肽基脯氨酰异构酶Pin1在动脉粥样硬化的血管平滑肌细胞衰老中的作用

目的探讨肽基脯氨酰异构酶(Pin1)调节动脉粥样硬化及血管平滑肌细胞(VSMCs)衰老的机制。方法收集正常及动脉粥样硬化病变的股动脉组织标本,并分别对其原代培养得到正常及动脉粥样硬化的VSMCs。运用免疫组化技术分别检测人体正常和动脉粥样硬化的股动脉组织中Pin1的表达;运用改良的TRAP法分别检测正常和动脉粥样硬化病变的股动脉组织中VSMCs的衰老情况;运用蛋白质印迹分析法检测VSMCs和过表达Pin1的动脉粥样硬化VSMCs中p Rb通路以及cyclin通路关键蛋白的表达。结果与正常情况相比,动脉粥样硬化股动脉组织中Pin1蛋白表达明显下调(P <0.05);动脉粥样硬化的VSMCs端粒酶活性被抑制(P <0.05);动脉粥样硬化的VSMCs中p-pRb的蛋白表达水平增加(P <0.05),Pin1及细胞周期蛋白B、D和E的表达水平明显下调(P <0.05)。反之,腺病毒介导的Pin1过表达下调p-pRb(P <0.05),上调细胞周期蛋白B、D和E(P <0.05)。结论 Pin1通过影响pRb通路以及cyclin通路调控VSMCs衰老,是VSMCs衰老调节机制中的关键因子,同时可能提供了一个调控动脉粥样硬化病理过程的新靶点。

脯氨酰异构酶1沉默抑制缺氧/复氧H9c2心肌细胞凋亡

目的:肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)在心血管疾病发病过程中发挥重要作用,本研究检测RNA干扰沉默Pin1对缺氧/复氧诱导的大鼠胚胎心肌细胞H9c2凋亡的影响及机制。方法:体外培养大鼠H9c2细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,模拟体内缺血再灌注损伤;RT-q PCR和Western blot法检测Pin1的表达;将细胞分为空白对照组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧组+转染Pin1 siRNA组、缺氧/复氧组+转染scramble siRNA组;MTT法测H9c2细胞存活率;用流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;用Western blot法检测H9c2细胞Bax和Bcl-2蛋白表达;生化法检测Caspase-3的活性水平。结果:Pin1在缺氧/复氧H9c2细胞中呈现高表达;转染Pin1 siRNA后,Pin1的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与缺氧/复氧组比较,Pin1 siRNA组的细胞存活率增加,凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax升高,Caspase-3活性降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Pin1下调可减少缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡,可能是通过上调Bcl-2,下调Bax蛋白表达,降低Caspase-3活性而发挥作用。

淋病奈瑟菌肽基脯氨酰异构酶的原核表达及其作为候选疫苗的初步评价

【背景】淋病是我国主要的性传播疾病之一,感染淋病奈瑟菌可促进人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)的传播和感染。目前我国淋病发病人数呈上升趋势,随着多重耐药菌株的出现,亟须研发保护性疫苗来防治淋病的传播和感染。【目的】分析淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)肽基脯氨酰异构酶(peptidyl-prolyl isomerase,PPIase)蛋白的高级结构和表位,探讨其作为疫苗和分子诊断靶点的潜力。【方法】利用生物信息学软件分析PPIase蛋白的极性、亲水性、柔韧性、表面可及性、二级和三级结构,以及T、B细胞表位等;用pET32a(+)质粒构建PPIase蛋白的原核表达系统并纯化蛋白,用纯化的重组蛋白和超声波破碎的NG全菌抗原分别免疫BALB/c小鼠,收获免疫血清;制备NG全细胞抗原,分别以全细胞抗原酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光试验检测重组PPIase蛋白血清抗体与NG全细胞表面抗原的结合情况。【结果】生物信息学分析结果显示,PPIase蛋白主要以α螺旋(39.34%)、无规则卷曲(30.51%)和延伸链(20.59%)为主;经表位分析筛选出5个B细胞优势表位、9个细胞毒性T淋巴细胞优势表位和18个辅助性T淋巴细胞优势表位;通过原核表达系统实现了PPIase重组蛋白的表达和纯化;纯化的重组蛋白可刺激BALB/c小鼠产生高效价的抗体,全细胞抗原的ELISA试验和间接免疫荧光试验的结果表明该蛋白诱导产生的血清抗体能与NG外膜表面抗原结合。【结论】PPIase蛋白作为一种外膜蛋白,具有良好的免疫原性和免疫反应性,其所诱导产生的特异抗体可以结合到NG表面,PPIase蛋白有作为NG候选疫苗的潜力和价值。

多肽脯氨酰顺反异构酶与阿尔茨海默病发病机制研究进展

多肽脯氨酰顺反异构酶(Pin1)与多种神经变性病和肿瘤发病有关,特别是在阿尔茨海默病的发生与发展中具有重要作用。Pin1通过调节tau蛋白和β-淀粉样前体蛋白磷酸化过程,以及干扰细胞周期以影响阿尔茨海默病的发病。尽管目前大多数学者倾向于Pin1是神经保护因素,但也有学者认为其可能是促进神经元凋亡的因素,与PIN1基因多态性相关。因此,Pin1有可能成为治疗阿尔茨海默病的新靶点,并具备成为早期诊断阿尔茨海默病生物学标记的潜力。

肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1与肿瘤发生发展的研究进展

目的:总结肿瘤中肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1的研究进展。方法:以Pin1和肿瘤为关键词,检索1979-01～2008-01PubMed和中国医学文献数据库的文献。纳入标准:1)关于Pin1在肿瘤信号通路中的调节作用的研究;2)关于Pin1促进肿瘤发生发展的研究。资料初选后,根据纳入标准,本文共综述了32篇英文文献和1篇中文文献。结果:肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1能特异性地识别磷酸化的丝/苏-脯氨酰基序,调控磷酸化蛋白的功能。肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1在细胞信号通路的调节和肿瘤发生发展方面的有重要作用。结论:Pin1在肿瘤的发生和发展中扮演重要角色,这为肿瘤的诊断和治疗提供了新的视野,但还需要进一步的研究。

肿瘤发生的催化分子——肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1

Pin1是一独特的肽基脯氨酰顺反异构酶,它专一性催化已磷酸化的丝／苏-脯氨酰顺／反异构,导致功能改变。这种构型转变是新发现的蛋白磷酸化后调节机制,主要关系到细胞增殖和转化。研究表明,Pinl在人类多种肿瘤中过表达,可加强和催化多种致癌信号,被称为肿瘤发生发展的催化分子。

脯氨酰顺反异构酶Pin1在乳腺癌中的研究进展

蛋白磷酸化信号通过影响蛋白的构象变化而调控细胞周期、细胞增殖和分化等许多细胞内过程。脯氨酰顺反异构酶Pin1(protein interaction with NIMA1)特异性识别并催化蛋白分子中磷酸化丝氨酸/苏氨酸-脯氨酸(pS er/Thr-Pro)的构象变化,进而控制蛋白分子与底物的作用、蛋白分子之间的相互作用以及影响底物稳定性等。作为蛋白分子的"时间控制器",Pin1参与多个肿瘤发生通路。在细胞表型方面,Pin1高表达可抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤细胞生长、侵袭和转移,促进肿瘤血管生成,引起治疗药物耐受,以及促进肿瘤干细胞自我更新;在分子机制方面,Pin1可促进癌基因转录,提高其蛋白活性,抑制其降解,还可降低抑癌基因的表达或活性。此外,Pin1基因敲除小鼠的正常乳腺干细胞以及孕期乳腺上皮细胞的增殖都受到抑制。在临床研究中,Pin1的表达水平也与乳腺癌的发生及预后密切相关。因此,Pin1作为治疗乳腺癌的新靶标具有良好的应用前景。

Pin1及其抑制剂的研究进展

Pin1是一个新的肽脯氨酰异构酶,特异性地催化蛋白质中磷酸化的Ser/Thr-Pro酰胺键的顺反异构,改变蛋白质的构象,调控蛋白质的功能。抑制Pin1的表达和活性,可抑制肿瘤细胞的生长。Pin1抑制剂有望发展成为新作用机制的抗癌药物。本文综述了近年来Pin1及其抑制剂研究的最新进展。

维生素D通过抑制Pin1介导线粒体氧化应激拮抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:观察维生素D对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的作用,对脯氨酰异构酶1(Pin1)蛋白表达和活性、p66Shc线粒体转位及活性氧簇(ROS)生成的影响,以及维生素D受体(VDR)在这一过程的作用。方法:以33 mmol/L葡萄糖干预建立高糖内皮细胞损伤模型,分别接受维生素D(10^(-8)~10^(-6)mol/L)和Pin1抑制剂胡桃醌(10^(-7)mol/L)共孵育;流式细胞术和TUNEL染色法检测HUVECs的凋亡率;流式细胞术和荧光显微术检测细胞内的ROS水平;Western blot法检测HUVECs中Pin1、p66Shc、p-p66Shc、p66Shc胞浆/线粒体比值及caspase-3的蛋白水平;多肽酶解法测定HUVECs裂解液中Pin1的活性;通过转染siRNA沉默VDR的表达,观察VDR是否介导Pin1蛋白及活性改变。结果:维生素D(10^(-8)~10^(-6)mol/L)抑制高糖诱导的HUVECs凋亡,并抑制高糖诱导的HUVECs中Pin1蛋白表达和活性增加。维生素D抑制高糖诱导的HUVECs中p66Shc磷酸化、p66Shc线粒体转位、ROS生成及caspase-3蛋白表达(P<0.05)。通过转染siRNA沉默VDR表达,可削弱维生素D对高糖诱导的HUVECs中Pin1蛋白表达和活性增加的抑制作用。结论:维生素D通过激动VDR,抑制高糖环境下Pin1蛋白表达和活性增加,抑制p66Shc的线粒体转位,减少ROS生成,从而减轻血管内皮细胞凋亡。

西罗莫司产生菌——吸水链霉菌的FK506结合蛋白

目的 分离吸水链霉菌菌体蛋白质 ,探讨西罗莫司产生菌—吸水链霉菌的 FK5 0 6结合蛋白 (FKBPs)。方法 制备西罗莫司产生菌—吸水链霉菌菌体蛋白 ,分离蛋白质并进行 PPIase酶活性测定。 结果 获得吸水链霉菌的蛋白谱型 ,其中 2 5 k D蛋白质及 15 .5 k D蛋白质具有 PPIase活性 ,初步认定相当于 FKBP2 5及 FKBP12。 结论 西罗莫司产生菌—吸水链霉菌中存在二种 FKBPs,即 FKBP2 5和 FKBP12 ,与前人报告不合。

Pin1与CyclinD1在肝癌中的表达及意义

目的研究肽基脯氨酰顺反异构酶(Pin1)与细胞周期蛋白(Cyclin)D1在肝癌中的表达及意义。方法通过免疫组织化学、Western blot方法来检测Pin1、CyclinD1在肝癌中的表达情况,分析它们之间的关系。结果Pin1在癌旁正常组织中不表达或呈微弱的核表达,在肝癌组织呈阳性表达,CyclinD1在癌旁正常组织中不表达。在肝癌细胞的胞质和/或胞核内呈阳性或强阳性表达,Pin1、CyclinD1在肝癌组织中的蛋白表达水平明显高于相应的癌旁正常组织。结论Pin1与CyclinD1在肝癌组织中高表达,Pin1和CyclinD1在肝癌组织中的表达与分化、分期等病理学参数无显著相关。

Pin1在肿瘤发生过程中的分子作用机制

近年来,肿瘤已成为威胁人类健康主要疾病之一,随着对肿瘤发病机制的不断深入研究,肽酰脯氨酰异构酶在肿瘤发生、发展过程中的作用日益受到人们的重视,其中微小菌素蛋白Pin1主要调节有丝分裂相关蛋白酶,本文通过对Pin1对肿瘤细胞周期运行的调节作用进行阐述,以了解其与肿瘤发生、发展的关系。

Pin1和β-连环素在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨肽酰脯氨酰异构酶1(Pin1)与β-连环素在胃癌发生、发展中的作用。方法应用免疫组化SP技术对50例胃癌组织(胃癌组)及30例正常胃组织(对照组)中Pin1、β-连环素表达进行检测,分析两指标间相关性及与胃癌临床病理学特征的关系。结果胃癌组及对照组Pin1表达阳性率分别为24.0%(12/50)、0,β-连环素异常表达率分别为62.0%(31/50)、23.3%(7/30),P均<0.05;Pin1与β-连环素在胃癌组织中的表达密切相关(r=0.51,P<0.01);Pin1及β-连环素表达与胃癌病理分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。结论Pin1和β-连环素异常表达可能在胃癌发生、发展中起重要作用,可作为指导肿瘤治疗及判断转移、预后等的参考指标之一。

PiB对胶质瘤细胞增殖与侵袭能力的影响

目的探讨PIN1抑制剂Pi B对U87胶质瘤细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法人胶质瘤细胞系U87常规培养,取对数生长期细胞进行试验,以1.0μmol/L Pi B处理U87细胞48 h为实验组,未经任何处理的U87细胞作为对照组。RT-PCR和Western blotting检测PIN1基因的m RNA和蛋白表达。免疫荧光检测阳性细胞数。Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的改变。MTT比色法检测Pi B对细胞增殖的抑制作用。结果与对照组相比,实验组细胞PIN1基因的m RNA和蛋白表达水平明显下调,PIN1阳性细胞数明显减少,细胞抑制率明显,且与药物剂量和作用时间成相关性,细胞迁移和侵袭能力下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Pi B可靶向抑制PIN1基因的m RNA和蛋白水平表达,进而抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力。

PIN1及其调控与胶质瘤

胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤,预后差,彻底治愈仍是医学难题之一。肽基脯氨酰异构酶1(PIN1)是一种多肽脯氨酰异构酶,能特异性催化磷酸化的丝、苏-脯氨酸发生顺反异构。PIN1在多种肿瘤组织中过度表达,称为肿瘤发生的催化因子,与胶质瘤的发生密切相关。一旦明确PIN1相关通路调控胶质瘤的具体机制,可能成为胶质瘤治疗的新靶点。

PPIB蛋白对结肠癌成瘤的影响和低氧机制

目的:研究肽酰脯氨基顺反异构酶B(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIB)蛋白对结肠癌细胞成瘤的影响,探讨结肠癌低氧发病的机制。方法:应用RNAi技术,构建下调PPIB蛋白表达的稳转结肠癌细胞株,移植到BALB/c裸鼠皮下,检测PPIB蛋白下调组与对照组的成瘤差异。TUNEL法检测两组移植瘤的细胞凋亡水平。低氧培养结肠癌细胞株,Western印迹法检测PPIB的表达水平与低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的关系。结果:下调PPIB蛋白表达后,在裸鼠皮下成瘤的能力显著减弱。SW480-si PPIB下调组的移植瘤体积显著小于SW480-NC对照组(P<0.01)。TUNEL检测显示下调组的癌细胞凋亡比例显著高于对照组(P<0.001)。在低氧环境下培养后,结肠癌细胞的PPIB蛋白表达水平随着低氧条件下HIF-1α的上调而升高(P<0.05)。结论:PPIB蛋白在结肠癌中因为低氧环境而表达升高,且在升高后通过抑制癌细胞的凋亡而发挥促进结肠癌形成和进展的作用,是一个极具临床应用价值的防治结肠癌的分子靶点。

FKBP10基因与疾病关系的研究进展

FKBP脯氨酰异构酶10(FK506 binding protein 10,FKBP10)是编码FKBP65的基因,定位于17q21.1,属于FKBP型肽基脯氨酰顺反式异构酶家族,编码一组被称为免疫亲和素的蛋白质。它位于内质网中,起分子伴侣的作用。许多研究发现,FKBP10基因与多种疾病密切相关。本文就近年来FKBP10基因在疾病中作用的研究进展予以综述。

PPIL1蛋白在肝癌组织的表达及临床意义

目的研究肝癌组织中肽酰脯氨酰异构酶(亲环素)样1(PPIL1)表达水平,及其在肝癌组织中表达的临床意义。方法运用免疫组织化学方法和实时荧光定量PCR技术,检测80例肝细胞癌及癌旁组织中PPIL1蛋白和mRNA表达情况,并分析其与临床指标、病理学特征的关系。结果 PPIL1蛋白主要表达于细胞浆,在肝癌组织中表达水平明显高于癌旁组织,在肿瘤分期较晚、分化程度较差以及有转移的病例中表达较高,差异有统计学意义(P<0.05),PPIL1mRNA表达水平与蛋白表达水平趋势一致(P<0.05)。结论在肝癌组织中,PPIL1高表达对肿瘤的发生发展和浸润转移起到一定的促进作用,是潜在的治疗靶点。

FK506和环孢素A阻断T细胞转录因子的核联系

环孢素A和FK506抑制T细胞和B细胞活化以及一次有效的免疫反应必需的其他过程。在T淋巴细胞中,这些药物破坏从T细胞抗原受体传递信号到协调免疫反应的细胞因子基因的未知一步。对FK506和环孢素A来说,假定的细胞内受体是顺式-反式脯氨酰异构酶(cis-trans prolyl isomerases)。药物的结合抑制异构酶活性。

Pin1在神经退行性疾病中的作用机制及研究进展

肽基脯氨酰顺/反异构酶NIMA互作蛋白1(peptidyl-prolylcis/transisomerases,NIMA-interacting1,Pin1)可以识别底物磷酸化的丝氨酸/苏氨酸-脯氨酸(phosphor-Ser-Pro or phosphor-Thr-Pro,pSer/Thr-Pro)基序,通过催化磷酸化底物的顺反异构,对底物蛋白的结构和功能产生影响,在增殖、分化、存活等多种细胞生物学过程中发挥重要作用。近年来研究发现Pin1的表达和功能异常与多种神经退行性疾病相关。由于Pin1催化底物丰富,同时参与不同疾病发病的关键因子不尽相同,因此Pin1在不同神经退行性疾病中发挥的作用也不一样。本文从多种常见的神经退行性疾病的角度展开讨论,就Pin1在不同的神经退行性疾病中所发挥的作用和机制展开综述。