脯氨酰羟化酶2抑制剂cpd17对小鼠成骨前体细胞的影响

背景:脯氨酰羟化酶2抑制剂能够调节骨代谢,改善卵巢切除大鼠骨质疏松。cpd17是中国药科大学最新研发的一款小分子口服脯氨酰羟化酶2抑制剂,用于治疗肾性贫血疗效肯定,不良反应小,但是对骨形成和骨吸收的作用还不清楚。目的:探讨脯氨酰羟化酶2抑制剂cpd17对成骨前体细胞的影响。方法:采用cpd17处理C57BL/6小鼠成骨前体细胞,检测碱性磷酸酶活性和细胞外基质矿化程度,检测成骨、破骨相关标志物以及脯氨酰羟化酶2、低氧诱导因子1α的表达水平。使用低氧诱导因子1α通路抑制剂LW6抑制低氧诱导因子1α通路后,再次检测碱性磷酸酶活性和细胞外基质矿化程度,以及成骨和破骨分化相关标志物以及脯氨酰羟化酶2、低氧诱导因子1α的表达水平。结果与结论:cpd17能显著增强碱性磷酸酶活性和基质矿化程度,上调成骨分化相关标志物的表达,下调破骨分化相关标志物的表达,并上调低氧诱导因子1α表达,下调脯氨酰羟化酶2的表达。而LW6能明显减弱cpd17的作用。结果表明,脯氨酰羟化酶2抑制剂cpd17可通过激活低氧诱导因子1α信号通路促进成骨分化和抑制破骨分化。

低氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂治疗慢性肾脏病并肾性贫血的研究进展

低氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂(HIF-PHI)作为一种新型小分子口服药物,开辟了治疗肾性贫血的新途径。目前罗沙司他等HIF-PHI已陆续上市,本文通过分析HIF-PHI类药物治疗慢性肾脏病并肾性贫血的效果,以期为HIF-PHI的临床应用提供参考。

低氧因子介导脯氨酰羟化酶对牦牛肉肉色稳定性的影响

探讨了低氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)介导脯氨酰羟化酶(Proline hydroxylase domain, PHD)调控糖酵解酶活性及宰后牦牛肉肉色稳定性的变化,以牦牛背最长肌为研究对象,经过二甲基乙二酰氨基乙酸(Dimethyloxalylglycine, DMOG)和利非西呱(Lificiguat, YC-1)处理,通过测定PHD活力、a*值、糖酵解酶活性、线粒体功能、Mb特性等指标的变化来探究PHD对宰后牦牛肉肉色稳定性的影响。研究结果表明:与对照组相比,DMOG组的LDH活力、MRA含量、NADH含量、OMb含量和MMb含量均在6~72 h显著升高(P<0.05),而DMOG组的PHD活力、线粒体膜电位、DMb含量和NAD+含量显著降低(P<0.05),同时DMOG组的Mb二级结构稳定性也高于对照组,YC-1组的作用均与DMOG组相反。综上,HIF-1α介导PHD通过下调LDH及MRA的活性和影响线粒体的功能,降低NADH含量,使MMb无法被还原为OMb。同时,该通路还会使Mb二级结构稳定性下降,最终导致肉色稳定性降低,肉色发生劣变。

缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂对血管钙化的作用

肾性贫血是慢性肾脏病(CKD)常见的并发症,近年来,低氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂(HIF-PHIs)已被开发作为肾性贫血的新型口服治疗药物。血管钙化是CKD患者心血管事件发病率和病死率增加的主要危险因素,研究表明HIF-PHIs有促进血管钙化的可能,因此充分了解HIF-PHIs潜在的危害性并加以重视非常重要。该文就HIF-PHIs在血管钙化中的作用进行综述,为临床治疗提供思路。

脯氨酰羟化酶3通过β-catenin/TCF通路抑制胃癌细胞的克隆形成和迁移

目的:探讨脯氨酰羟化酶(prolyl hydroxylase,PHD)3对胃癌细胞克隆形成和迁移能力的影响及可能的分子机制。方法:运用细胞转染上调和沉默AGS和BGC823胃癌细胞系中PHD3的表达;在转染后的细胞系中,通过软琼脂实验和迁移实验检测克隆形成和迁移能力的变化,采用蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、cMyc及Twist的表达;在AGS和BGC823细胞系中,用免疫荧光及免疫共沉淀检测PHD3和Dishevelled-2(DVL2)的相互作用。结果:上调PHD3后,AGS和BGC823克隆形成及迁移能力明显降低(均P<0.01);沉默PHD3后,AGS和BGC823克隆形成及迁移能力明显增强(均P<0.01);上调PHD3可抑制转染细胞系中Cyclin D1、c-Myc及Twist的表达,沉默PHD3可促进Cyclin D1、c-Myc及Twist的表达;PHD3与DVL2在胃癌细胞中存在相互作用。结论:PHD3可能通过β-catenin/TCF信号通路抑制胃癌细胞的克隆形成和迁移能力。

细胞内低氧感受器:缺氧诱导因子-1脯氨酰羟化酶研究进展

哺乳动物细胞对低氧的适应性调节是通过改变一系列基因表达来实现的。调控这些基因表达最重要的转录因子是缺氧诱导因子-1(HIF-1),而能够直接感受氧分压、作为氧感受器的一种双加氧酶——脯氨酰羟化酶(PHD)则是调节HIF-1的关键分子。常氧状况下,HIF-1α的两个关键氨基酸残基Pro402和Pro564被PHD羟基化进而被蛋白酶水解,此时细胞内无HIF-1聚集,形成一种氧分压正常的信号状态。低氧状况下,PHD羟基化HIF-1α反应受阻,HIF-1聚集并入核诱导多种靶基因表达,启动低氧应答反应。本文就PHDs家族如何调控HIF-1α及PHD的调节剂研究进展进行综述。

Siah2负调控脯氨酰羟化酶3表达在大鼠低氧性肺动脉高压中的意义

目的探讨Siah2及低氧诱导因子(HIF)脯氨酰羟化酶(PHD)3的表达变化趋势在大鼠低氧性肺动脉高压(HPH)中的作用和意义。方法 40只成年雄性SD大鼠随机划分常氧正常组和低氧3 d、7 d、14 d和21 d组,每组8只,常压低氧制作HPH大鼠模型。RT-PCR检测Siah2和PHD3 mRNA表达变化,Western印迹检测上述两指标的蛋白质表达,并分析其表达变化与大鼠HPH的关系。结果常氧正常组Siah2 mRNA表达水平较低,低氧7 d后显著增高(P<0.05),低氧14 d达高峰;常氧正常组及低氧3 d组Siah2蛋白表达亦较低,低氧7 d后显著增高(P<0.05),低氧14 d达高峰。常氧正常组PHD3 mRNA和蛋白质表达均不明显,低氧3 d mRNA明显增高(P<0.05),同时随低氧时间延长其mRNA表达逐渐升高并保持在高水平;PHD3蛋白质低氧3 d明显增高(P<0.05),低氧7 d保持高水平,低氧14 d和21 d下降。相关分析表明,肺小动脉壁Siah2蛋白质表达水平与Siah2 mRNA呈正相关(r=0.87,P<0.01),与PHD3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.44,P<0.05)。结论 Siah2与PHD3均在大鼠HPH的发病机制中发挥作用。Siah2可能从蛋白水平下调PHD3的表达水平,导致HPH的发生发展。

脯氨酰羟化酶抑制剂治疗肾性贫血:全新途径,全新挑战

贫血是慢性肾脏病(CKD)的常见并发症。上世纪80年代,人促红细胞生成素(EPO)基因被克隆[1]。随后,各种促红细胞生成素刺激剂(ESA)被研发,ESA和铁剂成为治疗CKD患者贫血的主要手段。随着对于机体细胞感受氧变化及适应性反应的相关研究不断深入,以低氧诱导因子脯氨酰羟化酶为靶点的新药——低氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂(HIF-PHI)成为治疗肾性贫血的全新途径。

人皮肤脯氨酰羟化酶的纯化

人皮肤脯氨酰羟化酶的纯化吴秉毅，许绍辉，孔宪涛，于嘉屏羟脯氨酸对于维持胶原稳定的三螺旋结构起重要作用。羟脯氨酸由翻译后的原胶原上的脯氨酸羟化而来，该反应由脯氨酰羟化酶（Ｐｒｏｌｙｌｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，ＰＨ，ＥＣｌ．１４．１１２）所催化。ＰＨ是胶原...

低氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂罗沙司他临床应用若干问题

肾性贫血是慢性肾脏病的重要临床表现,促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的相对或绝对缺乏是肾性贫血的最主要原因。目前肾性贫血的治疗主要是EPO类似物联合铁剂替代输血,但因其副作用,临床使用受限。低氧诱导因子是调控EPO基因表达的转录因子,而脯氨酰羟化酶是调节低氧诱导因子降解的限速酶。脯氨酰羟化酶抑制剂能够稳定低氧诱导因子而促进EPO表达。罗沙司他(Roxadustat)作为全球首个低氧诱导因子-脯氨酰羟化酶抑制剂率先完成了III期临床试验,并在中国获批上市。目前的用药经验大部分来自于我国的III期临床试验。因此,对于广大临床医生来说,缺乏长期用药经验。本文结合目前临床实际情况,对该药在临床应用过程中的若干问题简要归纳如下,以供临床医生参考。

血清免疫反应性脯氨酰羟化酶ELISA法的建立及初步应用

抗脯氨酰羟化酶单克隆抗体（ＭｃＡｂ）２Ｈ７用生物素标记，ＭｃＡｂ２Ｄ５、１Ａ５、２Ｃ１的混合物用于包被固相，建立了测定血清免疫反应性脯氨酰羟化酶（ＳＩＲＰＨ）的双位点ＥＬＩＳＡ法。该法最低检测值为１５ｎｇ／ｍｌ，批间ＣＶ为１５．２％，批内ＣＶ为１０．０％。临床测定结果，慢性活动型肝炎、肝硬化患者的ＳＩＲＰＨ显著高于正常人及其它疾病患者。

脯氨酰羟化酶3调控低氧诱导因子1α表达在非小细胞肺癌中的临床意义研究

目的研究非小细胞肺癌组织中脯氨酰羟化酶3(PHD3)与低氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达及关系,并探讨其在非小细胞肺癌发病过程中的临床意义。方法收集河北大学附属医院2010年7月—2012年4月手术切除的非小细胞肺癌标本89例,并取非小细胞肺癌组织、癌旁正常肺组织(距离肿瘤边缘>5 cm)标本进行实验。淋巴结转移51例(淋巴结转移组),无淋巴结转移38例(无淋巴结转移组);肿瘤分期(TNM):Ⅰ期26例,Ⅱ期34例,Ⅲ期29例。分别采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blotting)检测PHD3和HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平,并分析其相关性。结果 PHD3 mRNA在非小细胞肺癌组织中的相对表达量为(17.8±2.9),高于癌旁正常肺组织中的(7.1±1.3)(t=31.763,P<0.05);PHD3蛋白在非小细胞肺癌组织中的相对表达量为(13.0±2.8),低于癌旁正常肺组织中的(20.7±4.2)(t=14.391,P<0.05)。癌旁正常肺组织及非小细胞肺癌组织不同临床分期PHD3 mRNA及蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着TNM分期的增加,PHD3mRNA的相对表达量增高,而PHD3蛋白的相对表达量降低(P<0.05)。癌旁正常肺组织及有无淋巴结转移组PHD3mRNA及蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);且淋巴结转移组PHD3 mRNA的相对表达量高于癌旁正常肺组织和无淋巴结转移组,PHD3蛋白的相对表达量低于癌旁正常肺组织和无淋巴结转移组(P<0.05)。HIF-1αmRNA在非小细胞肺癌组织中的相对表达量为(17.2±2.9),高于癌旁正常肺组织中的(6.5±1.2)(t=32.163,P<0.05);HIF-1α蛋白在非小细胞肺癌组织中的相对表达量为(20.9±3.8),高于癌旁正常肺组织的(9.2±1.8)(t=26.251,P<0.05)。癌旁正常肺组织及非小细胞肺癌组织不同临床分期HIF-1αmRNA及蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着TNM分期的增加,HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白的相对表达量增高(P<0.05)。癌旁正常肺组织及有无淋巴结转移组HIF-1αmRNA及蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);且淋巴结转移组HIF-1αmRNA及蛋白的相对表达量高于癌旁正常肺组织和无淋巴结转移组(P<0.05)。非小细胞肺癌组织PHD3蛋白的表达与HIF-1α蛋白的表达呈负相关(r=-0.746,P<0.05);PHD3 mRNA的表达与HIF-1α蛋白表达呈正相关(r=0.792,P<0.05)。结论 PHD3调控HIF-1α表达可能在非小细胞肺癌的发病中发挥了重要作用,为临床将其作为抑制肿瘤发病的新靶点提供了理论依据。

脯氨酰羟化酶RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

背景:慢病毒载体可稳定介导基因沉默且具有较高的转染效率。目的:构建并鉴定脯氨酰羟化酶RNA干扰慢病毒载体。方法:针对脯氨酰羟化酶2基因序列设计RNA干扰靶序列,合成靶序列的寡聚DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切的pGCSIL-GFP连接、转化大肠杆菌感受态细胞,产生重组RNA干扰慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。结果与结论:PCR和DNA测序证实合成的含脯氨酰羟化酶短发卡RNA慢病毒载体寡核苷酸链正确插入pGCSIL-GFP载体。说明实验成功构建脯氨酰羟化酶基因RNA干扰慢病毒载体。

Siah2调控脯氨酰羟化酶3表达在非小细胞肺癌中的临床意义

目的观察Siah2(seven in absentia2)及脯氨酰羟化酶3(prolyl hydroxylase 3,PHD3)在人非小细胞肺癌及癌旁组织中的表达,并探讨上述两者差异表达在非小细胞肺癌发病过程中的临床意义。方法应用RT-PCR检测非小细胞肺癌患者89例肿瘤及癌旁正常肺组织标本Siah2、PHD3 mRNA表达情况,Western blot检测上述指标的蛋白质表达水平,并分析其与肺癌临床特征的关系。结果非小细胞肺癌患者肿瘤组织中Siah2蛋白及mRNA表达量均明显高于癌旁组织(P<0.05),PHD3蛋白的表达在肿瘤组织中低于癌旁组织(P<0.05),PHD3 mRNA在肿瘤组织中的表达高于癌旁组织,Siah2蛋白与PHD3蛋白表达呈负相关(r=-0.735,P<0.05),Siah2蛋白与Siah2 mRNA表达呈正相关(r=0.821,P<0.05)。结论 Siah2可能通过调控PHD3表达水平在非小细胞肺癌发病中发挥作用。

脯氨酰羟化酶抑制剂治疗肾性贫血的研究进展

贫血是慢性肾病(CKD)患者最常见的并发症之一,且随肾功能下降发生率增高。目前治疗CKD贫血的主导药物是红细胞生成刺激剂(ESAs),但心血管等严重不良事件限制了ESAs的应用。从1992年低氧诱导因子首次被发现到2018年罗沙司他以first-in-class新药身份在中国首发上市,新型低氧诱导因子脯氨酰羟化酶(HIF-PHD)抑制剂日益受到越来越多研究者的关注。本文围绕新型HIF-PHD抑制剂的作用机制、临床应用效果、研究进展以及潜在风险等进行综述,并探讨其在未来治疗CKD贫血的潜力。

电针干预后透镜诱导型近视豚鼠巩膜形态改变及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和脯氨酰羟化酶2(PHD-2)表达的变化

目的探讨电针干预后透镜诱导型近视(LIM)豚鼠巩膜形态变化及巩膜中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和脯氨酰羟化酶2(PHD-2)表达变化。方法将90只2周龄豚鼠随机分为正常对照(NC)组、LIM组和电针+透镜诱导型近视(LIM+EA)组,每组30只。NC组正常饲养,不干预;LIM组和LIM+EA组豚鼠右眼配戴-6.0 D透镜片,建立近视模型;LIM+EA组戴镜同时给予针刺合谷穴和太阳穴30 min。造模后2周和4周测量各组豚鼠的屈光度和眼轴长度,同时通过实时荧光定量PCR(q-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组豚鼠巩膜中HIF-1α和PHD-2的mRNA相对表达及蛋白含量。另外,于造模后4周利用电镜观察各组豚鼠巩膜超微结构变化。结果造模后2周和4周,与NC组(2.20±0.48)D、(1.63±0.41)D;(8.22±0.03)mm、(8.40±0.04)mm相比,LIM组(-4.23±0.43)D、(-5.88±0.49)D;(8.36±0.05)mm、(8.57±0.06)mm和LIM+EA组(-3.63±0.49)D、(-2.55±0.48)D;(8.32±0.03)mm、(8.51±0.03)mm豚鼠右眼屈光度均增加,眼轴均延长(均为P<0.05);与LIM组相比,LIM+EA组豚鼠右眼屈光度均减小,眼轴延长均减慢(均为P<0.05)。电镜观察结果显示,与NC组(82.94±26.03)nm相比,LIM组(48.90±23.38)nm和LIM+EA组(62.83±21.72)nm豚鼠巩膜胶原纤维直径变小(均为P<0.05);与LIM组相比,LIM+EA组巩膜胶原纤维直径变大(P<0.05)。q-PCR及ELISA检测结果表明,造模后2周和4周,与NC组相比,LIM组后极部巩膜HIF-1αmRNA和蛋白表达水平均增加(均为P<0.05),PHD-2 mRNA和蛋白表达水平均下降(均为P<0.05);与LIM组相比,LIM+EA组巩膜HIF-1αmRNA和蛋白表达水平均显著下降(均为P<0.05),PHD-2 mRNA和蛋白表达水平均上升(均为P<0.05)。结论电针干预近视豚鼠可影响巩膜胶原纤维直径及HIF-1α和PHD-2的表达水平,进而延缓近视的发展。

低氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂对非透析慢性肾脏病合并肾性贫血患者血脂的影响

探讨低氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂对非透析慢性肾脏病合并肾性贫血患者血脂的影响。方法 60例研究对象全均为我院收治的非透析慢性肾病合并肾病贫血患者,纳入时间为2021年1月到2021年12月,通过数字双盲法将其分为对照组和研究组,分别给予皮下注射重组人红细胞生成素、加用低氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂治疗,分析治疗情况。结果 对照组显效8例(26.67%)、有效19(63.33%)、无效3(10.00%),临床疗效90.00%,研究组显效10(33.33%)、有效18(60.00%)、无效2(6.67%),临床疗效93.33%,组间对比无明显差异(P>0.05);对照组Hb水平(89.28±9.57)g/L、RBC水平3.10×1012/L、Hct26.80%、MCV89.60L,研究组Hb水平(105.40±15.40)g/L、RBC水平3.60×1012/L、Hct31.90%、MCV89.61L,研究组Hb、RBC、HCT水平均高于对照组(P<0.05),组间MCV水平无明显差异(P>0.05);对照组TG1.68mmol/L、TCHO(4.59±1.10)mmol/L、HDL-C(1.25±2.05)mmol/L、LDL-C2.75mmol/L、LDL-c/HDL-c2.45±0.92,研究组TG1.30mmol/L、TCHO(4.00±0.80)mmol/L、HDL-C(1.00±0.20)mmol/L、LDL-C2.00mmol/L、LDL-c/HDL-c2.00±0.50,研究组上述指标水平均低于对照组(P<0.05)。结论 非透析CKD合并慢性肾脏病患者使用低氧诱导因子脯氨酰羟化酶抑制剂治疗,疗效同皮下注射重组人红细胞生成素相当,但前者在改善贫血指标、血脂指标方面效果更为出色。

脯氨酰羟化酶研究进展及其与肿瘤的关系

缺氧诱导因子脯氨酰羟化酶(PHD)作为氧感受器,通过氧依赖性途径催化缺氧诱导因子(HIF)特定的脯氨酸残基发生羟化反应,从而介导缺氧诱导因子降解,对缺氧诱导因子转录活性有影响。PHD表达受多种途径调控,其活性也受分子氧、二价铁、抗坏血酸、三羧酸循环中间产物等多种因素影响。此外PHD与肿瘤的发生发展有关。故对于PHD的深入研究有助于我们认识肿瘤发生发展的机制,为肿瘤的治疗提供更有效的方法。

脯氨酰羟化酶与肝纤维化

一、肺氨酰羟化酶(PH)人体中的羟脯氨酸几乎只存在于胶原中,它在保持胶原分子结构的完整性和在生理条件下胶原三股螺旋形成上起到重要作用。胶原中的羟脯氨酸来源于脯氨酸的羟化作用,参与此反应的酶是脯氨酰羟化酶。近年来,许多作者认为PH 是胶原合成的关键酶,在纤维化的肝组织中其活性及含量均明显升高,可作为肝纤维化指标,然而电子血清中存在有PH 的抑制物,影响其活性测定,限制了PH 在临床上的应用。

脯氨酰羟化酶对宰后牦牛肉糖酵解及肉品质的影响

为研究脯氨酰羟化酶(prolylhydroxylase,PHD)对宰后牦牛肉低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、糖酵解及肉品质的影响,以牦牛背最长肌为研究对象,分析二甲基乙二酰氨基乙酸(dimethyloxaloylglycine,DMOG)处理组和生理盐水对照组中HIF-1α表达量、糖酵解关键酶活性、糖酵解程度、肉品质等指标的变化。结果显示,在宰后成熟过程中,HIF-1α表达量随成熟时间的延长呈先升高后降低的趋势,但由于DMOG的作用,HIF-1α表达量在宰后12 h内显著升高(P<0.05),说明抑制PHD活性可以上调HIF-1α表达量。己糖激酶(hexokinase,HK)活性、磷酸果糖激酶(phosphofructokinase,PFK)活性和丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)活性均随成熟时间的延长呈先升高后降低的趋势,同时DMOG组的HK、PFK、PK的活性在3~120 h均显著高于对照组(P<0.05);DMOG组的糖原含量和pH值均在3~72 h显著低于对照组(P<0.05),而乳酸含量显著高于对照组(P<0.05),说明PHD介导HIF-1α上调糖酵解酶活性,加速糖酵解进程。同时,DMOG组的剪切力在宰后成熟3~72 h显著高于对照组(P<0.05),L*值在6~168 h显著高于对照组(P<0.05),而a*值在成熟过程中始终显著高于对照组(P<0.05);DMOG组的肌纤维直径和肌纤维面积均低于对照组,肌纤维间隙高于对照组,但差异不显著。说明PHD介导HIF-1α对宰后肉品质的形成产生影响,其中剪切力与L*值的变化由pH值变化引起,而a*值的变化原因需要进一步探究。结果表明,在宰后成熟过程中,PHD通过上调HIF-1α表达量进而增强糖酵解关键酶活性,加速糖酵解进程,引起肌肉内环境的变化,最终影响宰后肉品质的形成。