脯氨酰4-羟化酶α亚单位3在胃癌中的表达及临床意义

目的 探讨脯氨酰4-羟化酶α亚单位3(P4HA3)在胃癌中的表达及临床意义。方法 通过UALCAN数据库及基因表达综合(GEO)数据库分析胃癌组织和癌旁正常组织中P4HA3基因表达差异,并进一步分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中不同临床分期、分化程度、年龄和性别胃癌患者P4HA3基因表达差异。以P4HA3基因表达中位值为界,将患者分为P4HA3高表达组和P4HA3低表达组,采用Kaplan-Meier plotter在线数据库比较两组患者的总生存时间、首次进展生存时间和进展后生存时间。收集107例胃癌患者的胃癌组织及癌旁正常组织标本,采用免疫组织化学染色法检测P4HA3蛋白表达情况,并结合临床特征及随访资料进行综合分析。结果 TCGA数据库和GEO数据库中的数据均显示,胃癌组织中P4HA3基因表达水平明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01)。TCGA数据库显示,不同年龄、分化程度、临床分期胃癌患者的P4HA3基因表达水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Kaplan-Meier plotter在线数据库分析发现,P4HA3高表达组患者的中位总生存时间、中位首次进展生存时间、中位进展后生存时间均明显短于P4HA3低表达组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。胃癌组织中P4HA3蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织(P﹤0.05)。不同肿瘤直径、分化程度、TNM分期、T分期胃癌患者胃癌组织中P4HA3蛋白表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);P4HA3阴性表达患者的累积生存率明显高于P4HA3阳性表达患者(P﹤0.01)。结论 P4HA3在胃癌组织中高表达,且与胃癌的发生发展及预后有关,可能成为胃癌的预后评估指标和潜在治疗靶点。

反义寡脱氧核苷酸对脯氨酰4-羟化酶mRNA表达的抑制作用

目的：观察反义寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对脯氨酰４－羟化酶（Ｐ４Ｈ）两种亚基ｍ ＲＮＡ 表达的影响。方法：采用定量ＲＴ－ＰＣＲ技术检测培养的人皮肤成纤维细胞中Ｐ４Ｈ ｍ ＲＮＡ的相对含量。结果：不同浓度（０．１，０．２，０．５，１．０ μｍ ｏｌ／Ｌ）反义ＯＤＮ处理组，人皮肤成纤维细胞中Ｐ４Ｈ ｍ ＲＮＡ表达水平均显著低于对照组及错配ＯＤＮ 处理组；其中０．１，０．２ μｍ ｏｌ／Ｌ反义ＯＤＮ作用２０ ｈ 时，抑制效应达到最大，５０～７０ ｈ 后，逐渐恢复到对照组水平。正义ＯＤＮ与错配ＯＤＮ对Ｐ４Ｈ ｍ ＲＮＡ表达则无明显抑制作用。结论：反义ＯＤＮ 对Ｐ４Ｈ 两种亚基的ｍ ＲＮＡ表达均有显著和特异的抑制作用。

表达Ⅰ型类人胶原蛋白和脯氨酰4-羟化酶α-蛋白的转基因家蚕品系构建

家蚕丝腺具有高效合成与分泌蚕丝蛋白质的能力,探究利用转基因方法开发家蚕丝腺为生物反应器生产高附加值外源蛋白质的技术途径。将Ⅰ型类人胶原蛋白基因(HCool-Ⅰ)和胶原蛋白羟基化修饰所必需的脯氨酰4-羟化酶α-亚基基因(BmP 4Hα)通过piggyB ac转座子及显微注射方法,同时转入家蚕早期胚胎,在丝素轻链基因fib-L启动子驱动下转入的2个外源基因在家蚕幼虫后部丝腺获得表达。利用反向PCR和生物信息学等方法鉴定、分析转基因家蚕基因组中有19个外源piggyB ac的整合位点,分别位于基因的外显子区域、内含子区域和基因间区,可定位至家蚕的15条染色体上。实时荧光定量PCR检测不同整合位点的转基因家蚕品系幼虫后部丝腺中HCool-Ⅰ基因mRNA转录量存在极显著差异,转录量最高和最低的品系间相差23倍左右;转基因家蚕后部丝腺中BmP 4Hα基因mRNA的转录量比野生型家蚕高出2万多倍。利用SDS-PAGE检测转基因家蚕G3代5龄5 d幼虫的后部丝腺总蛋白质在55 kD和64 kD处分别存在特异性蛋白条带,表明BmP 4Hα和HCool-Ⅰ蛋白已在G3代转基因家蚕丝腺中获得表达。

胶原蛋白脯氨酰4-羟化酶在恶性肿瘤中的研究进展

细胞外基质对于维持组织的形态和正常的生物学功能发挥了重要作用。在恶性肿瘤的发生发展过程中,由于肿瘤生长过快导致局部缺氧,引起一系列信号通路的改变,导致细胞外基质发生重塑,肿瘤细胞发生上皮-间质转化,从而黏附性降低、容易发生局部侵袭和转移。最近的研究发现胶原蛋白脯氨酰4-羟化酶(prolyl 4 hydroxylases,P4H)在恶性肿瘤表达显著上调,是缺氧诱导的细胞外基质重塑过程重要的调节蛋白。P4HA1作为其中一个重要的亚型,在乳腺癌、前列腺癌及胶质瘤等恶性肿瘤中得到了深入的研究。本文就P4HA1在恶性肿瘤发展过程中的作用做一综述。

脯氨酰-4-羟化酶1及CD44在卵巢高级别浆液性癌中的表达及意义

目的 检测脯氨酰-4-羟化酶1(P4HA1)和CD44在卵巢高级别浆液性癌中的表达情况并分析其与卵巢高级别浆液性癌临床病理特征的关系。方法 本研究为回顾性分析。选取2020年6月至2022年6月首都医科大学附属北京妇产医院收治的经病理学检查诊断为卵巢高级别浆液性癌的34例患者作为观察组,另选择同期医院诊断为卵巢良性浆液性肿瘤(卵巢浆液性囊腺瘤)的20例患者作为对照组。采用免疫组织化学法检测两组肿瘤组织中P4HA1及CD44的表达情况,分析其与卵巢高级别浆液性癌临床病理特征的关系,并分析P4HA1与CD44的表达有无相关性。结果 观察组患者年龄、肿瘤直径、P4HA1阳性率及CD44阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与P4HA1表达阴性的卵巢高级别浆液性癌患者相比,P4HA1表达阳性的卵巢高级别浆液性癌患者中腹腔冲洗液/腹水细胞学检查阳性比例更高,差异有统计学意义(P<0.05)。与CD44表达阴性的卵巢高级别浆液性癌患者相比,CD44表达阳性的卵巢高级别浆液性癌患者中网膜/腹膜、腹腔冲洗液/腹水细胞学检查阳性比例更高,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关系数分析显示,在卵巢高级别浆液性癌中,P4HA1与CD44的表达呈正相关(r=0.539,P<0.001)。结论 P4HA1及CD44在卵巢高级别浆液性癌肿瘤组织内呈高表达,且与网膜/腹膜、腹腔冲洗液/腹水细胞学检查阳性有关。

脯氨酰-4-羟化酶亚基α-2通过肌醇需要酶1α介导的UPR信号通路调控肝癌细胞凋亡并预测早期肝细胞癌的不良预后

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)严重危害着人类健康。尽管大量研究表明,在HCC早期进行手术切除可提高患者的生存率,但其高复发率仍然阻碍着治疗进程。本研究分析蛋白质组学数据发现。脯氨酰-4-羟化酶亚基α-2(prolyl 4-hydroxylase subunit α-2,P4HA2)在早期HCC组织中高表达,Kaplan-Meier曲线、Cox比例风险回归模型(cox regression model)证明,P4HA2高表达的早期肝癌患者预后较差,且P4HA2可作为患者预后的独立预测因子。通过敲低或过表达实验发现,P4HA2明显促进肿瘤细胞的增殖、迁移等恶性生物学行为。敲低P4HA2激活了由肌醇需要酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)介导的促凋亡非折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)。以上结果表明,P4HA2可能通过调节内质网稳态来调控肝癌细胞凋亡,P4HA2有望成为HCC潜在的治疗靶点。

脯氨酰-4-羟化酶基因在妊高征胎盘中的表达及其临床意义

目的 :通过检测脯氨酰 4 羟化酶 (P4H)基因在妊娠高血压综合征 (妊高征 )患者胎盘中的表达 ,了解其在妊高征病理生理机制中的作用 .方法 :采用半定量RT PCR技术检测1 0例正常妊娠妇女 (对照组 )及 1 0例中、重度妊高征患者 (妊高征组 )胎盘组织P4H和 β actinmRNA水平 .结果 :P4H与 β actin积分吸光度比值在对照组和妊高征组胎盘组织中分别为 :0 .386 82± 0 .0 7931 ;0 .4 5 6 71± 0 .0 5 80 3.显示P4HmRNA在对照组和妊高征组胎盘组织中均有表达 ,妊高征组胎盘组织P4H基因的表达明显高于对照组 ,差异有显著性 (P =0 .0 37) .结论 :妊高征患者胎盘组织中P4H基因的高表达 ,可能是妊高征一系列病理生理变化的环节之一 .

基于生物信息学分析骨肉瘤的关键基因和qRT-PCR实验验证

目的利用生物信息学方法筛选出与骨肉瘤(osteosarcoma,OS)相关的关键基因,以作为OS的潜在诊断标志物和新治疗靶点。方法从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中检索下载2个符合本研究的OS相关数据集(GSE16088和GSE42572),共包括21例OS组织样本和14例正常骨组织样本。对数据集进行矫正分析鉴定出差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。通过加权基因共表达网络分析方法(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)与DEGs筛选出交集基因。对交集基因进行疾病本体论(Disease Ontology,DO)、基因本体论(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书分析(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)和蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络分析。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估该PPI网络degree排名前10位的Hubbe基因的表达水平对OS患者的诊断效能,并以另一个OS数据集GSE19276对Hubbe基因进行验证筛选出关键基因。分析关键基因与浸润性免疫细胞的相关性。收集2020年9月1日至2022年6月30日于广西中医药大学第一附属医院住院手术的4例OS患者的OS组织及其癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)对关键基因进行实验验证。结果在OS组织与正常骨组织中共筛选出687个DEGs(上调基因523个和下调基因164个)。WGCNA关键模块基因2338个。DEGs与WGCNA关键模块基因共有交集基因545个。DO富集分析结果表明,DEGs与WGCNA结果的交集基因主要与泌尿系统癌症、肾癌、生殖细胞癌、肌肉骨骼系统癌症和胚胎癌等癌症相关。GO富集结果表明,交集基因主要参与骨化的形成、细胞外基质组织和生物矿物组织发育等生物学过程。KEGG通路富集在磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又名Akt)信号通路、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)信号通路及流体剪切应力和动脉粥样硬化等信号通路上。PPI网络分析中degree排名前10位的Hubbe基因为磷脂酰肌醇4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha,PIK3CA)、脯氨酰4-羟化酶亚单位α1(prolyl 4-hydroxylase subunit alpha 1,P4HA1)、整合素αⅤ(integrin alphaⅤ,ITGAⅤ)、组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)、连环蛋白β1(catenin beta 1,CTNNB1)、Ⅲ型胶原蛋白α1(collagen typeⅢalpha 1,COL3A1)、Ⅰ型胶原蛋白α2(collagen typeⅠalpha 2,COL1A2)、转导蛋白β样1X相关蛋白1(transducin beta-like 1X-related protein 1,TBL1XR1)、小核核糖核蛋白多肽G(small nuclear ribonucleoprotein polypeptide G,SNRPG)和Ras相关核蛋白(Ras-related nuclear protein,RAN)。以数据集GSE19276绘制ROC曲线验证Hubbe基因表明,P4HA1和ITGAV的准确度较高(均AUC>0.8且P<0.05)。qRT-PCR实验结果显示,P4HA1和ITGAV mRNA在OS组织中高表达(均P<0.01)。结论P4HA1和ITGAV是OS的潜在生物标志物和治疗靶点。

P4HA调控实体肿瘤发生发展机制的研究进展

脯氨酰4-羟化酶α亚基(prolyl 4-hydroxylase subunit alpha,P4HA)是胶原蛋白翻译后加工的关键酶,可通过影响胶原蛋白的结构、功能及稳定性诱导肿瘤微环境重塑,从而调节肿瘤细胞极性、运动和信号转导,其与多种实体肿瘤的侵袭、转移密切相关。此外,P4HA可调控肿瘤相关基因表达、增强肿瘤细胞恶性表型表达及耐药性形成,P4HA的失调在肿瘤的生长、侵袭以及治疗抵抗中起重要作用。本文通过概述P4HA的生物学结构、功能及其在实体肿瘤发生发展中的作用机制,对P4HA与肿瘤发生、转移及耐药性关系的研究进展加以阐述。

胃癌组织中P4HB与GRP78表达的相关性及对患者预后的预测价值

目的:探讨脯氨酰4-羟化酶β多肽(P4HB)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达与胃癌临床特征的相关性及对患者预后的预测价值。方法:采用免疫组织化学法分别评估150例胃癌组织样本中P4HB和GRP78蛋白的表达,分析蛋白表达与胃癌临床病理学特征的关联。采用Kaplan-Meier分析比较总生存期(OS)的生存曲线。用单变量和多变量Cox回归模型分析影响OS的潜在预后因素。基于多变量Cox回归模型构建预后列线图,并与TNM分期比较其临床价值。结果:P4HB的表达与患者年龄、Bormann分型、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、术后辅助化疗相关,GRP78的表达与肿瘤浸润深度和淋巴结转移相关;两者的表达呈正相关。Kaplan-Meier分析表明,P4HB和GRP78的高单一表达或共表达预示较短的OS,两者的高共表达在术后辅助化疗组,特别是晚期组中预后不良。多因素Cox回归分析确定癌组织分化程度、TNM分期、术后辅助化疗、P4HB与GRP78共表达是OS的独立预后因素。在受试者工作特征曲线和决策曲线分析中,列线图在辨别能力和临床实用性方面优于TNM分期。结论:P4HB与GRP78的表达呈正相关,其共表达是OS的独立预后因素,可作为胃癌患者特别是晚期术后辅助化疗患者OS的预测生物标志物。预后列线图模型可能具有较高的临床应用价值。

P3H4研究进展及其与泌尿系疾病发生的关系

脯氨酰羟化酶属于2-酮戊二酸依赖的双加氧酶超家族,是体内重要的低氧感受器,可直接感受氧分压的变化,通过氧依赖性途径羟化缺氧诱导因子特定的脯氨酸残基,从而介导缺氧诱导因子的降解。脯氨酰3-羟化酶4(P3H4)是P3H1、P3H2的同工酶,被标识为人类肿瘤相关自身抗原,在泌尿系统疾病中发挥着重要作用。现就P3H4的生物学特性及其在泌尿系疾病中的应用进行阐述,系统讨论泌尿系疾病中P3H4的研究现状与开发前景。