脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶/羟化酶基因cefEF的克隆及序列分析

利用氯化苄分别从真菌顶头孢 (Cephalosporiumacremonium)和产黄头孢 (Acremoniumchrysogenum)中提取总DNA ,通过PCR方法扩增脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶 羟化酶基因cefEF ,结果只能从产黄头孢DNA中扩增出cefEF基因。测序结果表明 ,其与已报道的基因序列只有 3个碱基的差异 ,推断的氨基酸序列只有 2个氨基酸有差异 ,并未涉及活性中心。同时表明 ,国外所指的与该酶有关的顶头孢 (Cephalosporiumacremonium或Acremoniumchryso genum)对应的是国内的产黄头孢 (Acremoniumchrysogenum)。

棒状链霉菌扩环酶R306位点的定点突变

目的:通过对棒状链霉菌的脱乙酰氧基头孢菌素C合酶(DAOCS)C末端R306位点突变,改变酶的活力和底物专一性。方法:利用生物信息学和空间结构分析推测,利用定点突变技术,对DAOCS的C-末端R306位点进行定点突变。结果:将DAOCS的C末端R306位点突变为其它3种性质相异的氨基酸,显示酶的活力和底物专一性都有一定改变。结论:DAOCS的C末端修饰对于提高酶活力或改变酶的底物专一性是一个非常有效的策略。

扩环酶的研究进展及其应用前景

扩环酶，也叫脱乙酰氧基头孢菌素Ｃ合成酶，催化青霉素Ｎ 扩环生成脱乙酰氧基头孢菌素Ｃ，是头孢菌素生物合成中的关键酶。在真菌中它是一个双功能酶，同时具有扩环酶和羟化酶的活性；而在细菌中扩环和羟化却是由两个独立的酶来承担的。近年来，扩环酶被纯化成均一蛋白，有关它的性质、分子结构以及基因结构等方面的研究都取得了飞速发展，并不断地应用基因工程的技术探索其在抗生素生产上的应用。