卤代烷烃脱卤素酶标签α1A-肾上腺素受体色谱方法的建立与评价

受体色谱技术是将色谱技术的高分离能力和药物-受体间的高特异性识别能力结合起来的一种分析技术,能够对中药等复杂体系中靶向活性成分进行高效筛选与准确辨识。该技术的关键在于发展高效、温和、简便的固定化方法,使得固定化受体活性得以保持。传统的以生物交联剂为核心的随意共价固定化技术存在反应特异性较差、需要纯化蛋白质等不足。针对该问题,本研究将卤代烷烃脱卤素酶(Halo)与6-氯己酸的特异性生物正交反应引入至α1A-肾上腺素受体(α1A-AR)的固定化过程,将Halo标签α1A-AR一步固定至6-氯己酸修饰的氨丙基硅胶表面,无需对α1A-AR进行纯化。采用扫描电子显微镜和色谱法对Halo-α1A-AR色谱固定相进行形貌及活性表征,证明受体已成功固定且具有特异性识别配体的能力,30天内稳定性良好。非线性色谱法研究结果显示:盐酸哌唑嗪、盐酸特拉唑嗪和乌拉地尔通过一类结合位点与Halo-α1A-AR色谱固定相作用,结合常数分别为3.85×10^(5)、5.00×10^(5)和5.90×10^(5)L/mol;甲磺酸酚妥拉明和盐酸坦索罗辛在Halo-α1A-AR色谱固定相上则存在两类位点,前者与受体亲和力分别为3.12×106 L/mol和6.01×10^(5)L/mol,后者则为9.98×10^(5)L/mol和2.11×104 L/mol。与传统物理吸附法或N,N′-羰基二咪唑法制备的α1A-AR色谱柱相比,本文所用固定化方法无需纯化受体,在一定程度上避免了受体活性损失,实现了蛋白质一步固定化方法,亲和力测定值更接近于溶液中受体-药物的真值,为复杂体系靶向活性成分高效筛选与准确测定奠定了基础。

谷胱甘肽S-转移酶5-5和细菌二氯甲烷脱卤素酶的性质比较

通过简便的两步阴离子交换色谱，从遗传工程菌株大肠杆菌JM105中纯化出哺乳动物的谷胱甘肽S-转移酶5－5（GST5－5）．GST5－5以二卤甲烷为底物时的动力学常数、热稳定性和最适pH被测定，并与细菌二氯甲烷脱卤素酶（DM11脱卤素酶）的上述性质进行了比较．

假单胞菌DM11菌株的二氯甲烷脱卤素酶研究

二氯甲烷(CH_2Cl_2)被广泛地用作清除剂、溶剂提取剂、冷冻剂和熏蒸剂,是一种主要的环境污染物。1980年 Rittmann 等首次从工业废水中分离出以二氯甲烷为唯一碳源和能源的细菌。

嗜甲基菌DM11菌株的二氯甲烷脱卤素酶是二聚体蛋白

经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，嗜甲基菌DM11菌株二氯甲烷脱卤素酶的亚基分子量为31000．通过沉降平衡超离心分析和凝胶过滤色谱分析证明，上述脱卤素酶的天然酶的分子量分别是65800和63500．这些结果表明，DM11菌株的二氯甲烷脱卤素酶是二聚体蛋白．

假单胞菌DM11的二氯甲烷脱卤素酶研究──Ⅱ．动力学性质和抑制剂

对来自假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．）ＤＭ１１菌株的二氯甲烷脱卤素酶（简称ＤＭ１１脱卤素酶）的动力学性质和抑制剂进行了研究。用１／Ｖ对１／［ｓ］作图法，测出ＤＭ１１脱卤素酶以ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨ２Ｂｒ２、ＣＨ２Ｉ２、ＣｌＣＨ２Ｂｒ和ＣｌＣＨ２Ｉ等５种化合物为底物时的Ｋｍ值分别是６７、２０、５５、７和９μｍｏｌ／Ｌ，比活力分别是７７．８、１２３．３、７８．８、５６．１和６０．３ｍｋａｔ／ｋｇ蛋白。测定了１４种抑制剂对ＤＭ１１脱卤素酶的５０％抑制浓度（Ｉ５０）。甲基谷胱甘肽（ＧＳＣＨ３）是ＤＭ１１脱卤素酶的竞争性抑制剂，四硝基甲烷（ＴＮＭ）是非竞争性抑制剂，当甲基谷胱甘肽和四硝基甲烷与ＤＭ１１脱卤素酶一起保温时，甲基谷胱甘肽对酶有保护作用。

嗜甲基菌DM11菌株二氯甲烷脱卤素酶基因的定点诱变

为了研究嗜甲基菌（Methylophilus）DM11菌株二氯甲烷脱卤素酶的不同氨基酸残基在底物结合、谷胱甘肽（GSH）亲和以及催化活力中的作用，对编码该酶的基因进行了定点诱变研究。将保守的103位色氨酸（W）分别用苯丙氨酸（F）、缬氨酸（V）或天冬酞胺（N）替换，109位精氨酸（R）用亮氨酸（L）替换，117位色氨酸用酪氨酸（Y）或苯丙氨酸替换，得到6种突变酶。其中3种突变酶具有较低的活力，另外3种突变酶没有活力。突变酶W117Y的性质与野生型酶明显不同。

二噁英降解酶的研究进展

二噁英是一类广泛分布于环境中的持久性有机污染物,它们能够在食物链中逐级积累,并可引发多种细胞毒性,严重影响生态系统和人类健康。在众多二噁英降解方法中,生物降解法以环境友好和低成本等优点一直受到国内外学者的青睐,而二噁英降解酶是生物降解法中的关键物质。简要综述了近年来二噁英典型降解酶的降解机制、效果和编码基因等方面研究进展,并对二噁英降解酶未来的研究和应用方向进行了展望。

水稻抗旱相关基因OsDR1的克隆、鉴定及表达分析

根据基因表达谱芯片结果,在陆稻品种‘IRAT109’中筛选到抗旱相关基因OsDR1,利用5’-RACE和3’-RACE方法,克隆OsDR1基因的全长cDNA序列,明确基因的转录起始和终止位点。结果显示:OsDR1基因编码的蛋白是卤酸脱卤素酶,具体分子功能未知。qPCR定量表达分析结果表明,OsDR1基因受低温、盐、PEG模拟干旱等多种逆境诱导表达;在叶片中表达受光照诱导和调节,并且在24 h光周期内呈节律性变化。

环境保护及农业废物利用

961589 修饰微生物细胞壁结构用于去除重金属[会,英]/Kim,Y.W.…//Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1995,209 Meet.,Pt.1.-BIOT101[译自DBA,1995,14(22),95-13484]