135例脓毒症急性肺损伤患者证候分布规律与中医诊疗理论认识思考

目的探讨脓毒症急性肺损伤患者的中医证候分布规律与特征,为临床提供辨证论治依据。方法采用回顾性研究方法,收集山东中医药大学附属医院2017年1月至2020年12月脓毒症急性肺损伤患者临床资料,设计中医证候调查表,建立数据库,运用SPSS26.0软件统计分析。结果共收集135例患者病历,平均年龄(64.38±17.61)岁,61~80岁年龄段患者最多。28 d生存患者占比61%,平均年龄(57.78±17.86)岁;死亡患者占比39%,平均年龄(70.98±17.37)岁。主要基础疾病以高血压病、心脑血管疾病、糖尿病居多。单一证候例数:热毒证>痰热证>血瘀证>腑实证>气虚证>痰浊证>阳虚证>阴虚证。复合证候例数:两种证候复合>3种证候复合>1种证候。两种证候复合以热毒证+腑实证最多,3种证候复合以热毒证+痰热证+腑实证最多,1种证候以热毒证最多。证候虚实例数:实证>虚实夹杂证>虚证,生存率相反。结论基本病机为邪实正虚,肺失宣降。病理性质总属标实本虚。病理因素包括热毒、痰、瘀。证型以热毒、痰浊、血瘀、腑实等实证为主,以复合证候多见,虚实夹杂证尤其是虚证多预后不良。脓毒证急性肺损伤治疗应以清热、化痰、活血、通腑为主,辅以益气、温阳、养阴,年老患者尤其需要扶助正气。本病病情复杂,应从整体出发,进一步把握疾病全过程证候演变规律,丰富完善辨证体系。

化纤胶囊Ⅱ号方治疗脓毒症急性肺损伤疗效及对患者血管内皮细胞功能、毛细血管渗漏指数的影响

目的:探讨化纤胶囊Ⅱ号方治疗脓毒症急性肺损伤疗效及对患者血管内皮细胞功能、毛细血管渗漏指数的影响。方法:选取80例脓毒症急性肺损伤患者并采用随机数字表法均分为对照组(n=40)和观察组(n=40)。对照组给予规范西医治疗,观察组在对照组基础上加用化纤胶囊Ⅱ号方治疗。对两组临床效果进行比较,并观察治疗前后病情严重程度[急性生理学和慢性健康状况评分(APACHEⅡ)和Murray肺损伤评分(mlIS)]、中医症状积分、血气[动脉血氧分压(PaO_(2))、氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))]及呼吸功能指标[血管外肺水指数(EVLWI)、肺血管通透指数(PVPI)]、血管内皮细胞功能[血清血管性假血友病因子(vWF)、血栓调节蛋白(TM)、内皮素-1(ET-1)]及毛细血管渗漏指数(CLI)。结果:两组临床总有效率(85.00%与65.00%)比较,观察组高于对照组(P<0.05);治疗后,两组中医症状积分、APACHEⅡ和mlIS评分均低于治疗前(P均<0.05),但观察组中医症状积分、APACHEⅡ和mlIS评分均低于对照组(P<0.05);治疗后,两组血气指标(PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2))均明显上升、呼吸功能指标(EVLWI、PVPI)明显下降(P<0.05),且观察组血气、呼吸指标改善优于对照组(P<0.05);治疗后,两组血管内皮细胞功能(vWF、TM、ET-1水平)及毛细血管渗漏指数(CLI)均明显下降(P<0.05),且观察组血清vWF、TM、ET-1水平及CLI均低于对照组(P<0.05)。结论:化纤胶囊Ⅱ号方可提高脓毒症急性肺损伤治疗效果,并可稳定病情,改善患者血气及呼吸指标,修复和保护血管内皮细胞功能,降低毛细血管渗漏指数。

中药注射剂和中药提取物治疗脓毒症急性肺损伤的研究进展

脓毒症急性肺损伤是一种危及生命的疾病并发症,当身体对感染作出反应时出现,目前是重症监护病房死亡的主要原因。近年来,中药在脓毒症急性肺损伤治疗中的应用趋势日益广泛,强调使用中药的主要功效及有效成分来平衡对感染的免疫反应,包括清热和毒素,增强身体抵抗力。本文概述了中药注射剂和中药提取物在脓毒症急性肺损伤治疗中的应用现状,总结中药治疗脓毒症肺损伤的作用机制,提出了应用中药治疗脓毒症急性肺损伤的建议,为临床研究和基础研究提供更多的思路和方向。

电针预处理对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织中 NEK7- NLRP3炎症小体激活的影响

目的观察电针预处理“足三里”穴和“尺泽”穴对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中NEK7-NLRP3炎症小体激活的影响,探讨电针预处理在脓毒症ALI中发挥的保护效应及可能机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、电针预处理+对照组、模型组、电针预处理+模型组,每组10只。各模型组采用腹腔注射脂多糖(LPS)的方法建立脓毒症ALI大鼠模型。各电针预处理组于LPS造模前1周进行连续7 d电针预处理,疏密波,频率4 Hz/20 Hz,强度1~2 mA,持续30 min。检测各组大鼠肺功能;HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化;测定大鼠肺组织湿/干质量比值(W/D);ELISA法检测大鼠血浆及肺组织中炎症因子IL-1β、IL-18含量;免疫荧光观察大鼠肺组织中ASC蛋白阳性表达;Western blot法检测大鼠肺组织中NEK7、NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组大鼠用力肺活量(FVC)、第0.1秒用力呼气量(FEV_(0.1))、第0.3秒用力呼气量(FEV_(0.3))、FEV_(0.1)/FVC、FEV_(0.3)/FVC均显著降低(P<0.001);肺泡结构紊乱,肺组织内炎性细胞浸润明显,肺组织充血水肿;W/D比值显著升高(P<0.001);血浆及肺组织内IL-1β、IL-18含量明显升高(P<0.001);ASC蛋白阳性表达明显增多(P<0.001);肺组织中炎症小体相关蛋白NEK7、NLRP3、Caspase-1及IL-1β的表达水平均显著升高(P<0.001)。与模型组相比,电针预处理+模型组大鼠FVC、FEV_(0.1)、FEV_(0.3)、FEV_(0.1)/FVC、FEV_(0.3)/FVC均明显升高(P<0.05,P<0.001);肺组织内炎症细胞浸润及充血水肿有明显改善;W/D比值显著降低(P<0.01);血浆及肺组织内IL-1β、IL-18含量显著降低(P<0.01,P<0.001);ASC蛋白阳性表达降低(P<0.001);肺组织中炎症小体相关蛋白NEK7、NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达水平均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论电针预处理可以减轻肺部炎性反应,改善肺功能,其机制与电针抑制脓毒症ALI大鼠肺组织中NEK7-NLRP3炎症小体激活相关。

程序性死亡受体1与T细胞及其亚群比率的变化对脓毒症急性肺损伤患者的影响

目的探讨脓毒症急性肺损伤患者程序性死亡受体1(PD-1)与T细胞及其亚群间的关系。方法选取2021年1月至2022年1月医院收治的30例脓毒症急性肺损伤患者为研究组,选取同期30例脓毒症无急性肺损伤患者为对照组、30名健康体检者为空白组。收集3组外周静脉血样本、序贯性脏器衰竭评价(SOFA)评分和急性生理和慢性健康状况(APACHEⅡ)评分,比较3组炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和C反应蛋白(CRP)]水平,CD4^(+)、CD8^(+)和CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞数量及PD-1阳性表达情况,并分析CD4^(+)、CD8^(+)和CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞数量及PD-1阳性表达情况对脓毒症急性肺损伤患者不同预后的影响。结果对照组、研究组的IL-6、CRP、TNF-α水平高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组、研究组CD4^(+)、CD8^(+)及CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞计数比较,差异有统计学意义(P<0.05);对照组和研究组在CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞表面的PD-1阳性表达情况与APACHEⅡ、SOFA评分比较,差异均有统计学意义(P<0.05);CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞表面PD-1水平与APACHEⅡ、SOFA评分呈正相关(P<0.05)。死亡患者CD4^(+)PD-1、CD8^(+)PD-1、CD4^(+)CD25^(+)PD-1水平均高于生存患者,差异均有统计学意义(P<0.05);CD4^(+)PD-1预测患者不良预后的灵敏度、特异度为72.19%、84.61%;CD8^(+)PD-1的灵敏度、特异度为84.61%、72.26%;CD4^(+)CD25^(+)PD-1的灵敏度、特异度为60.31%、81.43%。结论脓毒症急性肺损伤患者CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)CD25^(+)细胞计数显著改变,CD4^(+)PD-1、CD8^(+)PD-1、CD4^(+)CD25^(+)PD-1表达增加且对脓毒症急性肺损伤患者预后具有一定的预测价值。

脓毒症急性肺损伤的中医药治疗进展

随着近年来脓毒症急性肺损伤诊治的不断深入,单纯采取西医治疗未能显著地改善其预后。在我国传统医学中,脓毒症急性肺损伤属于中医"喘证""暴喘""喘脱"的范畴,而"整体观念""阴平阳秘"等传统中医理论在脓毒症急性肺损伤的诊疗过程中亦得到了越来越多的重视,近年来临床上不断采取加用中医药对其进行联合治疗取得了显著的疗效,使中医药在治疗脓毒症急性肺损伤方面发挥了重要的作用。文章从中药复方、中成药及中药单体方面就近年来脓毒症急性肺损伤的中医药治疗进展做一综述。

五味子乙素对脂多糖诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织病理损伤、炎症反应和核因子-κB表达的影响

目的观察五味子乙素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织病理损伤、炎症反应和核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)表达的影响。方法采用气管滴注40 mg/kg LPS制备大鼠急性肺损伤大鼠模型,手术前1 h腹腔注射80 mg/kg五味子乙素进行干预治疗,测定大鼠肺湿/干质量比,BCA试剂盒测定大鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalceolar lavage fluid,BALF)总蛋白,牛鲍氏计数板计算BALF中白细胞数,苏木精-伊红染色观察大鼠肺组织损伤情况,ELISA法检测大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)含量,相关试剂盒检测大鼠肺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,蛋白质印迹法检测大鼠肺组织中NF-κB p65、磷酸核因子-κB抑制蛋白(phosphorylation inhibitor of nuclear factor kappa-B,pIκBα)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的表达水平。结果与模型组相比,五味子乙素组大鼠肺湿/干质量比、BALF中总蛋白含量及白细胞数均显著减少(P<0.05),病理损伤显著减轻,TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著减少(P<0.05),MDA含量显著下降,SOD活性显著升高(P<0.05),NF-κB p65、pIκBα和TLR4表达水平均显著下调(P<0.05)。结论五味子乙素能够减轻LPS诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织的病理损伤,抑制炎症反应和氧化应激反应,抑制NF-κB通路激活。

血必净对脓毒症急性肺损伤大鼠氧化应激及炎性因子表达的影响

目的探讨血必净对脓毒症急性肺损伤大鼠氧化应激及炎性因子表达的影响。方法大鼠随机均分为三组:假手术组(C组)、脓毒症组(CLP组)和血必净组(XBJ组)。XBJ组于CLP前3 d腹腔注射血必净。CLP后24 h每组麻醉下留取大鼠肺组织。采用对应试剂盒测定大鼠肺组织ROS及SOD活性,ELISA法测定大鼠肺组织HMGB1水平。观察大鼠术后7 d的生存率。结果与C组比较,CLP组大鼠肺组织ROS活性增高,SOD活性降低,HMGB1水平升高,术后7 d的生存率明显降低(P<0.05);与CLP组比较,XBJ组大鼠肺组织ROS活性降低,SOD活性增高,HMGB1水平降低,术后7 d的生存率明显升高(P<0.05)。结论血必净在改善脓毒症大鼠生存率的同时改善脓毒症急性肺损伤炎性反应,其机制可能与降低ROS活性、提高抗氧化酶SOD活性,同时抑制炎症因子HMGB1水平有关。

中医药治疗脓毒症急性肺损伤的研究进展

脓毒症因其死亡率高、发病机制复杂成为重症医学领域的研究重点,其中急性肺损伤是脓毒症最严重的并发症之一,探讨脓毒症急性肺损伤的发病机制并寻找治疗的有效药物具有重大意义。而近年来随着中医中药辨证论治和整体观念的治疗原则在脓毒症急性肺损伤临床和科研方面的应用,取得了一定进展。文章从中医对脓毒症急性肺损伤定义、病因病机、辨证体系和治疗方面的研究进展做一综述。

宣白承气加减方辅助改善脓毒症急性肺损伤的临床疗效观察

目的观察宣白承气加减方辅助改善脓毒症急性肺损伤(Sepsis-Associated Acute Lung Injury,S-ALI)的临床疗效。方法选取2020年1月~2021年12月北京中医药大学东直门医院收治的80例S-ALI患者作为研究对象,按照随机数表法随机分为治疗组和对照组,每组40例。对照组采用常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上加用及宣白承气加减方,两组均治疗7 d。观察两组患者治疗前后氧合指数(PO_(2)/FiO_(2)),呼吸频率(R),24 h大便量,白细胞(WBC)、C反应蛋白(CRP)、谷丙转氨酶(ALT)、血肌酐(SCR)、急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ评分),血清铁离子(Fe)等指标的变化情况。结果治疗后第7 d,治疗组患者的氧合指数(PO2/FiO2)较对照组高,24 h大便量较对照组多,呼吸频率较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组WBC、CRP、APACHEⅡ评分、Fe较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组患者ALT、SCR与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论宣白承气加减方可以改善患者肺功能、胃肠功能,可辅助抑制炎症反应。同时,宣白承气加减方具备一定的肝、肾安全性。

microRNA-1285-3p在脓毒症急性肺损伤中的表达及其与炎症因子水平的相关性

目的探讨microRNA(miRNA)-1285-3p在脓毒症急性肺损伤(ALI)中的表达及其与炎症因子、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6水平的相关性。方法对大鼠进行腹腔注射内毒素脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠模型,选取相同数量的大鼠作为对照组;各模型组大鼠注射LPS 4 h、8 h、12 h以及24 h后,观察各组大鼠肺组织病理学变化,并检测肺组织中microRNA-1285-3p、TNF-α与IL-6的含量变化。利用LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383细胞),在4 h、8 h、12 h以及24 h不同时间点检测细胞中microRNA-1285-3p、TNF-α与IL-6的含量变化,并分析细胞中microRNA-1285-3p的表达与TNF-α、IL-6表达的相关性。以生物信息学方法对microRNA-1285-3p及其靶基因进行预测,上调或下调NR8383细胞microRNA-1285-3p表达,以LPS刺激后,12 h后观察microRNA-1285-3p的表达变化,利用蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测24 h后细胞中microRNA-1285-3p靶蛋白与NF-κB的表达变化。结果LPS 4 h组、LPS 8 h组、LPS 12 h组、LPS 24 h组肺组织及NR8383细胞系中的microRNA-1285-3p表达量均分别低于对照组(P<0.05),而TNF-α、IL-6水平均高于对照组(P<0.05);microRNA-1285-3p表达与TNF-α、IL-6均呈负相关关系(均P<0.05);microRNA-1285-3p mimic组Notch1蛋白(Notch信号通路受体蛋白之一)的表达低于对照组(P<0.05);microRNA-1285-3p抑制剂(inhibitor)组Notch1蛋白的表达水平高于对照组(P<0.05)。结论microRNA-1285-3p可能通过调控脓毒症急性肺损伤大鼠的Notch1蛋白的表达,影响炎症因子TNF-α与IL-6的表达,参与其免疫炎症调控过程。

化纤胶囊治疗脓毒症急性肺损伤的临床观察

目的通过对脓毒症急性肺损伤患者在西医常规治疗基础上联合化纤胶囊治疗后的相关临床指标分析,探讨化纤胶囊对脓毒症急性肺损伤患者的临床疗效。方法分析黑龙江中医药大学附属第一医院重症医学科2016年10月至2018年5月确诊的60例脓毒症急性肺损伤气虚血瘀型患者临床病例资料,采用随机数字表法将上述60例患者随机分为对照组和治疗组两组,将单纯行西医常规基础性治疗的30例脓毒症急性肺损伤患者设为对照组,将在西医常规治疗基础上联合化纤胶囊治疗的30例脓毒症急性肺损伤患者设为治疗组,评价并比较两组患者经治疗前后的APACHEⅡ评分、Murray肺损伤评分、体温、动脉血氧分压的变化以及中医证候积分改善情况。结果治疗后,两组患者的APACHEⅡ评分、Murray肺损伤评分及体温均比治疗前显著降低(P <0. 05),且治疗组降低程度显著高于对照组(P <0. 05);两组患者的动脉血氧分压显著升高(P <0. 05),且治疗组升高程度显著高于对照组(P <0. 05);两组患者治疗前后中医证候疗效比较,治疗组疗效优于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论在西医常规治疗基础上联合化纤胶囊治疗脓毒症急性肺损伤,对脓毒症急性肺损伤的疗效优于对照组,临床上选用中药化纤胶囊,能有效改善脓毒症急性肺损伤患者的生命状态,为临床治疗脓毒症急性肺损伤提供了新的思路和方法。

白果内酯对脓毒症急性肺损伤大鼠TLR4NFκB信号通路及Th1Th2细胞的影响

目的探讨白果内酯(BB)对脓毒症致急性肺损伤(ALI)大鼠Toll样受体-4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路及辅助性T细胞1/2(Th1/Th2)的影响。方法50只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(ALI组)、BB低(2.5 mg/kg)剂量组、BB高(10 mg/kg)剂量组、地塞米松阳性对照组(0.45 mg/kg),每组各10只,除Sham组外,其余各组采用盲肠结扎穿孔法复制脓毒症ALI模型,术后6 h各药物组经尾静脉注射相应剂量药物,Sham组、ALI组经尾静脉注射生理盐水,均3次/d,共3 d。末次给药1 h后处死大鼠,取肺组织,以苏木精-伊红染色(HE)检测各组大鼠肺组织病理变化;以酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测大鼠肺组织氧化物酶(MPO)活性、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;凝胶电泳迁移率转变分析(EMSA)法检测肺组织NF-κB活性;以蛋白免疫印迹法检测肺组织中TLR4通路蛋白表达;采用流式细胞仪(FACS)检测肺脏细胞中辅助性T细胞1/2(Th1/Th2)比值。结果与Sham组相比,ALI组大鼠肺组织可见水肿、炎性细胞浸润等病理损伤,肺组织MPO、IL-6、TNF-α含量、TLR4蛋白表达、NF-κB活性均明显升高(P<0.05),Th1/Th2、TNF-α/IL-6均明显降低(P<0.05)。与ALI组相比,BB低、高剂量组及地塞米松阳性组肺组织水肿、炎性细胞浸润等病理损伤减轻,肺组织MPO、IL-6、TNF-α含量、TLR4蛋白表达、NF-κB活性均明显降低(P<0.05),Th1/Th2、TNF-α/IL-6均明显升高(P<0.05)。与BB低剂量组相比,BB高剂量组及地塞米松阳性组肺组织水肿、炎性细胞浸润等病理损伤减轻,MPO、IL-6、TNF-α含量、TLR4蛋白表达、NF-κB活性均明显降低(P<0.05),Th1/Th2、TNF-α/IL-6均明显升高(P<0.05)。结论BB可抑制TLR4/NF-κB信号通路活化,调节Th1/Th2平衡,减轻炎性介质释放,改善脓毒症ALI大鼠肺组织损伤。

重组小鼠源MANF对LPS诱导的脓毒症急性肺损伤小鼠转归的作用

目的:探究重组小鼠源MANF对LPS诱导的脓毒症急性肺损伤小鼠转归的作用及潜在的机制。方法:选取SPF级C57BL/6雄性小鼠,以LPS 15 mg•kg^(-1)单次腹腔注射建立脓毒症小鼠模型,6 h后尾静脉注射重组小鼠源MANF观察72 h内小鼠病死率;同时采用HE染色、TUNEL染色对肺组织的损伤进行评价,并测定肺组织还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量。结果:重组小鼠源MANF(750μg•kg^(-1),尾静脉注射)可明显降低脓毒症小鼠24 h内病死率(P<0.05);而且MANF可明显减轻脓毒症小鼠肺组织的炎性细胞浸润、肺泡结构损伤以及凋亡阳性细胞数;同时MANF治疗后脓毒症急性肺损伤小鼠肺组织GSH水平明显增加(P<0.05),MDA水平有所改善但未见明显统计学差异(P>0.05)。结论:重组小鼠源MANF对LPS诱导的脓毒症小鼠急性肺损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制凋亡、抗氧化应激相关。

Lnc RNA-PVT1对脓毒症急性肺损伤巨噬细胞凋亡的影响

目的分析Lnc RNA-PVT1对脓毒症急性肺损伤巨噬细胞凋亡的影响。方法对THP-1单核细胞进行培养及诱导,使其分化成巨噬细胞,并将THP-1源巨噬细胞分为空白组(TPH-1源巨噬细胞组)、模型组(脓毒症急性肺损伤巨噬细胞模型)及PVT1-siRNA组。通过LPS刺激TPH-1源巨噬细胞产生炎症反应造模,对比各组细胞的IL-1βmRNA、TNF-αmRNA及Lnc RNA-PVT1表达情况。结果PVT1-siRNA组的IL-1βmRNA、TNF-αmRNA及Lnc RNA-PVT1表达水平最高,其次是模型组,且三组之间均存在差异,P<0.05;IL-1βmRNA与TNF-αmRNA均于RNA-PVT1呈正相关,P<0.05。结论Lnc RNA-PVT1对脓毒症急性肺损伤巨噬细胞的凋亡具有重要影响作用。

过表达SIRT1通过增强自噬水平调控巨噬细胞M2型极化减轻脓毒症诱导的急性肺损伤

目的:探究过表达沉默信息调节因子1(SIRT1)对脓毒症诱导的急性肺损伤(ALI)巨噬细胞表型转化的影响及调控机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,LPS+IFN-γ与IL-4定向诱导其M1与M2型极化,Western blot检测细胞SIRT1和M1型标志物iNOS、CD86与M2型标志物Arg1、Mcr1蛋白表达。转染过表达SIRT1的质粒,RT-PCR检测转染效率,LPS诱导脓毒症ALI体外细胞模型,并分为4组:LPS组、LPS+pcDNA3.1-SIRT1组、LPS+pcDNA3.1-NC组和Control组,Western blot检测各组细胞iNOS、CD86与Arg1、Mcr1和自噬标志物LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1与p62及SIRT1/FOXO1信号通路SIRT1、FOXO1蛋白表达。免疫荧光检测各组细胞LC3B荧光表达。采用盲肠结扎穿孔(CLP)术构建脓毒症ALI小鼠模型,通过慢病毒在小鼠体内过表达SIRT1,并分为4组:假手术(Sham)组、CLP组、CLP+LV-NC组、CLP+LV-SIRT1组,RT-PCR、HE染色、ELISA检测各组小鼠肺组织SIRT1 mRNA表达、病理损伤及支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子TNF-α、IL-6与IL-10分泌,记录并分析造模72 h后各组小鼠存活率。结果:体外成功诱导了RAW264.7细胞M1、M2型极化,且M1型巨噬细胞SIRT1蛋白表达明显降低(P<0.05),而M2型巨噬细胞SIRT1表达显著升高(P<0.05)。转染pcDNA3.1-SIRT1后细胞SIRT1 mRNA表达明显升高(P<0.05)。与LPS组或LPS+pcDNA3.1-NC组相比,LPS+pcDNA3.1-SIRT1组iNOS、CD86、p62蛋白表达显著降低(P<0.05),而Arg1、Mcr1、LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1、SIRT1、FOXO1表达明显升高(P<0.05),LC3B荧光斑点数显著增加(P<0.05)。小鼠体内实验显示,与CLP组或CLP+LV-NC组相比,CLP+LV-SIRIT1组SIRT1 mRNA表达、BALF中抗炎因子IL-10分泌和造模72 h后小鼠存活率均明显升高(P<0.05),而肺组织病理损伤、BALF中促炎因子TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05)。结论:过表达SIRT1可在体内外改善脓毒症ALI,而通过SIRT1/FOXO1通路提高自噬水平促进巨噬细胞M2型极化可能是其发挥保护作用的机制之一。

脓毒症急性肺损伤小鼠肠肺菌群结构变化分析

目的探讨脓毒症急性肺损伤小鼠血液、肺组织、粪便肠道微生态结构变化及关联。方法将12只健康雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为盲肠结扎穿孔术(CLP)组和假手术(Sham)组,每组6只。CLP组采用盲肠结扎穿刺法(cecal ligation punctual,CLP)制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型;Sham组只开腹但不进行盲肠结扎穿孔。术后24 h取各组小鼠眼球血、肺组织、粪便。HE染色观察肺组织形态变化,16s核糖体RNA测序分析脓毒症小鼠各部位菌群微生态的结构变化并找出其中关联。结果(1)HE染色显示,CLP组小鼠肺泡腔有渗出、肺组织结构紊乱、伴随大量的炎性细胞浸润,肺组织病理评分较Sham组增高,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)α多样性分析显示,Sham组与CLP组血液及粪便样本比较无统计学意义,肺组织样本中Ace指数、Chao指数、Simpson指数具有统计学意义(P<0.05)。(3)β多样性分析:Sham组与CLP组血液及粪便样本比较,组间差异均大于组内差异,分析Bray-curtis、Weighted、Unweighted指数具有统计学意义(P<0.05)。(4)在门水平,对比于Sham组,CLP组的变形菌门丰度逐渐增加,厚壁菌门及放线菌门丰度降低;在属水平,Sham组主要以不动杆菌属和杜氏杆菌属为主,而CLP组主要以大肠埃希菌和未分类的肠杆菌属为主。对比于粪便菌群,血液与肺组织菌群构成更为相似。结论脓毒症急性肺损伤小鼠血液、肺组织、以及肠道的菌群分布存在部分重合。

钙敏感受体介导的NLRP3炎症小体信号通路在脓毒症急性肺损伤患者中的作用机制

脓毒症(sepsis)是一种由细菌、病毒、真菌等微生物感染引起的全身性炎症反应综合征,其发病机制十分复杂.钙敏感受体位于细胞膜上与免疫细胞的活化和炎症反应密切相关.为了探讨钙敏感受体介导的NLRP3炎症小体信号通路在脓毒症急性肺损伤患者中的表达变化机制.选取2022年3月至2023年3月我院收治的脓毒性急性肺损伤患者110例为研究对象,同期普通脓毒症患者55例作为对照组.脓毒症患者均于入院24 h内收集外周静脉血标本,对照组则收集体检当日外周静脉血.q RT-PCR法和Western blot比较了不同组别中外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中NLRP3、Caspase-1的m RNA和蛋白表达水平.酶联免疫吸附法检测外周血中钙敏感受体以及IL-1β、IL-18和TNF-α水平在不同组间的表达水平.结果表明:高危组PBMCs钙敏感受体、NLRP3和Caspase-1的m RNA和蛋白表达水平明显高于中危组、低危组及普通脓毒症患者组(P<0.05);而中危组上述指标显著高于低危组及普通脓毒症患者组(P<0.05).高危组血清IL-1β、IL-18、TNF-α表达水平明显高于中危组、低危组及普通脓毒症患者组;而中危组明显高于低危组及普通脓毒症患者组(P<0.05).Pearson相关性分析发现钙敏感受体的水平与肺损伤的严重程度和病死率均呈正相关(P<0.05).通过ROC曲线对脓毒症急性肺损伤患者病情严重程度的诊断价值,钙敏感受体对脓毒症患者发生急性肺损伤诊断曲线下面积为0.9336(95%CI:0.8988-0.9685),灵敏度、特异度分别为78.50%、68.30%;显著优于LIPS和APACHEⅡ评分.钙敏感受体介导的NLRP3炎症小体信号通路参与了脓毒症急性肺损伤患者的机体炎症反应,对于患者病情严重程度及预后评估具有应用价值.

木犀草素通过ROS/TXNIP轴减轻脓毒症小鼠急性肺损伤的机制

目的基于活性氧簇(ROS)/硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)通路探讨木犀草素减轻脓毒症小鼠急性肺损伤的机制。方法取雄性C57BL/6小鼠,使用盲肠结扎穿刺术诱导建立模型,按随机数字表法分为模型组、木犀草素组(80 mg/kg,灌胃)、TXNIP过表达(ad-TXNIP)组、TXNIP过表达阴性对照(ad-NC)组、木犀草素+ad-TXNIP组,每组20只,另取20只为假手术组。观察小鼠一般行为,检测肺泡灌洗液中炎症细胞数量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平、肺组织氧化应激产物丙二醛(MDA)水平;取肺组织,苏木素-伊红(HE)染色观察组织病理损伤;DCFH-DA荧光探针法测ROS含量;免疫组化法测TXNIP阳性表达水平;Western印迹测ROS/TXNIP通路相关蛋白NOD样受体家族蛋白(NLRP)3、IL-6、TNF-α、超氧化物歧化酶(SOD)2、过氧化氢酶(CAT)、硫氧还蛋白(TRX)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-1水平。结果与假手术组相比,模型组死亡及呼吸困难现象明显增加,肺泡灌洗液炎症细胞数目及肺组织炎症损伤评分明显升高,ROS/TXNIP活化及其介导的炎症及氧化应激反应明显加重(P<0.05)。与模型组相比,木犀草素组无死亡,肺泡灌洗液炎症细胞数目及肺组织炎症损伤评分明显降低,ROS/TXNIP活化及其介导的炎症及氧化应激反应明显减弱(P<0.05)。过表达TXNIP可明显逆转木犀草素的上述作用(P<0.05)。结论木犀草素可能通过抑制ROS/TXNIP轴活化,来改善脓毒症急性肺损伤小鼠肺组织炎症及氧化应激损伤。

热淋清颗粒对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨热淋清颗粒对脓毒症急性肺损伤模型大鼠的保护作用及其机制。方法将30只SD大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、热淋清颗粒高剂量组[4.8 g/(kg·d)]、热淋清颗粒中剂量组[2.4 g/(kg·d)]、热淋清颗粒低剂量组[1.2 g/(kg·d)]、阳性对照组[地塞米松1.5 mg/(kg·d)],每组5只。各组均采用灌胃给药,1次/d,连续给药7 d,末次给药后各组大鼠均采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症急性肺损伤模型(假手术组不结扎和穿孔),造模24 h后取材。取各组大鼠右肺中叶计算肺组织湿/干重比;采用HE染色法观察各组大鼠肺组织病理学改变并进行损伤评分;采用ELISA法检测各组大鼠血清中IL-1α、TNF-α、PGE2水平含量;采用RT-PCR法检测各组大鼠肺组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA相对表达量;采用Western-Blot检测各组大鼠肺组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白相对表达量。结果与假手术组比较,模型组大鼠肺组织湿/干重比、肺组织病理损伤评分显著升高(P<0.01);与模型组比较,热淋清颗粒高剂量组和阳性对照组可显著降低大鼠肺组织湿/干重比、肺组织病理损伤评分(P<0.05);与假手术组比较,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1α、PGE2水平及肺组织TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达量均显著升高(P<0.01);与模型组比较,热淋清颗粒高、中剂量组和阳性对照组大鼠血清TNF-α、IL-1α、PGE2水平及肺组织TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05);热淋清颗粒高剂量组上述各指标改善情况优于阳性对照组。结论热淋清颗粒能减轻脓毒症大鼠急性肺损伤,其机制可能与调节TLR4/MyD88/NF-κB p65通路有关。