凝血酶对TGF-β_1和大鼠软脑膜纤维化的相关性研究

目的研究凝血酶与转化生长因子-β1(TGF-β1)和软脑膜纤维化的相关性,探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后交通性脑积水的发生机制。方法采用凝血酶经枕大池注入大鼠蛛网膜下腔,在不同时间点,用ELASA方法测定脑脊液TGF-β1水平,经显微图像采集分析系统分析测量软脑膜胶原纤维厚度。结果凝血酶注入大鼠蛛网膜下腔后,经1d、10d、20d3个时间点测脑脊液TGF-β1浓度分别是:239.024±129.40、309.07±57.30、283.16±28.87(pg/ml),与同时间点对照组对比有显著差异(P均<0.05);软脑膜胶原纤维平均厚度分别是:3.68±0.43、4.29±0.52、5.574±0.77(μm),10d、20d与同时间点对照组对比有显著差异(P均<0.05)。结论蛛网膜下腔内注入一定量凝血酶,可引起脑脊液中的TGF-β1持续高水平表达,导致形态学上软脑膜的明显增厚。推测凝血酶是引起蛛网膜下腔出血后交通性脑积水的重要介导因素。

miR-134对蛛网膜下腔出血后软脑膜纤维化的作用

目的探究miR-134对蛛网膜下腔出血(SAH)后软脑膜纤维化的作用及其机制。方法大鼠(40只)按照随机数字表法随机分2组,即假手术组(SHAM组,n=20)和模型组(SAH组,n=20);2组脑组织采用芯片分析技术筛选差异表达的miRNAs,并采用RT-qPCR对其进行验证;使用miRDB软件预测miR-134的靶蛋白,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-134对TGF-β1的靶向作用。采用western blot和RT-qPCR检测miR-134过表达和低表达的血管内皮细胞RAOEC中TGF-β1和CollagenⅠ表达。12只SAH大鼠随机分4组,各组颅骨后分别注射空白慢病毒(空白慢病毒组,n=3)、Lv-miR-134(Lv-miR-134组,n=3)、Lv-TGF-β1(Lv-TGF-β1组,n=3)和Lv-miR-134+siRNA-TGF-β1(Lv-miR-134+siRNA-TGF-β1组,n=3),Masson染色观察各组软脑膜组织的纤维化。结果与SHAM组比较,SAH组miR-134表达降低,TGF-β1和CollagenⅠ的蛋白和mRNA表达增高(均P<0.05)。miR-134能够与TGF-β1的3′-UTR区域直接结合,并抑制其活性。血管内皮细胞中miR-134抑制TGF-β1和CollagenⅠ的蛋白和mRNA表达(P<0.05)。与空白慢病毒组相比,Lv-miR-134组、Lv-miR-134+siRNA-TGF-β1组的纤维化程度降低(P<0.05),而Lv-TGF-β1组纤维化程度升高(P<0.05)。结论miR-134通过调控TGF-β1抑制SAH后软脑膜纤维化。

MiR-29c在大鼠蛛网膜下腔出血后抑制柔脑膜纤维化的实验研究

目的探讨miR-29c在蛛网膜下腔出血(SAH)后柔脑膜纤维化过程中的作用。方法选用健康雄性SD大鼠26只按随机数字表法分为假手术组(6只)、空白慢病毒组(8只)、LV-rno-miRNA-29c组(12只)。侧脑室分别注入5μL生理盐水、空白慢病毒、LV-rno-miRNA-29c,注射1周后,通过枕大池二次注血法建立蛛网膜下腔出血模型。造模21 d后处死大鼠,采用Realtime PCR法检测柔脑膜内转化生长因子β1(TGF-β1)及miR-29c表达量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑脊液(CSF)中Ⅰ型胶原前端肽(PICP)含量,柔脑膜Masson染色观察柔脑膜胶原纤维。结果 SAH后柔脑膜中TGF-β1表达升高,miR-29c表达下调;上调miR-29c能显著抑制脑脊液中PICP及柔脑膜中胶原表达。结论维持miR-29c高表达可抑制SAH后柔脑膜胶原合成,从而治疗柔脑膜纤维化。

转化生长因子-β_1对大鼠脑膜间皮细胞结缔组织因子表达的影响

目的观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠软脑膜间皮细胞(RLMCs)结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法体外培养RLMCs,并将其分为4组:(1)0组(正常对照组):用无血清培养基(FSM)培养细胞;(2)1组:用含TGF-β11 ng/ml培养细胞;(3)2组:用含TGF-β12 ng/ml培养细胞;(4)3组:用含TGF-β14 ng/ml培养细胞;各组分别在TGF-β1刺激6、12及24 h后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定CTGF mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western blot)测定CTGF蛋白表达。数据以平均值±标准差(x珋±s)表示,各个浓度点组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),两两比较采用最小显著法(LSD)检验,以P<0.05有统计学意义。结果在6、12及24 h分别以TGF-β11 ng/mL、2 ng/mL、4 ng/mL处理,CTGF mRNA表达水平与对照组比较,差异具有显著性(F6h=46.549、F12h=287.098、F24h=109.202,P均<0.001),呈剂量依赖性,以TGF-β1处理12 h组CTGF mRNA表达差异明显。western blotting:正常对照组RLMCs细胞和不同浓度的TGF-β1刺激后均表达CTGF蛋白,在TGF-β1刺激6、12及24 h后,各组均随着浓度的增加而增加,差异有显著性(F6h=52.988、F12h=95.331、F24h=157.107,P均<0.001),呈剂量依赖性,以TGF-β1处理6 h组CTGF蛋白表达差异明显。结论 TGF-β1能诱导RLMCs中CTGF通路激活。TGF-β1刺激RLMCs中CTGF mRNA和蛋白的表达,而且随浓度增加而显著。CTGF可能作为神经系统疾病中抑制脑膜纤维化的靶点而进一步研究。