从青霉素G生产7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸

综述了以青霉素 G钾为原料经氧化、酯化、扩环、水解、脱苯乙酰基等反应制备

脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶/羟化酶基因cefEF的克隆及序列分析

利用氯化苄分别从真菌顶头孢 (Cephalosporiumacremonium)和产黄头孢 (Acremoniumchrysogenum)中提取总DNA ,通过PCR方法扩增脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶 羟化酶基因cefEF ,结果只能从产黄头孢DNA中扩增出cefEF基因。测序结果表明 ,其与已报道的基因序列只有 3个碱基的差异 ,推断的氨基酸序列只有 2个氨基酸有差异 ,并未涉及活性中心。同时表明 ,国外所指的与该酶有关的顶头孢 (Cephalosporiumacremonium或Acremoniumchryso genum)对应的是国内的产黄头孢 (Acremoniumchrysogenum)。

发酵法制造7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸技术概述

从棒状链霉菌分离出扩环酶基因 ,从顶头孢中分离出扩环酶 /羟化酶基因和酰化酶基因 ,以质粒PSEL ECT为基础构建插入了这些酶基因的新的质粒 ,将重组质粒转入产生青霉素的产黄青霉中。在适当条件下培养转化菌株 ,产生取代的酰基 7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸 ,用适当的酶脱去侧链获得 7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸。

7-苯乙酰胺基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸裂解工艺的改进

青霉素氧化物扩环后，扩环酸母液直接裂解合成７－氨基脱乙酰氧头孢烷酸（７－ＡＤＣＡ），收率提高４１％。

7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸生产固体废物的处理

采用活性炭脱色—蒸馏—萃取—氯气置换的新工艺处理7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)生产固体废物。实验结果表明:适宜的活性炭与7-ADCA生产固体废物的质量比为0.8%;以二氯甲烷作为溶剂萃取吡啶,萃取效率较高;在n(氯):n(溴)为1.2时,溴回收率为86.3%;在真空度为0.04 MPa、蒸馏温度为95℃的条件下,对釜底液进一步蒸馏浓缩,最终得到尿素和氯化铵混合固体肥料。与传统方法相比,该工艺不仅提高了经济效益,而且实现了7-ADCA生产固体废物的综合利用。

全细胞催化生产苯乙酰-7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸的条件优化

头孢类抗生素由于广谱性和低毒性被广泛用于细菌感染的治疗。7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸(7-aminodeacetoxycephalosporanic acid,7-ADCA)作为半合成头孢类抗生素的重要中间体,需求量逐渐增加,而7-ADCA主要由G-7-ADCA(苯乙酰-7ADCA)脱酰基得到。工业上多以化学法合成G-7-ADCA,成本高,污染严重。迫切需要对环境友好且经济高效的合成方法。在前期研究中,构建了一株可以将青霉素G转化为G-7-ADCA的代谢工程菌(E.coli H7/PG15)。本研究通过单因素试验对E.coli H7/PG15的G-7-ADCA合成过程进行优化,包括底物组成及其最适浓度,转化条件(菌体浓度、p H、青霉素浓度、MOPS浓度、葡萄糖浓度,铁离子浓度和时间等)。优化后,建立了全细胞催化法生产G-7-ADCA的工艺流程,使G-7-ADCA的产量稳定在15 mmol/L左右,转化率达到30%,具有操作简便、高效和经济的优势。

长春花脱乙酰氧基文多灵-4-羟化酶基因启动子的克隆与生物信息学分析

通过基因组步行技术克隆到长春花脱乙酰氧基文多灵-4-羟化酶基因上游905bp启动子序列,生物信息学分析发现该序列中存在多个与光照诱导有关的顺式元件,同时也发现一个与长春花特异的顺式作用元件JERE类似的短序列,推测该序列是茉莉酸诱导途径中转录因子ORCA3的特异结合位点。

7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)的合成研究 Ⅱ.7-苯乙酰氨基去乙酰氧基头孢烷酸的合成

本文在制得青霉素 G亚砜的基础上 ,完成了重排酸的扩环反应 ,重点探讨了扩环反应的最优化条件。青霉素 G亚砜与 N,N′-双 (三甲基甲硅基 )脲 (BSU)在 5 5℃下反应 ,得到亚砜的酯化物。加入催化剂吡啶乙酰溴 ,回流条件下发生扩环反应。最后加水脱去酯基 ,加酸析出产物重排酸。通过正交实验可得出以下结论 :当 N,N′-双 (三甲基甲硅基 )脲 -亚砜为 2 .5 :1,乙酰溴 -亚砜为 0 .4:1,吡啶 -乙酰溴为 1.5 :1,回流时间为 3.5 h,酸化 p H值为 1.8时 ,扩环反应结果最好 ,总收率可达 76 % ,纯度 97%以上。

HPLC法测定7-氨基-去乙酰氧基头孢烷酸中有关物质含量

目的建立高效液相色谱法测定7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸（7-ADCA）中有关物质[Δ-2-7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸（Δ-2-7-ADCA）、苯乙酸、扩环酸]。方法色谱柱：Hypersil ODS柱（250 mm×4.6mm,10μm） 流速：2.0 mL/min 柱温：30℃。DAD二极管矩阵检测器检测,检测波长：220 nm 进样量：20μL。梯度洗脱：流动相A：0.05 mol/L磷酸盐缓冲液（pH=6.0） 流动相B：乙腈。结果Δ-2-7-ADCA、苯乙酸和扩环酸相对于7-ADCA的响应因子为0.56、0.83和1.1 7-ADCA的线性范围为0.59~5.88μg/mL（r=0.999 7）,最低检测浓度：0.12μg/mL。结论该方法操作简便、结果准确、稳定,可用于7-ADCA中有关物质含量的测定。

棒状链霉菌扩环酶R306位点的定点突变

目的:通过对棒状链霉菌的脱乙酰氧基头孢菌素C合酶(DAOCS)C末端R306位点突变,改变酶的活力和底物专一性。方法:利用生物信息学和空间结构分析推测,利用定点突变技术,对DAOCS的C-末端R306位点进行定点突变。结果:将DAOCS的C末端R306位点突变为其它3种性质相异的氨基酸,显示酶的活力和底物专一性都有一定改变。结论:DAOCS的C末端修饰对于提高酶活力或改变酶的底物专一性是一个非常有效的策略。

7-ADCA系列产业结构现状和产业竞争态势分析

该文分析了7-氨基脱乙酰氧基头孢烷酸系列(7-ADCA系列)产业结构现状和产业竞争态势。7-ADCA系列由于产品特性上的缺陷,未来发展空间有限,第3终端将成为主流销售渠道;中间体和下游产品都已迈向国产化或出口型,企业应该提高自身消化转移能力,以应对未来市场愈演愈烈的竞争。

扩环酶的研究进展及其应用前景

扩环酶，也叫脱乙酰氧基头孢菌素Ｃ合成酶，催化青霉素Ｎ 扩环生成脱乙酰氧基头孢菌素Ｃ，是头孢菌素生物合成中的关键酶。在真菌中它是一个双功能酶，同时具有扩环酶和羟化酶的活性；而在细菌中扩环和羟化却是由两个独立的酶来承担的。近年来，扩环酶被纯化成均一蛋白，有关它的性质、分子结构以及基因结构等方面的研究都取得了飞速发展，并不断地应用基因工程的技术探索其在抗生素生产上的应用。

头孢拉定的合成

通过对头孢拉定合成的研究,确定并打通了头孢拉定的合成路线,以7—氨基脱乙酰氧基头孢烷酸(7—ADCA)为起始原料,经成盐或酯化保护后,与环己二烯甘氨酸经保护后的中间体缩合,经五步反应,得到头孢拉定。总收率为90％,产品质量符合中国药典(2000)要求。

头孢氨苄酶法缩合工艺的研究进展

综述了青霉素乙酰化固定化酶和头孢氨苄酶法缩合工艺的研究进展 ;探讨了头孢氨苄酶法缩合工艺中酶催化缩合反应的影响因素、产品的分离与纯化以及过量原料的回收和酶反应器的选择等问题。结果认为头孢氨苄酶缩合反应的适宜条件为 :侧链与 7 氨基脱乙酰氧基头孢烷酸 ( 7 ADCA)的投料比率为 1∶1～ 2∶1,反应底物的浓度为 3 0 0～ 60 0mmol·L-1,反应温度在 5～ 3 5℃之间 ,7 ADCA的转化率可以达到 93 %以上。

使用液态BSU制备7-ADCA的工艺研究

在制得青霉素G亚砜的基础上,完成了使用液态BSU制备重排酸的反应,重点探讨了液态BSU的制备条件及重排酸的制备过程。通过实验得出结论:尿素-六甲基二硅胺烷的物质的量比为1∶1.03,反应2h,扩环反应2.5h;酸析pH值2.0时,反应结果最好,收率达85%以上,制得重排酸的纯度>95%。

土荆皮总二萜酸的代谢产物和代谢途径

综合运用体内实验和多种体外实验模型,初步分析了土荆皮总二萜酸(total diterpene acid,TDA)的代谢情况。在口服和静脉注射给药实验中,使用HPLC-UV和HPLC-ESI/MSn方法在大鼠血、尿、粪和胆汁样品中都检测到主要代谢产物土荆皮丙2酸(pseudolaric acid C2,PC2),还可检测到脱甲氧基脱乙酰氧基土荆皮乙酸(demethoxydeacetoxypseudolaric acid B,DDPB),以及推测为土荆皮丙2酸的葡萄糖苷(PC2G)的代谢产物,原形药物中的土荆皮丙酸(pseudolaric acid C,PC)、土荆皮甲酸(pseudolaric acid A,PA)、土荆皮甲酸葡萄糖苷(pseudolaric acid A O-β-D glucopyranoside,PAG)、土荆皮乙酸葡萄糖苷(pseudolaric acid B O-β-D glucopyranoside,PBG)和脱乙酰基土荆皮甲酸(deacetylpseudolaric acid A,DPA)也可以检测到。实验表明,TDA的代谢与肠内菌无关,胃蛋白酶和胰蛋白酶不是主导TDA代谢的因素,在胃、肠道的pH环境下TDA也是稳定的。TDA在体外全血孵育模型中的主要代谢产物是PC2、DDPB和PC2G,证明TDA在体内的代谢转化反应主要是在血液中完成的,并且主要归结于血浆酯酶对酯键的水解以及葡萄糖苷化反应。这一发现首次初步阐明了TDA在体内的代谢途径,对于明确土荆皮的有效物质基础、体内活性形式及其作用机制都具有非常重要的意义。