sB7H3在盲肠结扎穿孔脓毒症小鼠模型的表达特征及其意义

目的探索sB7H3在盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症小鼠血清表达特征及其意义。方法CLP法建立模型,50只健康昆明小鼠随机分为CLP组(术后12 h、术后24 h和术后48 h)、假手术组和对照组。CLP组、假手术组和对照组每组10只小鼠。术后12 h、24 h和48 h分别选取不同组别小鼠;先摘眼球取血,再收集腹腔灌洗液送培养。ELISA法检测血清C反应蛋白(CRP)、纤维蛋白原(FIB)和sB7H3水平。结果CLP组CRP和sB7H3均高于相应的对照组和假手术组(P<0.05),CLP组FIB均低于相应的对照组和假手术组(P<0.05)。CLP组内,术后48 h CRP均高于术后12 h和术后24 h(P<0.05),但术后12 h和术后24 h间CRP差异无统计学意义。CLP组内,术后48 h FIB低于术后12 h和术后24 h(P<0.05),但术后12 h和术后24 h FIB间差异无统计学意义。CLP组内,术后48 h sB7H3均高于术后12 h和术后24 h(P<0.05),术后24 h sB7H3也显著高于术后12 h(P<0.05)。CLP组腹腔灌洗液培养结果均为阳性,对照组和假手术组腹腔灌洗液培养结果均为阴性。结论盲肠结扎穿孔小鼠模型是研究脓毒症的可靠动物模型,sB7H3可能参与脓毒症进展。

优化围术期管理制作盲肠穿孔法小鼠脓毒症模型

目的通过模拟贴近临床围术期的护理技巧、管理经验和注意事项,建立标准化和规范化的小鼠盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症动物模型术后管理模式,评价其对于模型建立的影响。方法将BALB/C雄性小鼠随机分为对照组和实验组,每组15只,制作CLP模型(盲肠结扎长度1 cm,12 G针头贯穿2孔)。术前2组小鼠给予常规喂养,实验组小鼠术后采用保温、补液、伤口护理等方式处理;对照组小鼠术后不作处理。记录2组小鼠术后7 d的体质量、采食量、动物状态、存活率。结果实验组小鼠建模后在体质量恢复、采食量和动物状态方面均明显优于对照组(P<0.05);同时实验组小鼠术后7 d存活率为80.0%,显著高于对照组的53.3%(P<0.05)。结论将围术期管理经验用于小鼠脓毒症模型的建立,有助于提升动物实验的质量和效率,可避免因术后意外事件导致模型动物的非计划死亡,干扰对结果的判断,同时也更为贴近临床脓毒症患者的治疗管理措施,为标准化脓毒症动物模型的建立与应用提供借鉴。

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对脓毒症模型小鼠的治疗作用

背景:研究发现粒细胞集落刺激因子可以用于治疗粒细胞减少症,关于粒细胞集落刺激因子治疗脓毒症的研究不多。目的:探讨重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对脓毒症小鼠的治疗作用。方法:采用腹腔内注射脂多糖的方法建立脓毒症小鼠动物模型,建模后6,30 h皮下注射重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,观察小鼠的肺组织病理变化、外周血中性粒细胞CD64表达以及血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素10水平。结果与结论:(1)治疗后小鼠支气管上皮尚完整,间质轻度增生,见少量中性粒细胞浸润;(2)治疗后1,3,7 d治疗组小鼠外周血中性粒细胞CD64的表达和血清白细胞介素10水平显著高于模型组和正常对照组(P<0.05);(3)治疗后1,3,7 d治疗组小鼠血清肿瘤坏死因子α水平明显高于正常对照组(P<0.05),但低于模型组(P<0.05);(4)结果表明,重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子具有增强脓毒症小鼠中性粒细胞功能和抗炎作用。

低体温脓毒症小鼠模型建立及体温变化在急性感染中的意义

目的:建立小鼠稳定脓毒症低温模型并对其温度变化在感染中的意义进行研究。方法:首先用不同剂量志贺菌感染小鼠腹腔,测量体温变化和死亡率;之后通过检测血清中促炎和抗炎的细胞因子水平,对感染后小鼠的炎症反应进行分析,并通过血容量及脏器病理切片评价小鼠感染后机体的损伤;最后,通过对脓毒症小鼠采取提前免疫或抗生素治疗等干预措施,检测不同感染程度下小鼠的存活率和体温变化。结果:随着感染剂量的增加,小鼠体温显著降低,死亡率升高;感染后血清中炎症因子水平升高,其中以促炎因子IL-6和IFN-γ为主,二者均达到104数量级;机体血容量显著降低,并出现肾小管上皮细胞水肿;在感染前给予志贺菌多糖结合疫苗进行预防性和感染后给予卡那霉素进行治疗性干预后,小鼠存活率均明显提升,同时低体温症状得到显著缓解。结论:通过小鼠腹腔感染病原细菌能够建立稳定的低温脓毒症模型,为脓毒症导致体温过低研究提供思路;同时,体温的变化与小鼠感染程度及存活率具有相关性,可作为判断脓毒症严重程度的便捷的指标和依据。

小鼠脓毒症模型的建立和评价

目的建立小鼠脓毒症模型并进行评价,为研究脓毒症致病机制和开发抗炎药物提供模型动物。方法采用盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)诱导小鼠脓毒症,通过动物生存、术后小鼠载菌量、血常规和血生化指标、细胞因子水平、组织病理变化等方面对模型进行评价。结果小鼠的死亡率与盲肠结扎部位密切相关,盲肠结扎50%小鼠12 d存活率在40%左右,结扎75%小鼠4 d全部死亡(P<0.01)。与假手术组相比,50%结扎CLP小鼠血液和腹腔中载菌量增加,白细胞下降,差异有显著性(P<0.001)。CLP小鼠肝转氨酶ALT、AST和血清尿素氮BUN水平升高,差异具有显著性(P<0.01),炎症因子IL1α、IL6、IL10、MIP1α、MIP1β、TNFα水平升高。手术后48 h小鼠的肝和肺出现明显组织病理损伤。结论小鼠CLP模型具有典型的脓毒症病理特征,为后期研究抗炎药物的筛选提供了较好的动物模型。

Tocilizumab下调NF-κB/JNK减轻急性肺、肾损伤的效果与对脓毒症小鼠模型存活率的影响

研究分析Tocilizumab通过下调NF-κB/JNK减轻急性肺和肾损伤并提高脓毒症小鼠模型的存活率。方法 本次研究选择同一实验室的48只雄性C57BL/6小鼠作为此次研究对象,随机分成两组,并运用盲肠扎穿孔法(CLP)建立脓毒血症动物模型,视为CLP组,另一只作为假手术(SMAM)组,组间平均分配,每组各24只,根据给药方式不同分为SHAM组和两SHAM+TCZ组、CLP组和两CLP+TCZ,共6小组,每组8只。CLP组小鼠采取结扎盲肠全长,使用无菌针头穿刺3处,SHAM组采取剖腹术。脓毒血症动物模型分为CLP组、CLP+TCZ (Tocilizumab注射4 mg/kg)、CLP+TCZ (Tocilizumab注射8mg/kg) 。假手术组:SHAM组、SHAM+TCZ (Tocilizumab注射4 mg/kg) 组、CLP+TCZ (Tocilizumab注射8mg/kg)。观察6小组急性肺和肾损伤情况以及小鼠模型的存活率。结果 CLP+TCZ (8mg/kg)W/D、肺损伤评分均优于其他组别,(P<0.05)视为差异具有统计学意义。 CLP+TCZ (8mg/kg)血清肌酐、血尿素氮肾功能指标均优于其他组别,(P<0.05)视为差异具有统计学意义。CLP+TCZ (8mg/kg)IL-6、IL-Iβ、TNF-α炎性因子水平均优于其他组别,(P<0.05)视为差异具有统计学意义。Tocilizumab治疗可明显提高脓毒症小鼠的存活率,(P<0.05)视为差异具有统计学意义。结论 Tocilizumab通过下调NF-κB/JNK可减轻急性肺和神损伤并且可提高脓毒血症小鼠模型的存活率,为脓毒血症的治疗以及药物研发提供研究基础。

基于中国知网文献计量分析脓毒症小鼠模型的研究

目的对近年国内高水平脓毒症小鼠实验研究进行文献计量分析,了解其应用状况、发展趋势及存在的问题,对推进脓毒症临床前期研究提供参考。方法对2019年1月至2022年4月期间国内中国知网(CNKI)双核心期刊(即北大中文核心、中国科学引文数据库和中国科技核心期刊同时具备其中任意二者)中脓毒症方向运用小鼠的研究进行整理计量,分析目前国内脓毒症小鼠模型的品系应用、性别分布、机制方向及造模手段等现状。结果共得到来自53家期刊的126篇运用脓毒症小鼠模型的实验研究,其中脓毒症脑损伤为近期的研究热点(34篇,26.98%),新兴的研究机制以细胞焦亡、肠道菌群及铁死亡为主。研究中所用小鼠品系以C57亚系为主(89/126),C57BL/6最多(54/89);研究多采用单雄性小鼠设计(110,87.30%);造模方式以盲肠结扎手术(CLP)法为主(84,67.2%),但各研究盲肠结扎位置。穿刺次数和针头型号存在较大差异;其次为脂多糖(LPS)注射法(39,31.2%)。结论目前国内脓毒症小鼠实验研究中小鼠的品系背景、性别构成、所处年龄和造模手段均存在较大差异,且存在国内研究人员普遍不够重视,报道常有缺失,造成研究结果复现能力不佳、难以推广转化等问题。急需对脓毒症模型造模手段的标准化展开相应研究,并推出成体系的模型报告标准,这是研究可重复性和可信度的基础保证。

氢气吸入对重度脓毒症小鼠血清高迁移率族蛋白B1水平的影响

目的:观察重度脓毒症小鼠吸入氢气后的存活情况及其血清高迁移率族蛋白B1(highmobility group box1,HMGB1)的水平,探讨氢气对脓毒症动物器官功能保护作用的分子学机制。方法:采用盲肠结扎穿孔术诱导的小鼠重度脓毒症模型。248只小鼠随机分为4组:假手术组、假手术+氢气吸入组、重度脓毒症组和重度脓毒症+氢气吸入组。氢气治疗分别为盲肠结扎穿孔术或假手术后1 h和6 h吸入2%氢气1 h。观察各组小鼠不同时间点生存率和血清HMGB1水平的变化。结果:重度脓毒症小鼠的7 d生存率为0%(P<0.05),且不同时间点血清HMBG1明显升高(P<0.05);氢气治疗可使重度脓毒症动物的7 d生存率升高至60%(P<0.05),且使血清HMBG1的水平明显降低(P<0.05)。结论:氢气吸入能降低重度脓毒症小鼠血清的HMGB1水平并提高其生存率。

升结肠支架置入腹膜炎脓毒症模型的应用研究

目的探讨建立研究脓毒症发病机制的动物模型。方法采用3种型号管径的静脉留置BD套管针做为支架构建脓毒症的动物模型,通过术后一般表现、不同管径支架的CASP模型的生存时间及生存率、各器官HE染色行组织病理学的检测、腹腔分泌物微生物实验室检查比较升结肠支架置入腹膜炎脓毒症模型的严重程度及稳定性。结果CASP模型各组的生存时间取决于置入支架的直径,支架直径越大死亡率越高,24h解剖发现腹腔呈明显腹膜炎表现;组织病理切片结果显示小肠黏膜明显坏死脱落、绒毛萎缩,心、肺、肾、脾脏有炎性细胞浸润等炎症表现;腹腔内分泌物培养检测到肠道细菌如革兰阴性大肠埃希氏菌、杆菌种、肠球菌。结论升结肠支架置入腹膜炎模型,操作简单,具有可重复性,可以模仿人类弥漫性腹膜炎疾病过程,适用于外科脓毒症的研究。

血必净对免疫抑制脓毒症模型的保护作用

目的观察血必净对免疫抑制脓毒症小鼠的影响。方法使用随机数字表法将152只小鼠分为对照组(Control)、免疫抑制组(IM)、免疫抑制脓毒症模型组(ISM)、血必净治疗组(XT),每组38只小鼠。IM组沿下腹正中线旁边腹腔注射环孢素A免疫抑制,25 mg/kg,隔日1次,共3次。ISM组免疫抑制后沿下腹正中线旁边腹腔注射300μL浓度为1×109CFU/mL的大肠杆菌44102;XT组免疫抑制脓毒症造模后30 min,沿下腹正中线旁边腹腔注射血必净4mL/kg,30 min后按相同剂量重复注射1次;Control组注射等体积的生理盐水。(1)造模8 h,各组取4只小鼠,进行血细菌培养。(2)造模12 h,各组取10只小鼠,使用流式细胞法检测外周血CD3^+CD4^+和CD3^+CD8^+。(3)造模12 h,各组取10只小鼠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6。(4)造模12 h,各组取4只小鼠,采用蛋白免疫印迹法测定高迁移率蛋白(HMGB1)。(5)造模12 h,各组取10只小鼠,使用全自动分析仪检测外周血丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、血肌酐(CR)。结果与ISM组相比,XT组的CD3^+CD4^+/CD3^+CD8^+的比值明显升高,血细菌培养数量明显降低;肝肾功能指标ALT、AST、CR、BUN和炎症指标TNF-α、IL-6、HMGB1均明显下降。结论血必净能够明显调节免疫抑制脓毒症小鼠的免疫系统,对抗细菌,抑制炎症反应,并对重要器官有保护作用。

脓毒症动物模型的制备方法及影响因素

脓毒症是常见的急危重症,其致病机制复杂,常涉及全身多个器官、系统,其中炎性反应、免疫功能紊乱、凝血功能障碍等多种因素联结成相互联系、相互影响的网络系统,加重病情进展。目前脓毒症病死率约25%,严重威胁人类健康。建立稳定可靠的脓毒症实验动物模型是了解感染早期宿主防御调控机制、病情进展期宿主反应失调机制及研究新型药物治疗效果的重要手段。目前脓毒症动物模型的建立方法种类繁多,且影响因素较多。本文就脓毒症动物模型的制备方法及影响因素进行综述,以期为研究者选择合适的动物模型提供参考。

姜黄素抵抗脓毒症心肌损伤新机制探究

目的探究姜黄素是否通过激活线粒体去乙酰化酶3(SIRT3)信号通路逆转脓毒症心肌损伤。方法通过盲肠结扎穿孔构建小鼠脓毒症模型。SIRT3特异性抑制剂3-TYP(50 mg/kg)和姜黄素(80 mg/kg)于术前3 d每日通过腹腔注射给予,共给药3次。术后2 d检测心脏功能、氧化应激损伤和凋亡相关指标、SIRT3信号通路表达情况。结果与假手术组小鼠相比,脓毒症小鼠心肌组织内SIRT3表达明显降低,伴随其下游分子超氧化物歧化酶2(SOD2)的乙酰化水平明显增加。此外,与假手术组小鼠相比,脓毒症小鼠心功能明显受损,心肌氧化应激和凋亡水平明显提高。姜黄素预处理可以明显改善脓毒症小鼠心脏功能,抑制心肌氧化应激损伤和凋亡并激活SIRT3信号通路。而抑制SIRT3信号通路后,姜黄素的心肌保护作用明显减弱。结论SIRT3/SOD2信号通路介导姜黄素抗氧化应激损伤和细胞凋亡,进而抗脓毒症心肌损伤的作用。

一种改良小鼠脓毒症模型的建立

目的建立一种模拟外科临床实际，早期致死率低，用于脓毒症综合治疗研究的小鼠模型。方法小鼠随机分为3组，即对照组、盲肠结扎穿孔（CLP）组和改良组。对照组行假手术；CLP组行盲肠结扎穿孔术；改良组通过CLP后8h行盲肠切除和腹腔生理盐水冲洗建立脓毒症模型。观察各组动物出现死亡时间及24、48、72h累计死亡率；术后4、12、24h分别处死动物，检测外周血白细胞计数（WBC），血清内毒素、肿瘤坏死因子（TNF）水平及肺、肝病理。结果改良组动物出现死亡时间较CLP组明显延迟，术后48、72h累计死亡率虽明显低于CLP组（P〈0．05），但仍分别高达53．3％、80％；术后各时间点WBC较CLP组与假手术组明显升高（P〈0．05）；血清内毒素和TNF-α水平明显高于假手术组，但低于CLP组；光镜下见肺泡间隔增宽，间质充血、水肿、大量炎性细胞浸润，肝细胞水肿伴散在点状坏死，肝窦扩张伴间质大量炎性细胞浸润。结论该脓毒症改良模型具有良好的外科临床相关性，早期致死率低，可重复性好。

一种小鼠弥漫性腹膜炎致脓毒症模型的建立

本研究旨在建立一种小鼠升结肠置管致弥漫性腹膜炎的脓毒症（CASP）实验动物模型，为脓毒症临床实验提供参考。

脓毒症心肌损伤小鼠模型的建立和评价

目的通过腹腔注射脂多糖（LPS）建立脓毒症心肌损伤小鼠模型，为脓毒症心肌损伤的发病机制研究提供一个稳定、可靠的实验手段。方法将150只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常对照组（NC组）、假手术组（Sham组）及LPS 10、12、15 mg/kg模型组，每组30只。经腹腔注射相应剂量LPS制备脓毒症心肌损伤模型；Sham组注射等量生理盐水；NC组不进行任何处理。每组15只用于观察制模前后的一般状况，于制模后24 h行心脏超声检查心功能，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清cTnI水平，观察心肌组织形态学和超微结构改变；其余15只用于观察制模后7 d死亡情况。结果腹腔注射LPS后，小鼠均出现精神萎靡、毛发竖立、腹泻等脓毒症表现。与NC组比较，LPS 10、12、15 mg/kg组左室射血分数（LVEF）、左室缩短分数（LVFS）均显著降低〔LVEF：0.459±0.044、0.432±0.034、0.348±0.064比0.588±0.019，LVFS：（22.36±2.60）%、（20.78±1.91）%、（16.27±3.31）%比（30.55±1.30）%，均P〈0.01〕，血清cTnI水平显著增高（ng/L：270.40±43.50、281.14±41.79、298.39±42.05比192.59±16.90，均P〈0.01）。各剂量LPS组小鼠均出现心肌组织损伤，光镜下观察可见心肌纤维变性，间质水肿、出血，炎性细胞浸润等改变，透射电镜下观察可见心肌纤维排列紊乱、线粒体肿胀和嵴减少等改变，且LPS剂量越高损伤越严重。Sham组各指标与NC组比较差异均无统计学意义。LPS 10、12、15 mg/kg组小鼠制模后7 d死亡率分别为33.3%、53.3%、86.7%；NC组及Sham组小鼠无死亡。结论以腹腔注射12 mg/kg LPS建立脓毒症心肌损伤小鼠模型较为理想。

氢气吸入对严重脓毒症小鼠血清炎性因子和肠损伤的影响

目的：探讨氢气吸入对严重脓毒症小鼠血清炎性因子和肠损伤的影响以及作用机制。方法按随机数字表法将176只雄性ICR小鼠分为4组：假手术组、氢气对照组（假手术＋氢气吸入）、模型组（严重脓毒症模型）和氢气治疗组（严重脓毒症模型＋氢气吸入），每组44只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）诱导小鼠严重脓毒症模型；氢气吸入为假手术或制模后1h和6h分别吸入2%氢气1h。各组取20只小鼠观察7d存活率；剩余小鼠分别于制模后6、12、24、48 h心脏取血后各处死6只，测定血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-6、IL-10）和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）水平；光镜下观察小肠组织病理学改变并进行评分，检测肠组织髓过氧化物酶（MPO）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的活性。结果严重脓毒症小鼠7 d存活率为0；氢气治疗组小鼠7 d存活率提升至60%，与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。与假手术组比较，模型组制模后各时间点血清TNF-α、IL-6、IL-10、HMGB1含量均明显升高；肠组织损伤严重，且病理评分较高；肠组织MPO和caspase-3活性也均明显增高（均P＜0.05）。与模型组比较，氢气治疗组血清TNF-α、IL-6和HMGB1含量明显降低〔TNF-α（ng/L）：6 h：110.34±9.28比440.55±25.78，12 h：82.29±8.43比448.36±32.54，24 h：79.68±9.04比346.42±22.24，48 h：80.79±10.06比368.94±31.58；IL-6（ng/L）：12 h：58.68±8.55比158.28±16.73，24 h：46.98±7.58比146.74±18.02，48 h：38.67±8.22比136.45±15.45；HMGB1（μg/L）：6 h：15.75±4.32比55.56±10.04，12 h：32.02±9.33比89.65±15.65，24 h：35.87±8.54比86.44±20.33，48 h：23.85±9.83比98.33±18.88，均P＜0.05〕，血清IL-10含量（ng/L）于制模后24 h和48 h明显升高（24 h：135.44±16.43比79.22±12.03，48 h：110.92±12.54比74.47±11.18，均P＜0.05），肠组织损伤减轻，病理评分（分）明显降低（12 h：1.70±0.06比3.23±0.44，24 h：2.12±0.31比4.51±0.58，48 h：2.03±0.42比4.27±0.58，均P＜0.05），肠组织MPO和caspase-3活性均明显降低〔MPO （U/g）：6 h：13.75±4.21比25.56±5.34，12 h：14.72±4.22比30.53±6.87，24 h：11.62±3.14比33.58±7.24，48 h：11.33±4.03比38.57±8.12；caspase-3（荧光强度）：6 h：0.37±0.07比0.69±0.23，12 h：0.42±0.07比0.86±0.13，24 h：0.53±0.11比1.36±0.23，48 h：0.50±0.08比1.48±0.15，均P＜0.05〕。结论氢气吸入能够降低严重脓毒症小鼠全身炎症反应并减轻由其引起的肠组织损伤，从而改善脓毒症进程，提高存活率。

清热解毒方对脓毒症大鼠机体免疫状态的影响

在脓毒症的初始阶段,脓毒症以大量分泌炎性介质为主要特征,而随着脓毒症的进展,机体可能经历了一个免疫抑制阶段,由此引起的迅速出现且难以控制的继发性感染是引起脓毒症患者死亡重要原因之一。目前认为,Th1和Th2细胞功能的改变能够反映机体的免疫功能状态,而Treg作为免疫系统的重要调节细胞之一,可能与脓毒症早期细胞免疫抑制有关。中药治疗在脓毒症的防治中展现了良好的疗效,这与其免疫调理功能密切相关。本研究以大鼠腹腔感染致脓毒症模型为研究对象。

肾脏的细胞疗法

国外在肾脏血液滤过装置的基础上,又模拟肾脏的代谢、内分泌、免疫功能,成功地设计了肾小管辅助设施(RAD),主要包括常规的透析膜和容纳有肾近曲小管细胞在内的生物反应器。大量的动物试验证实此装置中这些活细胞具有部分代谢、免疫功能,并且在两种脓毒症动物模型中显示出增高的存活率。目前已完成对人类急性肾衰的临床Ⅰ期实验。