳定性试验原则定期取样并进行主要指标的检测，评估原液的稳定性。结果 C群脑膜炎球菌结合疫苗原液于2～8℃保存18个月，（25＆#177;2）℃保存20周，37℃保存7天，各项检测指标均符合质量标准的要求。结论在2～8℃之下，施行变通的工艺， C群脑膜炎球菌结合疫苗原液可稳定存放18个月。

A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗安全性观察

目的客观、系统地评价A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗（MPV）对2~6岁人群使用后的安全性。方法 10070名2~6岁儿童接种A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗后,通过主动监测和观察对象主动报告对速发接种反应、全身反应和局部反应进行观察和统计,并对所有接种者跟踪观察30天以评价长期的不良反应。结果无速发接种反应发生。在监测的人群中,587人发生了不良反应,发生率5.83%;其中2人发生严重预防接种不良反应,发生率0.02%;519人发生全身性不良反应,发生率5.15%;27人发生局部性不良反应,发生率0.27%,未观察到与疫苗接种相关的任何长期不良反应。结论此次对A群C群MPV使用安全性现场观察。总体接种除2例严重不良反应外,其余反应轻微,发热为主要为不良反应,绝大部分反应能在3天内自行消失,未观察到出现紫癜等全身不良反应,A群C群MPV使用后有良好的安全性。

干烤法测定C群脑膜炎球菌多糖原液固体总量的不确定度评定

目的建立干烤法测定C群脑膜炎球菌多糖原液固体总量的不确定度分析方法。方法分析C群脑膜炎球菌多糖原液固体总量测定过程中引入的不确定度,并对各个不确定度的分量进行评估。结果由各分量不确定度计算合成不确定度,最终给出测定结果在95%置信区间的扩展不确定度。结论 C群脑膜炎球菌多糖原液固体总量测量不确定度主要由取样及干燥过程引入,在试验中须严格控制以减小不确定度。