淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒核蛋白合成基因的表达及应用

目的 用合成基因表达产物取代淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（ＬＣＭＶ）或其他方法重组蛋白抗原， 用于ＬＣＭＶ感染的诊断。方法 采用Ｐｒｏｓｉｓ软Ｓ件对ＬＣＭＶ核蛋白（Ｎｐ）全长氨基酸序列进行亲疏水性分析，合成ＬＣ－ ＭＶ ｓＲＮＡ第１８１６－２１７８位核苷酸序列编码的Ｎｐ第３８０～５００位氨基酸基因，克隆在Ｈｉｓ－ｔａｇ ｐＥＴ－２８ａ融合表达，表 达产物经固定化金属配体亲和层析纯化，建立ＥＬＩＳＡ检测试剂。结果 表达产物主要以包涵体形式存在，表达量 达２０％以上。表达产物经Ｎｉ－ＮＴＡ－Ａｇａｒｏｓｅ纯化后纯度达到９０％以上。经检测９３份人血清．有６份病毒抗体阳 性，阳性率为６．５％（６／９３），与全病毒抗原检测结果７．５％（７／９３）相近。结论 用合成基因表达产物取代ＬＣＭＶ抗原 检测病毒抗体，不仅可以消除病毒传播可能，而且特异性强。为ＬＣＭＶ感染诊断及生物材料质量控制提供有效方 法。

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒在实验大鼠中的感染状况

目的对实验室留存的大鼠血清样本进行淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)抗体检测,调查LCMV在我国实验大鼠中的感染情况。方法依据现行国家标准中规定的免疫荧光试验(IFA)方法对我实验室保存的172份大鼠血清样本(包括48份无级别、100份清洁级和24份SPF级大鼠血清样本)进行LCMV抗体检测。结果无级别大鼠血清样本(n=48)15份阳性,阳性率为33.25%,强阳性样本滴度可达1∶1280;SPF级及清洁级大鼠血清样本全部阴性。结论大鼠可以感染LCMV,实验动物等级标准应增加对大鼠LCMV的检测。

长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

目的建立长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）kL体ELISA检测方法，应用于长爪沙鼠携带LCMV的检测。方法培养Vero细胞，接种LCMV毒种，制备Vero正常抗原和LCMV特异抗原，滴定酶结合物、正常抗原及特异抗原最佳工作浓度，并进行方法的特异度、灵敏度、精密性、稳定性实验。结果正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0．4gg／mL、10gg／mL和1：5000；正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为6．8％和8．9％，批间平均变异系数分别为9．3％和8．4％；检测灵敏度达到1：1280；与小鼠仙台病毒（SV）、小鼠呼肠孤病毒3型（Reo3）均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25％。结论建立的ELISA方法特异度、灵敏度强，重复性、稳定性好，可用于长爪沙鼠LCMV抗体的检测。

套式PCR检测淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)方法应用

目的检测目前小鼠和地鼠中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的感染情况。方法采用套式PCR方法对小鼠和地鼠脑及小鼠脏器进行扩增,检测LCMV基因;同时对血清进行ELISA试验,将两种方法的结果进行比较。结果从小鼠的脾脏和肾脏中检测到NP基因的存在,检出率2/148;ELISA检出率5/148。结论PCR与ELISA检测方法相结合,准确率高,证明目前小鼠中存在LCMV的感染。

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒实时荧光RPA快速检测方法的建立

针对淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus,LCMV)基因保守序列,设计特异性引物和荧光探针,建立了LCMV实时重组聚合酶等温扩增(real-time recombinase polymerase amplification,real-timeRPA)检测方法。该检测方法具有良好的特异性,与LCMV同步检测的其他鼠病毒均未出现交叉反应;该检测方法具有与RT-PCR一样的高敏感性;通过对LCMV感染鼠组织样本和LCMV阴性鼠血清样本的检测,证实建立的实时荧光RPA方法具有良好的稳定性和可靠性。与现有的核酸检测方法相比,该实时荧光RPA检测方法在核酸上样20min内即可判读结果,可满足啮齿类动物LCMV快速检疫需要。

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒快速核酸检测方法

为加强口岸对进境野生及实验用啮齿类动物中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)筛查和流行病学调查,本研究建立了RT-PCR和Real-time RT-PCR快速高通量检测LCMV的方法,证实两种核酸检测方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性,适于快速检测LCMV。

融合表达淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和卵清白蛋白CD8^+T细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定

依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8+T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8+T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVACD8+T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经PCR扩增和序列测定分析,证实成功构建T细胞表位与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒pYAGFPL＿O,将此重组质粒pYAGFPL＿O转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,获得重组沙门氏菌X4550(pYAGF PL＿O)。用SDS＿PAGE电泳测得重组菌表达的融合蛋白约为30kD。同时,荧光显微镜下观察到X4550(pYAGFPL＿O)发出黄绿色荧光。这些结果表明LCMV和OVAT细胞表位已成功表达。重组菌X4550(pYAGFPL＿O)的获得为研究沙门氏菌载体携带外源抗原的T细胞应答规律及调控机理打下了重要基础。

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立检测淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)的PCR方法。方法根据LCMV CDNA S片段的GPC和NP基因设计合成4对引物,对标准毒株进行套式PCR扩增并克隆测序,并对15份已知阳性或阴性小鼠鼠脑进行检测。结果目的片断与LCMV cDNA序列99%同源,对鼠脑的检测结果为10只阳性,5只阴性。结论检测小鼠鼠脑LCMV的结果准确,证明套式PCR能够应用于LCMV的实验室检测。

不同动物接种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒后抗体产生

小鼠、大鼠、豚鼠和地鼠经滴鼻和腹腔接种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒（ＬＣＭＶ），一月后测抗体效价。发现小鼠经滴鼻和腹腔接种ＬＣＭＶ均有高效价抗体产生（１：１０２４０）；大鼠经滴鼻和腹腔接种均无明显可测抗体；豚鼠腹腔接种ＬＣＭＶ易至发病，幸存者（２／５）产生高效价抗体；地鼠经滴鼻和腹腔接种ＬＣＭＶ均易致发病和死亡。

中国部分地区鼠源淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的分离、鉴定及流行病学调查

为了解中国部分地区野鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)感染情况,以便为LCMV感染的防控提供流行病学资料,试验采用qRT-PCR对采自宁夏回族自治区、山西省、吉林省、黑龙江省、浙江省、广西壮族自治区的野鼠进行检测,将获得的阳性样本接种BHK-21细胞进行病毒分离培养、电镜观察,同时扩增LCMV全基因组并构建系统发育树。结果表明,野鼠LCMV感染率高达28.9%,通过细胞分离培养获得两株LCMV毒株,命名为n2-36wanzheng株和wq-30wanzheng株,系统发育分析显示两株LCMV均属Ⅰ型LCMV。本研究进一步说明野鼠感染LCMV分布情况,为深入调查中国LCMV疫源地奠定基础。

淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒ELISA抗原制备方法的改进

使用的8仲培养细胞中仅BHK_(21)和MK_2细胞适于制备淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)ELISA抗原。文中探讨了冻融次数,细胞培养天数,维持液的成份,对ELISA包板抗原的影响。

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒研究进展

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(Lymphatic choriomeningitis virus,LCMV)属沙粒病毒科(Arenaviridae)哺乳动物沙粒病毒属(Mammarenavirus,MARV),MARV除1956年在牙买加果蝠发现的塔卡里伯病毒,其余病毒种以啮齿动物为自然宿主,10余个种引起人类的脑膜炎及致命的病毒性出血热等疾病[1]。LCMV是Armstrong和Lille于1933年发现,为沙粒病毒科最早发现的病毒[2]。

先天性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒感染

淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)是一种不易诊断的胎儿致畸剂。对于那些难以解释的婴儿和儿童的脑积水、小头或大头、颅内钙化、绒毛膜视网膜炎和非免疫的水肿应该考虑这一诊断。荧光免疫抗体试验是唯一合理的市场上已用的筛选诊断工具。先天性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒感染的鉴别诊断包括弓形虫病、风疹、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、肠道病毒、人细小病毒B12感染和梅毒。这种感染已经被误诊为各种神经类、眼科和染色体综合征。应该对人群和啮齿动物中预防这种感染进行进一步研究，也须对先天性感染的临床征象进行前瞻性研究。医务工作者可能知道野生动物、宠物和实验室啮齿动物对孕妇所造成的危害。

鼠类感染淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的RTPCR检测与N基因序列分析

目的了解宁波市梅山口岸鼠类中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）流行情况和基因序列特征。方法以LCMVN基因设计2对引物，采用RT—PCR方法对2012年宁波市梅山口岸捕获的鼠类样品进行LCMV检测，并对阳性样品的PCR产物进行测序及同源性和系统进化树分析。结果共检测53份鼠类样品，其中2份小家鼠样品为LCMV核酸阳性，分离的2株LCMV与国外LCMV分离株的同源性在75％~87％之间，与WHI株同源性最高（87％）并在系统发生树上属于同一组。结论证实当地鼠类中存在LCMV流行，新检测到的2株病毒与国外LCMV分离株存在一定差异。

鼠类携带淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的建立检测鼠类携带淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus,LCMV)的实时荧光定量RT-PCR方法。方法根据LCMV核蛋白编码基因序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧光探针,经优化反应体系和条件,建立LCMV实时荧光定量RT-PCR检测方法,然后进行灵敏度、特异性和重复性试验,并对79份宁波口岸捕获的鼠样品进行检测。结果建立实时荧光定量RT-PCR方法对鼠肺总RNA检测的灵敏度为20pg,是常规PCR方法的100倍;试验的重复性良好,CV值为0.85%;试验的特异性为100%。用该方法检测79份鼠样品有3份LCMV阳性,与常规RT-PCR结果一致。结论成功建立了鼠LCMV实时荧光定量RT-PCR检测方法,对于监测和防控鼠传LCM有重要意义。

肠道小RNA病毒组所致脑膜炎的病原体特点及其诊断

目的探索肠道小RNA病毒组所致病毒性脑膜炎的病原体特点及诊断方法。方法病毒性脑膜炎患者(病脑组)和非病毒性脑膜炎患者(对照组)为观测对象,应用反转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测脑脊液标本肠道小RNA病毒组及柯萨奇病毒(COX)。结果病脑组肠道小RNA病毒组总检出率为34.5%,其中COX为29.1%;对照组未检出此类病毒。结论RT-PCR是检测肠道小RNA病毒较实用的方法,肠道小RNA病毒组尤其是其中的COX是导致病脑的重要病原体,应列为病脑病原体常规检测。

蜱源淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的分子特征

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic chorimeningtis virus,LCMV)是一种经鼠传播的人畜共患病毒。为明确东北地区LCMV在蜱的感染本底,2015年在吉林省采集蜱534只,其中草原革蜱占43.1%;森林革蜱38.4%;长角血蜱11.4%和全沟硬蜱7.1%。将采集蜱按蜱种及地区分组,进行宏病毒组测序,发现蜱感染LCMV。通过RT-PCR检测发现吉林省LCMV蜱感染率为3.5%,其中长角血蜱、草原革蜱、森林革蜱和全沟硬蜱感染率分别为12.2%,2.5%,4.4%和2.5%,长角血蜱携带率最高。通过全基因组测序获得LCMV全基因组序列,并对其进行遗传进化分析,结果表明东北地区蜱感染的LCMV属于基因Ⅰ型,提示蜱可能作为LCMV的传播媒介。本研究确定了东北地区蜱的LCMV感染率及基因型,为LCMV的防控监测提供科学依据。

蜱源淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒半巢式PCR检测方法的建立

为建立快速、敏感的蜱源淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)检测方法,根据GenBank中已登录的蜱源LCMV NP基因序列设计半巢式PCR引物,通过优化反应条件建立半巢式PCR检测方法。结果显示,用该方法能扩增出248 bp的目的片段,与LCMV序列(MG554174)的同源性为100%。特异性试验结果显示,该方法对蜱传脑炎病毒、发热板血小板减少综合征病毒、阿龙山病毒的基因扩增无条带。敏感性试验结果显示,该方法最低可以检出0.45×10^(2)copies/μL的蜱源LCMV NP蛋白基因,是普通PCR的1 000倍。对总数为150只森林革蜱、草原革蜱和全沟硬蜱样品的检测发现,半巢式PCR、普通PCR的检出率分别是18%和0。蜱源LCMV半巢式PCR方法的建立为蜱源淋巴细胞脉络丛脑膜炎的防控提供了技术支持。

139名跨境工作人员淋巴脉络丛脑膜炎病毒和汉坦病毒感染调查分析

目的调查跨境务工人员经鼠传播淋巴脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus, LCMV )和汉坦病毒(hantavirus, HV)的感染状况, 初步评估鼠传病毒感染风险。方法本研究于2019—2020年间, 针对常年在境外从事户外工程工作的务工人员开展调查, 采集血清样本, 通过基于LCMV重组核蛋白的间接ELISA方法、免疫印迹法和基于LCMV重组糖蛋白的间接免疫荧光法检测样品血清中LCMV特异性IgG抗体, 采用检测汉坦病毒IgG抗体的商业化ELISA试剂盒和汉坦病毒感染抗原片检测血清中HV IgG抗体情况。结果共调查了139名跨境工作者, 年龄在25~57岁之间, 64%(89/139)有多个国家工作经历, 涉及26个国家, 包括14个亚洲国家和12个非洲国家, LCMV IgG抗体检出率11.51%(16/139), 阳性样本经免疫印迹法和间接免疫荧光法核实, 抗体检出率略高于类似调查中发现的人群感染率;HV抗体检出率0.72%(1/139), 但尚不能确定获得感染的时间和地区。结论本研究揭示了境外务工人员中LCMV和HV病毒感染状况和存在风险, 提示户外工程场所加强鼠传疾病防控的必要性。

淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒的研究进展

淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)于1933年被发现,本文介绍了LCMV在人群中的传播途径及流行病学现状,指出先天性感染会造成流产或对胎儿产生永久性神经损害,以及该病毒对器官移植后的供体及受体的致命性影响,同时也介绍了对该病毒现有的检测方法。提出医学工作者应认识到LCMV感染的广泛性及危害性,在某些特定的情况下,如妊娠及器官移植术后,LCMV感染可能会造成难以挽回的后果,在临床上理应得到足够的重视;新近制备出的针对LCMV表面糖蛋白GP2抗原的单克隆抗体,可以为未来的临床检测和科学研究提供新的检测途径。