脓青素对光抑制条件下菠菜叶绿体的保护作用

在有氧条件下，脓青素可以缓解强光对菠菜叶绿体电子传递的抑制作用。加入解联剂尼日利亚菌素消除跨膜质子梯度会加剧叶绿体的光抑制，但脓青素的保护作用并不消失。脓青素对光系统Ⅰ与光系统Ⅱ均表现出保护作用，但对ＰＳⅡ的保护在光抑制初期较明显；在厌氧条件下，脓青素加剧叶绿体的光抑制，引起ＤＣＩＰ光还原与水到ｐ－ＢＱ电子传递活力的降低。推测脓青素可能通过促进细胞色素ｂ５５９介导的ＰＳⅡ循环电子传递，减轻了叶绿体的光抑制。

不同品牌CN琼脂上铜绿假单胞菌色素表达的研究

目的对铜绿假单胞菌在不同品牌CN琼脂上的色素表达及其原因进行研究。方法比较ATCC10145、ATCC 15442、CMCC 10104 3种铜绿假单胞菌标准菌株在5种不同品牌CN琼脂上的色素表达,并测定CN琼脂的磷含量。结果 5种CN琼脂的磷含量在123～1560mg/kg之间,最高的磷含量与最低磷含量相差10余倍。只产青脓素的铜绿假单胞菌ATCC 15442在各CN琼脂上均为黄色菌落,在紫外线下产荧光。只产绿脓菌素的铜绿假单胞菌ATCC10145,在含磷量低的CN琼脂上呈现为蓝色菌落,表现为产绿脓菌素;而随着磷含量的增加,CN琼脂上绿脓菌素的表达逐渐减弱。既产绿脓菌素又产青脓素的铜绿假单胞菌CMCC10104在含磷量低的CN琼脂上呈现为蓝色菌落,表现为产绿脓菌素;而随着磷含量的增加, CN琼脂上绿脓菌素的表达逐渐减弱,青脓素的表达逐渐增强,菌落颜色逐渐变黄并在紫外线下产荧光。结论铜绿假单胞菌在5种不同品牌的CN琼脂上的表达色素的情况与CN琼脂的磷含量有关, CN琼脂含磷量越低,越有利于绿脓菌素的表达,青脓素的表达受到抑制; CN琼脂含磷量越高,越有利于青脓素的表达,绿脓菌素的表达受到抑制。

亚抑菌浓度庆大霉素对铜绿假单胞菌的影响

目的探讨亚抑菌浓度庆大霉素(GEN)对铜绿假单胞菌(PAO1)浮游菌和生物膜的影响。方法采用微量肉汤稀释法检测PAO1对GEN的敏感性。采用96孔板比浊法检测亚抑菌浓度GEN对PAO1浮游菌生长的影响,并通过结晶紫染色法检测亚抑菌浓度GEN对PAO1生物膜形成的影响。采用化学反应比色法测定亚抑菌浓度GEN对PAO1毒力因子表达的影响。结果 GEN对PAO1的最低抑菌浓度为2μg/ml;而当GEN浓度≤0.250μg/ml时,不影响PAO1浮游菌的增殖;当GEN为0.125μg/ml时,能促进PAO1生物膜的形成(P<0.05),且在一定范围内(0.125~0.250μg/ml)随着GEN浓度增高,其促进生物膜形成的能力越强;0.125和0.250μg/ml GEN能促进群体密度信号系统相关基因las I、las R、rhl I、rhl R、pqs C、pqs D和毒力因子青脓素、弹性蛋白酶、碱性蛋白酶的表达(P<0.05),且呈一定的剂量依赖性。结论亚抑菌浓度GEN在一定浓度范围内能促进PAO1生物膜的形成,并进一步促进群体密度信号系统相关基因和毒力因子的表达。

亚抑菌浓度头孢他啶对铜绿假单胞菌生物膜的影响

目的探讨亚抑菌浓度头孢他啶对铜绿假单胞菌生物膜的抑制和分散作用。方法用96孔板结合结晶紫染色法检测铜绿假单胞菌生物膜的形成和分散;用化学比色法测定铜绿假单胞菌毒力因子青脓素分泌能力;用比浊法检测头孢他啶对铜绿假单胞菌浮游菌生长的影响。结果 0.031 3μg/m L头孢他啶能显著抑制铜绿假单胞菌标准菌株PAO1生物膜的形成(t=156.70,P<0.05)及毒力因子青脓素产生(t=3.86,P<0.05),而不影响浮游菌的生长。当头孢他啶浓度为0.031 3μg/m L时能分散24 h成熟生物膜(t=4.32,P<0.05),且呈一定的时间-剂量依赖性。0.031 3μg/m L头孢他啶能显著抑制铜绿假单胞菌起始黏附能力(t=5.54,P<0.05);亚抑菌浓度头孢他啶显著抑制临床分离铜绿假单胞菌菌株生物膜的形成,但各菌株对亚抑菌浓度头孢他啶的生物膜形成敏感性各异。结论亚抑菌浓度头孢他啶能有效抑制和分散铜绿假单胞菌生物膜,在相关生物膜感染疾病治疗中具有潜在价值。

原花青素对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响

目的观察原花青素对铜绿假单胞菌群体感应系统和生物膜形成的影响。方法采用微孔板法检测原花青素对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响;采用运动平板法检测原花青素对铜绿假单胞菌涌动的抑制作用;通过RNA测序分析原花青素对铜绿假单胞菌基因表达的影响。结果原花青素在不影响铜绿假单胞菌生长的情况下显著促进铜绿假单胞菌生物膜的形成且均呈剂量依赖性;24 h组在PAC浓度为1.95μg/ml时,对PAO1生物膜的形成有促进作用(t=4.903,P<0.01),而12h组在PAC浓度低至0.98μg/ml时便能促进PAO1生物膜的形成(t=4.289,P<0.05);原花青素在浓度100μg/ml时可抑制PA的涌动距离及降低PA涌动复杂性,同时也能促进青脓素分泌。原花青素还可引起铜绿假单胞菌142个基因差异性表达,其中上调差异基因78个,下调差异基因56个;与环境中微生物代谢通路有关的上调基因10个,下调基因8个;Pathway分类可知与群体感应系统相关的有9个上调基因如PqsB、PqsC、PqsD等,6个基因下调;与烯二炔类抗生素生物合成、硝基甲苯降解和二甲苯降解有关通路的基因有1个;GO功能分析显示参与生物过程的基因居多,为284个,其中参与细菌代谢的基因75个;行使分子功能的基因146个,与细胞成分有关的基因100个。结论原花青素可促进铜绿假单胞菌生物膜的形成和青脓素的产生并抑制铜绿假单胞菌的涌动。

PA2146基因对铜绿假单胞菌毒力及宿主免疫应答的影响

目的探讨PA2146基因对铜绿假单胞菌毒力及宿主免疫应答的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测铜绿假单胞菌在被膜菌和浮游菌两种状态下PA2146基因的表达差异。采用发光免疫分析法检测PA2146基因对铜绿假单胞菌刺激人类中性粒细胞释放IL-6的作用,最后建立小鼠急性肌肉感染模型,检测PA2146基因对铜绿假单胞菌毒力和致病力的影响。结果铜绿假单胞菌被膜状态时PA2146基因的表达显著高于其浮游状态,与浮游状态相比,孵育8h后生物膜中PA2146基因的表达量增高(3.35±0.099)倍(t=41.15,P<0.01);孵育16h增高(8.03±0.28)倍(t=44.14,P<0.01);同时,青脓素检测试验和细胞试验也分别证实PA2146基因敲除后铜绿假单胞菌分泌青脓素的能力增强并抑制人类中性粒细胞IL-6的释放,PA2146敲除株组IL-6的分泌量为(25.44±4.14)pg/ml,野生型组为(63.89±4.22)pg/ml,差异有统计学意义(t=6.504,P<0.05)。此外,小鼠急性肌肉感染模型证实PA2146基因敲除后铜绿假单胞菌的毒力增强,注射PA2146敲除株的小鼠中间生存期为16h,野生型PAO1感染组为46h,差异有统计学意义(χ^2=28.18,P<0.01);感染12h后ΔPA2146组小鼠大腿肌肉的载菌量为(3.71±0.17)×10^9 CFU/g,PAO1组为(6.25±0.98)×10^5 CFU/g,差异有统计学意义(t=5.149,P<0.01)。结论 PA2146基因可抑制铜绿假单胞菌青脓素的分泌和增强铜绿假单胞菌的致病力。