脓毒症肺损伤中医证型与预后的相关性分析

目的:分析脓毒症肺损伤中医证型与生存结局之间的相关性。方法:回顾性分析山东中医药大学附属医院急诊重症医学科确诊的脓毒症肺损伤住院患者病历,危险因素包括年龄、感染部位、既往史、最高体温、白细胞计数、降钙素原、血乳酸、急性生理与慢性健康评分(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ),通过Kaplan-Meier和单因素Cox比例风险回归分析比较中医证型及各危险因素与患者短期、长期预后的相关性。结果:热毒闭肺证、肺热腑实证、正虚喘脱证患者14天短期预后无明显差异(P=0.746),长期预后显示年龄、既往史、血乳酸、APACHEⅡ评分和中医辨证分型是影响脓毒症肺损伤患者预后的危险因素;肺热腑实证和正虚喘脱证死亡风险均高于热毒闭肺证(HR=4.127,95%CI[1.967,8.658],P<0.001;HR=5.455,95%CI[2.665,11.167],P<0.001),肺热腑实证与正虚喘脱证死亡风险比较无差异(OR=0.613,95%CI[0.272,1,387],P>0.05)。结论:中医证型与脓毒症肺损伤的预后具有相关性。

清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤大鼠的治疗作用及对铁死亡的影响

目的 研究清瘟败毒饮对盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)脓毒症肺损伤大鼠的治疗作用及机制研究。方法 取75只SD健康雄性大鼠,按随机数字表法分为假手术组,模型组,清瘟败毒饮低、中、高剂量组,共5组。假手术组只切开腹壁并缝合,不进行CLP,灌胃等体积生理盐水,其余各组运用CLP建立脓毒症肺损伤大鼠模型。检测治疗后各组大鼠生存率、肺组织的湿干重比、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)总蛋白含量、BALF总细胞数、肺组织脂质过氧化水平及肺组织HE染色,研究清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤的治疗作用。运用Western-Blot法,检测各组大鼠肺组织中铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH)、铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)、转铁蛋白(transferrin)、谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达情况,探讨清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤大鼠模型中铁死亡相关因子的影响,初步研究其作用机制。结果 模型组生存率为40.00%,清瘟败毒饮低、中、高剂量组生存率分别为53.33%、60.00%、73.33%;同假手术组相比,模型组能明显增加脓毒症肺损伤大鼠肺湿干重比(W/D)(P<0.01),模型组BALF上清液总蛋白含量显著增多(P<0.01),总细胞数显著增多(P<0.01)。同模型组相比,清瘟败毒饮中、高剂量组能减少脓毒症肺损伤大鼠肺W/D(P<0.05,P<0.01),清瘟败毒饮低、中、高剂量组均能显著减少BALF上清液总蛋白含量(P<0.05,P<0.01),减少总细胞数(P<0.05);同假手术组相比,模型组大鼠白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、4-羟基壬烯醛(4-hydroxide,4-HNE)、总谷胱甘肽(total-glutathione,T-GSH)、氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)和二价铁离子(Fe^(2+))水平显著升高(P<0.01)。同模型组相比,清瘟败毒饮中剂量和高剂量组大鼠IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著降低(P<0.01),清瘟败毒饮高剂量组大鼠MDA和4-HNE水平显著降低(P<0.01);清瘟败毒饮各剂量组均能降低GSSG和Fe^(2+)水平,尤其以清瘟败毒饮高剂量组更为显著(P<0.01)。同假手术组相比,模型组大鼠中T-GSH、GSH水平和GSH/GSSG比值明显降低,清瘟败毒饮各剂量组均能显著提高T-GSH、GSH水平和GSH/GSSG比值(P<0.01),模型组大鼠FTH、FTL、Transferrin蛋白表达量显著增加(P<0.01),GPX4蛋白表达明显下降(P<0.01)。同模型组相比,经各剂量清瘟败毒饮干预后FTH、FTL的蛋白表达量显著降低(P<0.01),而中、高剂量清瘟败毒饮干预同样可以降低Transferrin的蛋白表达量(P<0.01);此外,清瘟败毒饮各剂量组可明显升高GPX4蛋白表达(P<0.01)。结论 清瘟败毒饮对脓毒症肺损伤大鼠的治疗作用明确,其治疗机制可能同抑制铁死亡相关。

姜黄素对脓毒症肺损伤患者血清NT-pro-BNP、IL-6、IL-10及肺功能影响研究

目的探讨姜黄素对脓毒症肺损伤患者血清NT-pro-BNP、IL-6、IL-10及肺功能的影响。方法收集河北大学附属医院收治的脓毒症肺损伤患者40例,根据用药不同分为对照组和实验组,每组各20例,对照组给予常规治疗,实验组在对照组基础上给予姜黄素胶囊,治疗连续1周。治疗结束后,对所有患者的血清NT-pro-BNP、IL-6、IL-10及肺功能情况进行检测。结果与对照组治疗后相比,实验组患者血清IL-6、IL-10水平较低(P<0.05),实验组患者的血清NT-pro-BNP水平较低(P<0.05),实验组患者的肺活量(vital capacity,VC)、最大通气量(maximal voluntary ventilation,MVV)、一秒用力呼气量(forced expiratory volume in one second,FEV1)水平较高(P<0.05)。结论姜黄素能够显著降低脓毒症肺损伤患者血清IL-6、IL-10以及NT-pro-BNP水平,改善肺功能。

柴胡皂苷B2对LPS诱导的脓毒症肺损伤氧化应激和炎性反应的影响研究

目的探讨柴胡皂苷B2对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症肺损伤氧化应激和炎性反应的影响。方法将50只SD大鼠分为空白对照组、模型组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组。空白对照组大鼠腹腔内注射等体积生理盐水;模型组大鼠腹腔注射10 mg/kg的LPS;柴胡皂苷B2低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠腹腔注射10 mg/kg的LPS后,分别注射5、10、20 mg/kg的柴胡皂苷。末次给药24 h后,麻醉处死大鼠,检测肺组织湿干比;TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡;Western blotting检测肺组织B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、Bcl-2同源二聚体X蛋白(Bax)、p53蛋白表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清内超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量。结果与空白对照组相比,模型组内肺组织湿干比、细胞凋亡率、Bax、p53蛋白表达、MDA含量、TNF-α、IL1β、IL-6含量明显升高,Bcl-2蛋白表达、SOD活性、GSH-Px活性明显降低。与模型组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组内肺组织湿干比、细胞凋亡率、Bax、p53蛋白、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6明显降低,Bcl-2蛋白、SOD活性、GSH-Px活性明显升高。结论柴胡皂苷B2能减轻LPS诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠氧化应激和炎性反应,并减少细胞的凋亡。

ghrelin对小鼠脓毒症肺损伤焦亡通路及炎症因子的影响

目的分析ghrelin蛋白对小鼠脓毒症肺损伤焦亡通路及炎症因子表达的影响,探讨其在脓毒症肺损伤中的保护机制。方法将健康雄性C57BL/6小鼠180只,分为假手术组(sham,n=24)、盲肠结扎穿刺模型组(the cecal ligation and puncture CLP,n=78)和ghrelin组(n=78)。使用盲肠结扎穿刺法建立脓毒症模型,ghrelin组于造模后3、20 h腹腔各给药ghrelin 12 nmol/kg,其他组给予等量生理盐水。观察各组120 h的生存率,分别留取术后6、12、24 h CLP组、ghrelin组和24 h sham组小鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)以及肺组织,检测BALF中总蛋白浓度和细胞总数,ELISA法检测ghrelin、IL-10、IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18,免疫荧光染色法检测GSDMD表达,qPCR、Western blot检测焦亡信号通路NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达。结果与sham组比较,CLP组的死亡率、肺组织病理改变以及炎症因子(IL-10、IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-18)明显升高(P<0.05);肺组织ghrelin水平降低,NLRP3、ASC、Caspase-1和GSDMD蛋白水平明显升高(P<0.05)。给予外源性ghrelin后,ghrelin组小鼠死亡率降低,肺组织病理结构损害减轻,炎症因子以及NLRP3、ASC、Caspase-1和GSDMD蛋白水平表达降低(P<0.05)。结论ghrelin改善脓毒症肺损伤小鼠生存率,减轻肺组织病理学改变,可能通过抑制焦亡途径、降低炎症反应等发挥保护作用。

脓毒症肺损伤中西医结合诊治专家共识

脓毒症(Sepsis)是机体在重症感染、严重创伤、大手术后等情况下常见的并发症,脓毒症、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和多器官功能障碍综合征(MODS)是严重损伤引起的全身炎症反应发展过程中的不同阶段[1],肺脏是病理变化中易受损害的靶器官之一,MODS是其严重后果[2]。脓毒症肺损伤若不及时救治,死亡率很高,世界范围内平均病死率为43%,是当今急危重病医学面临的重大课题[3]。

大承气汤联合基础治疗对脓毒症肺损伤患者炎症指标和预后的影响

目的观察大承气汤联合基础治疗对脓毒症肺损伤(ALI)患者炎症指标和预后的影响。方法68例脓毒症并发ALI患者采用随机数字表法分为观察组与对照组各34例。对照组患者结合病情予以基础治疗,观察组在对照组治疗基础上采用大承气汤鼻饲治疗,两组均治疗5 d后观察炎症指标、肺损伤相关指标、中医证候评分、脓毒症相关序贯器官衰竭评分(SOFA)、急性生理和慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分、机械通气时间、入住ICU时间和28 d病死率情况。结果观察组治疗后3、6 d的C反应蛋白、白细胞介素-1、白细胞介素-6水平明显低于对照组(P<0.05)。观察组治疗后5 d的动脉血氧合指数、肺泡动脉氧分压差水平明显优于对照组(P<0.05)。观察组治疗后3、5 d的中医证候积分、SOFA评分和APACHEⅡ评分明显低于对照组(P<0.05)。观察组机械通气时间明显短于对照组(P<0.05),两组入住ICU时间、28 d病死率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大承气汤联合基础治疗可降低脓毒症ALI患者中医证候评分,降低病情严重程度,改善肺损伤相关指标,缩短机械通气时间,其作用机制可能与降低炎症因子水平有关。

从“肺为娇脏”论脓毒症肺损伤

肺叶娇嫩,外通大气,合皮毛、朝百脉、主治节,且肺气易虚,不耐寒热,淫而易伤。脓毒症患者易出现肺损伤,从肺解剖生理基础、病理特点及治疗相关再损伤均体现其为“娇脏”,在脓毒症的治疗过程中应贯彻以肺保护为核心的全身器官功能保护,降低脓毒症病死率。

宣白承气汤保留灌肠在脓毒症肺损伤患者的临床研究

目的:探讨宣白承气汤保留灌肠在ICU脓毒症肺损伤患者的临床应用效果,旨在为临床提供一种可靠的中西医结合治疗方法。方法:选取2015年8月-2016年12月我院ICU收治的脓毒症肺损伤患者48例,采用随机数字法将研究对象分为对照组和观察组,每组24例。对照组患者接受抗感染、激素、祛痰、纠正水、电解质紊乱和酸碱平衡、胃肠减压和机械通气等对症综合处理措施,观察组患者在此基础上宣白承气汤保留灌肠治疗,两组均持续治疗1周,对比分析两组患者治疗前后的炎性指标、动脉血气指标变化以及临床疗效。结果:与对照组患者相比,观察组患者治疗1周后的血清白细胞数、中性粒细胞、PCT和CRP等炎性指标水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);经过治疗后,观察组患者的动脉血酸碱度、氧分压(PO2)、二氧化碳分压(PCO2)、氧合指数(Pa O2/Fi O2)、动脉血氧饱和度(Sa O2)等血气指标比对照组改善的程度更显著(P<0.05);观察组患者的治疗总有效率为87.50%,明显高于对照组患者的62.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在常规西药治疗的基础上联用宣白承气汤灌肠治疗能够明显改善脓毒症肺损伤患者的呼吸功能,减轻炎症反应,进而提高临床治疗效果,是一种值得推广应用的中西医结合治疗手段。

基于数据挖掘探析从热毒论治脓毒症肺损伤

目的:介绍热毒理论指导下的解毒法在脓毒症肺损伤中的运用,并通过数据挖掘法进一步总结和验证。方法:选取2018年1月至2020年6月山东中医药大学附属医院(西院区)重症医学科脓毒症肺损伤住院患者,将其中药原始处方录入Microsoft Excel软件,对中药频次、性味、归经、功效情况进行一般描述性分析,使用IBM SPSS Medeler 18.0的Apriori算法进行高频药物关联规则分析,使用IBM SPSS statistics 26.0进行高频药物聚类分析。结果:得到使用频率≥15%的高频药物共31味,如生地黄、炙甘草、连翘、石膏、栀子、黄芪等;通过关联规则分析得到常用药对,如金银花-连翘、栀子-黄芩等,三联药物组合如麸炒白术-党参-茯苓、黄芩-金银花-栀子等;通过聚类分析得到5首常用方。结论:解毒法贯穿脓毒症肺损伤治疗始终。发病初期,热毒之邪在肺卫,治以宣肺解毒;加重期,正邪交争,气分火毒炽盛,治以泻火解毒,若肺之热毒合并阳明腑实,治以通腑解毒;恢复期,若以正气亏虚为主,治以扶正解毒,若以阴亏津伤为主,则治以养阴解毒。

大黄附子汤治疗脓毒症肺损伤的疗效观察

目的观察大黄附子汤治疗脓毒症肺损伤患者的临床疗效。方法选择2018年6月至2020年6月北京中医药大学深圳医院(龙岗)重症监护病房(ICU)收治的60例脓毒症肺损伤患者,采用随机数字表法分为对照组和治疗组,每组30例。所有患者均给予常规治疗。对照组在常规治疗基础上加用枸橼酸莫沙必利片和双歧杆菌三联活性胶囊治疗;治疗组在常规治疗基础上加用大黄附子汤(组成:大黄12 g,制附子15 g,细辛6 g)治疗,每剂煎煮成200 mL,每日1剂,分3次服用;两组疗程均为8 d。观察两组患者治疗前后序贯器官衰竭评分(SOFA)、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)、胃肠功能障碍评分、肺部超声B线评分、动脉血氧分压(PaO_(2))、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))变化;记录两组患者28 d病死率、机械通气时间、ICU住院时间和总住院时间。结果两组患者治疗3 d肺部超声B线评分较治疗前略降低,治疗5 d和8 d肺部超声B线评分均较治疗前明显降低,以治疗组降低更明显(分:治疗5 d为12.78±2.13比14.32±2.40,治疗8 d为8.59±1.16比9.43±1.35,均P<0.05)。随治疗时间延长,治疗组患者治疗3、5、8 d APACHEⅡ评分、SOFA评分、胃肠功能障碍评分均呈明显降低趋势,PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2)均呈明显升高趋势,且上述指标与对照组同时间点比较差异均有统计学意义,以治疗8 d变化最明显〔APACHEⅡ评分(分):15.74±3.62比18.21±3.82,SOFA评分(分):3.43±1.22比4.32±1.43,胃肠功能障碍评分(分):6.44±1.49比7.37±1.51,PaO_(2)(mmHg,1 mmHg≈0.133 kPa):86.81±9.87比81.76±9.45,PaO_(2)/FiO_(2)(mmHg):295.88±57.47比265.89±51.64,均P<0.05〕。治疗组患者机械通气时间、ICU住院时间和总住院时间均较对照组明显缩短〔机械通气时间(d):7.35±2.52比9.32±3.31,ICU住院时间(d):9.46±4.23比12.24±5.18,总住院时间(d):14.39±6.72比18.46±7.22,均P<0.05〕;两组患者28 d病死率比较差异无统计学意义〔20.00%(6/30)比33.33%(10/30),P>0.05〕。结论大黄附子汤能促进脓毒症肺损伤患者胃肠功能恢复,减轻肺水肿,改善呼吸功能,缩短住院时间,缓解病情。

中医药防治脓毒症肺损伤现状及其相关指标的研究进展

脓毒症是由感染引起的全身炎症反应综合征,发病率高、病死率高、治疗费用高,成为困扰全球医学领域的一大难题。近年来中医中药在治疗急性外感热病中发挥了重要作用,尤其在新冠肺炎并发脓毒症的防治中凸显了中医整体观念和辨证论治的优势。故深入研究脓毒症肺损伤发病机制及中医中药防治方法具有极其重要的意义。

中药调节TLR4信号通路治疗脓毒症肺损伤的研究进展

梳理中医对脓毒症肺损伤的认识、治疗原则、TLR4信号通路与脓毒症肺损伤的关系;综述近10年中药调节TLR4信号通路治疗脓毒症肺损伤的研究进展,重点分析中药复方、中药提取物通过对TLR4以及其下游信号分子的调节作用,从而提高脓毒症肺损伤治疗疗效,体现中医治疗脓毒症肺损伤优势,总结现阶段研究的优点,并对存在的问题及进一步的研究方向提出建议。

光甘草定调控NETs抑制细胞焦亡缓解脓毒症肺损伤机制

目的探讨传统中药光甘草定对脓毒症肺损伤中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成及细胞焦亡影响。方法将24只雄性Wistar大鼠,按照随机数字表法分为3组:脓毒症组采用盲肠结扎穿孔术(cecalligation and puncture,CLP)建立脓毒症大鼠模型;光甘草定组(CLP+GLA)行CLP及光甘草定灌胃(30 mg/kg);假手术组(Sham)行盲肠探查术,仅进行盲肠翻动后关腹。12 h后留取血浆、肺泡灌洗液及肺组织标本检测。测定肺泡灌洗液蛋白含量;测定肺组织湿重/干重(W/D)比值;用苏木精-伊红(HE)染色后观察肺组织病理学改变;用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血浆中NETs标志物MPO-DNA复合物水平、焦亡相关炎症因子IL-18、IL-1β的表达水平;Western blot技术检测大鼠肺组织Caspase-1及Cleaved-caspase-1焦亡蛋白的变化。结果脓毒症组肺泡灌洗液总蛋白浓度较假手术组明显升高(P<0.01),光甘草定组肺泡灌洗液总蛋白浓度较脓毒症组下降(P<0.05)。脓毒症组肺水肿程度明显加重,光甘草定组较脓毒症组肺水肿减轻。光镜下观察肺组织病理结果显示:假手术组小鼠肺组织结构正常,肺泡清晰;脓毒症组肺泡壁广泛增厚,炎性细胞明显浸润;光甘草定组较脓毒症组肺组织损伤明显减轻。ELISA显示:脓毒症组血浆中NETs标志物MPO-DNA复合物水平和炎症因子IL-18、IL-1β含量较假手术组明显升高(P<0.001),光甘草定组NETs标志物MPO-DNA复合物水平和炎症因子IL-18、IL-1β炎症因子表达水平较脓毒症组均显著降低(MPO-DNA:P<0.01;IL-18、IL-1β:P<0.05)。Western blot技术结果显示:与假手术组大鼠相比,脓毒症组大鼠肺组织中Caspase-1及Cleaved-caspase-1蛋白阳性信号表达增强;光甘草定组肺组织Caspase-1阳性细胞分布与假手术组相似,Cleaved-caspase-1阳性信号表达高于假手术组。结论光甘草定通过抑制NETs生成及细胞焦亡,有效减轻肺部炎症,发挥对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用。

135例脓毒症急性肺损伤患者证候分布规律与中医诊疗理论认识思考

目的探讨脓毒症急性肺损伤患者的中医证候分布规律与特征,为临床提供辨证论治依据。方法采用回顾性研究方法,收集山东中医药大学附属医院2017年1月至2020年12月脓毒症急性肺损伤患者临床资料,设计中医证候调查表,建立数据库,运用SPSS26.0软件统计分析。结果共收集135例患者病历,平均年龄(64.38±17.61)岁,61~80岁年龄段患者最多。28 d生存患者占比61%,平均年龄(57.78±17.86)岁;死亡患者占比39%,平均年龄(70.98±17.37)岁。主要基础疾病以高血压病、心脑血管疾病、糖尿病居多。单一证候例数:热毒证>痰热证>血瘀证>腑实证>气虚证>痰浊证>阳虚证>阴虚证。复合证候例数:两种证候复合>3种证候复合>1种证候。两种证候复合以热毒证+腑实证最多,3种证候复合以热毒证+痰热证+腑实证最多,1种证候以热毒证最多。证候虚实例数:实证>虚实夹杂证>虚证,生存率相反。结论基本病机为邪实正虚,肺失宣降。病理性质总属标实本虚。病理因素包括热毒、痰、瘀。证型以热毒、痰浊、血瘀、腑实等实证为主,以复合证候多见,虚实夹杂证尤其是虚证多预后不良。脓毒证急性肺损伤治疗应以清热、化痰、活血、通腑为主,辅以益气、温阳、养阴,年老患者尤其需要扶助正气。本病病情复杂,应从整体出发,进一步把握疾病全过程证候演变规律,丰富完善辨证体系。

清瘟败毒饮抑制TLR4/NF-κB通路调控小鼠肺泡巨噬细胞自噬减轻脓毒症肺损伤的实验研究

目的探讨清瘟败毒饮调控小鼠肺泡巨噬细胞自噬减轻脓毒症肺损伤的机制。方法将60只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、清瘟败毒饮低、中、高剂量组及地塞米松组,每组10只。采用腹腔注射脂多糖(LPS)建立脓毒症肺损伤动物模型。清瘟败毒饮各剂量组每天分别予607.75、1215.5、2431 mg/kg灌胃,每日1次;地塞米松组予尾静脉注射地塞米松1.3 mg/kg,每日1次;空白组予以等量生理盐水腹腔注射,模型组予以腹腔注射生理盐水,干预时间均为1周。实验结束时,用HE染色观察小鼠肺组织的病理学改变,计算肺组织病理学评分,取肺组织称重测定湿重/干重比,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测小鼠肺组织中Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关蛋白beclin-1的蛋白表达水平,电子显微镜观察肺泡巨噬细胞超微结构。结果光镜示空白组小鼠肺组织肺泡壁光滑,结构清晰完整,肺泡腔无渗出。模型组小鼠肺泡腔内大量红细胞和炎性细胞浸润,肺泡间隔及肺泡壁增厚,部分肺泡腔塌陷,肺组织病理学评分和肺组织湿重/干重比较空白组明显升高(P<0.01)。与模型组比较,清瘟败毒饮各剂量组及地塞米松组小鼠肺组织水肿和炎性浸润均减轻,肺组织结构破坏改善,肺组织病理学评分和肺组织湿重/干重比明显降低(P<0.05,P<0.01)。与清瘟败毒饮低剂量组比较,清瘟败毒饮中、高剂量组和地塞米松组的小鼠肺组织水肿和炎性浸润进一步减轻,肺组织结构破坏改善,肺组织病理学评分和肺组织湿重/干重比明显降低(P<0.05,P<0.01)。透射电镜示空白组肺泡巨噬细胞超微结构正常,模型组肺泡巨噬细胞皱缩、胞质饱满度降低,游离面微绒毛变短、稀疏、排列不整齐,胞质内很少有自噬小体形成,线粒体嵴消失,板层小体破溃,可见细胞核固缩、核碎裂及核溶解。与模型组比较,清瘟败毒饮各剂量组和地塞米松组的肺泡巨噬细胞形态及细胞内超微结构均明显改善。与空白组比较,模型组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.01),LC3-Ⅱ、beclin-1蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,清瘟败毒饮各剂量组及地塞米松组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),LC3-Ⅱ、beclin-1蛋白表达显著增加(P<0.05,P<0.01)。与清瘟败毒饮低剂量组比较,清瘟败毒饮中、高剂量组及地塞米松组TLR4、NF-κB、NLRP3的蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),LC3-Ⅱ、beclin-1的蛋白表达显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论清瘟败毒饮对脓毒症小鼠肺损伤有保护作用,其机制可能是通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,增加小鼠肺泡巨噬细胞自噬来实现的。

表小檗碱调控CD39-NLRP3-GSDMD焦亡路径改善脓毒症肺损伤的机制研究

目的 基于CD39-NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)-GSDMD焦亡路径探究表小檗碱改善脓毒症肺损伤的作用机制。方法 通过AMP-Glo TM实验考察黄连异喹啉生物碱成分小檗碱、黄连碱、巴马汀、表小檗碱及药根碱的CD39酶促活性。小鼠ip脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,12 mg/kg)建立脓毒症肺损伤模型,分别于造模前24 h和造模0.5 h后给予表小檗碱或MCC950,造模后24 h,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠肺组织病理变化;计算肺组织湿质量/干质量,评价肺肿胀;ELISA法检测肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)和IL-17A水平。采用1μg/mL LPS联合5 mmol/L三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)/5μmol/L nigericin/150μg/mL MSU或转染0.5μg/mL poly(dA:dT)刺激人源单核细胞白血病THP-1细胞复制炎症模型,给予表小檗碱或VX-765干预,采用Western blotting法检测细胞CD39-NLRP3-GSDMD路径蛋白表达;ELISA法检测上清液中IL-1β水平;采用免疫荧光评估NLRP3炎症小体组装情况;采用扫描电镜评价细胞焦亡情况;采用BzATP介导配体门控离子通道受体7(ligand-gated ion channel receptor 7,P2X7)通道开放,考察表小檗碱对P2X7功能的作用。结果 表小檗碱的CD39酶促活性最佳,半数致死浓度(median effective concentration,EC50)值为14.23μmol/L。与对照组比较,模型组小鼠肺组织结构异常并显示炎性浸润,且肺肿胀明显(P<0.01),肺泡灌洗液中炎性因子水平显著上调(P<0.01);表小檗碱干预后,以上变化得到了有效逆转(P<0.05、0.01),并呈剂量相关性。以上药效与表小檗碱上调CD39蛋白表达水平、抑制P2X7过表达、干扰NLRP3炎症小体组装、降低GSDMD-N蛋白表达水平、逆转GSDMD介导的巨噬细胞焦亡并降低IL-1β水平有关(P<0.05、0.01)。结论 表小檗碱通过抑制脓毒症肺损伤小鼠肺泡灌洗液中IL-1β、MCP-1和IL-17A水平逆转肺损伤和肺肿胀,进一步改善脓毒症肺损伤,可能与调控CD39-NLRP3-GSDMD焦亡路径相关。

参附注射液通过调节HIF-1α减轻脓毒症肺损伤

参附注射液(Shenfu Injection,SFI)在脓毒症休克治疗方面起着重要作用,对于脓毒症肺损伤的治疗先前已有研究,但其具体作用机制尚不明确,该研究从SFI调控低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)从而介导线粒体自噬方面,分别从临床、动物实验等探讨SFI对于脓毒症肺损伤的保护作用,选取郑州大学第一附属医院急诊重症监护病房(emergency intensive care unit,EICU)收治的脓毒症肺损伤确诊患者70例,检测患者第1、5天的白细胞介素(interleukin,IL)-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,同时采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerasechain reaction,RT-qPCR)检测患者第5天的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达。动物实验方面采用随机数表法将32只SPF级5~6周雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:假手术(sham)组(n=6),SFI+sham组(n=10),SFI+盲肠结扎穿刺(CLP)组(n=10),CLP组(n=6)。记录4组小鼠体质量及体温的变化、肺组织湿/干重(W/D)、肺组织病理损伤评分;随后通过RT-qPCR及Western blot(WB)检测4组小鼠肺组织中HIF-1α、线粒体DNA(mitochondrial DNA,mt-DNA)及自噬相关蛋白的表达。结果表明,参附注射液组患者血液及肺泡灌洗液炎症指标表达下降,外周血PBMC中HIF-1α的表达明显升高,且具有一定相关性。在小鼠实验中,SFI组小鼠体温、体质量变化好转,血清TNF-α降低,肺组织W/D显著减小,在肺组织苏木素-伊红(HE)染色中肺组织炎性渗出及肺泡完整性明显好转,RT-qPCR定量脓毒症肺损伤小鼠mtDNA表达明显下降,肺组织蛋白WB半定量发现线粒体动力蛋白线粒体转录因子A(mt-TFA)及线粒体功能蛋白细胞色素c氧化酶Ⅳ(cytochrome c oxidaseⅣ,COXⅣ)表达增加,HIF-1α及自噬相关蛋白表达增加。该研究初步明确SFI通过增加线粒体自噬功能,改善线粒体功能,减轻脓毒症肺损伤,其作用机制与HIF-1α表达相关。

化纤胶囊Ⅱ号方治疗脓毒症急性肺损伤疗效及对患者血管内皮细胞功能、毛细血管渗漏指数的影响

目的:探讨化纤胶囊Ⅱ号方治疗脓毒症急性肺损伤疗效及对患者血管内皮细胞功能、毛细血管渗漏指数的影响。方法:选取80例脓毒症急性肺损伤患者并采用随机数字表法均分为对照组(n=40)和观察组(n=40)。对照组给予规范西医治疗,观察组在对照组基础上加用化纤胶囊Ⅱ号方治疗。对两组临床效果进行比较,并观察治疗前后病情严重程度[急性生理学和慢性健康状况评分(APACHEⅡ)和Murray肺损伤评分(mlIS)]、中医症状积分、血气[动脉血氧分压(PaO_(2))、氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))]及呼吸功能指标[血管外肺水指数(EVLWI)、肺血管通透指数(PVPI)]、血管内皮细胞功能[血清血管性假血友病因子(vWF)、血栓调节蛋白(TM)、内皮素-1(ET-1)]及毛细血管渗漏指数(CLI)。结果:两组临床总有效率(85.00%与65.00%)比较,观察组高于对照组(P<0.05);治疗后,两组中医症状积分、APACHEⅡ和mlIS评分均低于治疗前(P均<0.05),但观察组中医症状积分、APACHEⅡ和mlIS评分均低于对照组(P<0.05);治疗后,两组血气指标(PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2))均明显上升、呼吸功能指标(EVLWI、PVPI)明显下降(P<0.05),且观察组血气、呼吸指标改善优于对照组(P<0.05);治疗后,两组血管内皮细胞功能(vWF、TM、ET-1水平)及毛细血管渗漏指数(CLI)均明显下降(P<0.05),且观察组血清vWF、TM、ET-1水平及CLI均低于对照组(P<0.05)。结论:化纤胶囊Ⅱ号方可提高脓毒症急性肺损伤治疗效果,并可稳定病情,改善患者血气及呼吸指标,修复和保护血管内皮细胞功能,降低毛细血管渗漏指数。

过表达SIRT1通过增强自噬水平调控巨噬细胞M2型极化减轻脓毒症诱导的急性肺损伤

目的:探究过表达沉默信息调节因子1(SIRT1)对脓毒症诱导的急性肺损伤(ALI)巨噬细胞表型转化的影响及调控机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,LPS+IFN-γ与IL-4定向诱导其M1与M2型极化,Western blot检测细胞SIRT1和M1型标志物iNOS、CD86与M2型标志物Arg1、Mcr1蛋白表达。转染过表达SIRT1的质粒,RT-PCR检测转染效率,LPS诱导脓毒症ALI体外细胞模型,并分为4组:LPS组、LPS+pcDNA3.1-SIRT1组、LPS+pcDNA3.1-NC组和Control组,Western blot检测各组细胞iNOS、CD86与Arg1、Mcr1和自噬标志物LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1与p62及SIRT1/FOXO1信号通路SIRT1、FOXO1蛋白表达。免疫荧光检测各组细胞LC3B荧光表达。采用盲肠结扎穿孔(CLP)术构建脓毒症ALI小鼠模型,通过慢病毒在小鼠体内过表达SIRT1,并分为4组:假手术(Sham)组、CLP组、CLP+LV-NC组、CLP+LV-SIRT1组,RT-PCR、HE染色、ELISA检测各组小鼠肺组织SIRT1 mRNA表达、病理损伤及支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子TNF-α、IL-6与IL-10分泌,记录并分析造模72 h后各组小鼠存活率。结果:体外成功诱导了RAW264.7细胞M1、M2型极化,且M1型巨噬细胞SIRT1蛋白表达明显降低(P<0.05),而M2型巨噬细胞SIRT1表达显著升高(P<0.05)。转染pcDNA3.1-SIRT1后细胞SIRT1 mRNA表达明显升高(P<0.05)。与LPS组或LPS+pcDNA3.1-NC组相比,LPS+pcDNA3.1-SIRT1组iNOS、CD86、p62蛋白表达显著降低(P<0.05),而Arg1、Mcr1、LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1、SIRT1、FOXO1表达明显升高(P<0.05),LC3B荧光斑点数显著增加(P<0.05)。小鼠体内实验显示,与CLP组或CLP+LV-NC组相比,CLP+LV-SIRIT1组SIRT1 mRNA表达、BALF中抗炎因子IL-10分泌和造模72 h后小鼠存活率均明显升高(P<0.05),而肺组织病理损伤、BALF中促炎因子TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05)。结论:过表达SIRT1可在体内外改善脓毒症ALI,而通过SIRT1/FOXO1通路提高自噬水平促进巨噬细胞M2型极化可能是其发挥保护作用的机制之一。