脱氢紫堇碱对正常和低氧豚鼠心肌细胞内钙的影响

目的 :探讨脱氢紫堇碱 (dehydeocorydaline,DHC)及维拉帕米 (verapamil,Ver)对豚鼠心肌细胞内游离钙浓度([Ca2 + ] i)变化的影响。方法 :采用离体豚鼠心脏Langendorff法灌注 ,用荧光指示剂方法 (Fure 2 /AM)标记心肌([Ca2 + ] i)变化。观察低氧后心肌 [Ca2 + ] i 的变化。结果 :①正常氧状态心肌 [Ca2 + ] i 均值为 (1 2 0 .5± 8.3)nmol/L(n =2 0 ) ;②正常氧条件下 ,DHC、Ver均使心肌 [Ca2 + ] i 明显下降。 (3)低氧状态下 ,心肌 [Ca2 + ] i 增加与缺氧时间(程度 )直线相关 (r=0 .98)。④DHC对低氧后心肌 [Ca2 + ] i 增加明显减缓。结论 :DHC在正常氧、低氧条件下阻止心肌细胞内钙超载 。

LC-MS/MS法测定大鼠口服延胡索提取物后延胡索乙素和脱氢紫堇碱的药代动力学

建立检测大鼠血浆中延胡索乙素和脱氢紫堇碱分析方法,并应用有机溶剂沉淀法提取含药血浆中的生物碱类成分,色谱采用SB-C18反相柱,流动相为乙腈-乙酸铵（0.1%乙酸）梯度洗脱,质谱采用多反应监测（MRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的例子对分别为m/z356.2→m/z191.9（延胡索乙素）和m/z366.2→m/z350.2（脱氢紫堇碱）。测定血浆中这两种成分的线性范围均为1.0-1 000 ng·mL^-1,定量下限为1.0 ng·mL^-1,相关系数分别为0.994和0.992,延胡索乙素的回收率为71.71%-91.59%,脱氢紫堇碱的回收率为83.27%-103.15%,方法的精密度、准确度和稳定性均符合要求。结果显示,该法选择性强、灵敏度高、操作简便,适用于血浆延胡索乙素和脱氢紫堇碱的药代动力学研究。

穿孔膜片钳方法记录L型钙通道及脱氢紫堇碱对其影响的研究

目的比较全细胞膜片钳和穿孔膜片钳方法记录大鼠心室肌细胞L型钙通道电流随时间经过的变化差异,并观察脱氢紫堇碱对L型钙通道的影响。方法采用全细胞膜片钳和穿孔膜片钳方法记录急性分离的大鼠心室肌细胞L型钙通道电流。结果采用全细胞膜片钳法记录到的L型钙通道电流峰值在15 min内衰减了(34±23)%(n=10),采用穿孔膜片钳方法记录到的L型钙通道电流峰值15 min内仅衰减了(2.7±3.4)%(n=9);采用穿孔膜片钳方法能够记录到人参皂苷Re(100μmol.L-1)的抑制效应,而采用全细胞膜片钳方法产生的电流衰减几乎完全掩盖了人参皂苷Re的效应。脱氢紫堇碱(10,100μmol.L-1)能够抑制L型钙通道的电流峰值,抑制率分别为(9±7.5)%(n=5);(28.6±8.5)%(n=5)。结论穿孔膜片钳方法较全细胞膜片钳方法在对L型钙通道电流记录方面更具稳定性和准确性,脱氢紫堇碱能够浓度依赖性的抑制L型钙通道。

高效液相色谱法测定延胡索总生物碱滴丸中巴马汀碱和脱氢紫堇碱含量

目的:采用高效液相色谱法测定延胡索总生物碱滴丸中巴马汀碱和脱氢紫堇碱含量。方法:色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱,流动相为乙腈-水(含0.4%冰乙酸和0.1%三乙胺)(22∶78),检测波长为338nm,柱温30℃。结果:盐酸巴马汀碱浓度在0.044 8～0.268 8μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 3,平均回收率为98.29%,硝酸脱氢紫堇碱浓度在0.23～1.15μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 4,平均回收率为99.83%。结论:方法简便、准确、重现性好,可用于延胡索总生物碱滴丸中含量测定质控指标。

脱氢紫堇碱对内毒素血症大鼠心肌NF-κB和SOD、MDA的影响

目的观察脱氢紫堇碱(DHC)对内毒素血症大鼠心肌核因子-κB(NF-κB)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的影响,探讨DHC对内毒素血症大鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法采用直接尾静脉注射内毒素的方法建立大鼠内毒素血症心肌损伤模型,50只Wistar大鼠随机分成5组:NS对照组、LPS模型组、DHC低剂量组、DHC中剂量组、DHC高剂量组。采用比色法检测血清SOD含量、TBA法测定血清含量,免疫组化组检测心肌组织NF-κB的表达。结果 LPS模型组大鼠血清SOD含量明显减低,而MDA含量明显增高,心肌组织中NF-κB蛋白水平明显增高,与NS对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);予DHC干预后,DHC低、中剂量组可明显使降低的SOD活性升高,而高剂量组与LPS模型组差异无统计学意义(P>0.05);DHC各剂量组可明显降低血清MDA含量,与LPS模型组相近(P<0.01);DHC各剂量组大鼠心肌组织NF-κB蛋白水平明显下降,与LPS模型组比较差异明显(P<0.01)。结论 DHC可以通过降低内毒素血症大鼠心肌组织内NF-κB活性和提高大鼠抗氧化能力,对心肌产生保护作用。

闪式提取延胡索中脱氢紫堇碱的工艺研究

目的优选延胡索药材的最佳闪式提取工艺。方法采用闪式提取技术,以脱氢紫堇碱的得率为指标,采用反相高效液相色谱法测定。选择乙醇浓度、浸泡时间、料液比、提取时间为考察因素,选用L9(34)正交设计-重复试验法优选延胡索药材中脱氢紫堇碱(DHC)最佳闪式提取工艺。结果延胡索药材的DHC最佳闪式提取工艺条件为提取电压70V,乙醇浓度体积分数50%,浸泡时间20 min,提取时间2 min,料液比1∶20。结论闪式提取延胡索药材效率高、时间短,可成为提取脱氢紫堇碱的快速有效方法。

延冰片中脱氢紫堇碱的含量测定

目的:延冰片是由延胡索、冰片以及辅料等组成的片剂,临床用于治疗冠心病,心绞痛。研究旨在制定延冰片中脱氢紫堇碱的含量限度。方法:以脱氢紫堇碱作为延冰片成品的跟踪指标,采用高效液相色谱法测定其含量。结果:延冰片以脱氢紫堇碱作为定性鉴别标准,脱氢紫堇碱的含量不得少4.25mg/g。结论:该方法测定脱氢紫堇碱的含量可行性良好,可作为延冰片质量控制的指标之一。

脱氢紫堇碱的研究概况

脱氢紫堇碱（DHC）又名去氢延胡索甲素，是从罂粟科紫堇属植物延胡索块茎中提取的一种季胺类生物碱。延胡索味苦、辛，性温，归心、肝、脾经，主要功效为活血、行气、止痛，临床多用于气血瘀滞痛证。延胡索中被鉴定的生物碱已达20多种，DHC为其活性成分之一，临床证实对胃溃疡、冠心病、急性心肌梗死均有较好疗效，但在其他方面研究甚少，现就其近年实验及临床研究介绍如下。

脱氢紫堇碱对内毒素血症大鼠心肌保护作用研究

目的研究脱氢紫堇碱(DHC)对内毒素血症大鼠心肌保护作用,并探讨其机制。方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和DHC低、中、高剂量组,每组10只,通过尾静脉注入脂多糖(LPS)建立内毒素血症大鼠心肌损伤模型,以低、中、高剂量的DHC分别进行干预,在用药后1 h采用酶速率法检测血清心肌酶(CK)、心肌同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(TnI)含量,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)含量,光镜观察大鼠心肌组织的病理学变化。结果与对照组相比较,LPS模型组CK、CK-MB、TnI明显上升,DHC低、中剂量组中CK、CK-MB、TnI明显下降(P<0.05),高剂量组与模型组相比无明显差异。LPS模型组、DHC干预组的TNF-α、IL-1β的含量均有显著增加(P<0.01),DHC低、中、高剂量组与LPS模型组相比显著减少(P<0.01)。光镜观察发现模型组大鼠心肌组织炎症反明显,心肌组织较多炎症细胞浸润;脱氢紫堇碱低、中剂量组大鼠心肌组织炎症反应较轻,心肌组织有少量炎症细胞浸润;高剂量组大鼠心肌组织炎症坏死程度介于模型组和中剂量组之间。结论 DHC能有效抑制内毒素血症大鼠心肌组织炎症反应,减轻心肌损伤,在低、中剂量时效果明显。

脱氢紫堇碱对高糖培养心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的观察中药延胡索主要有效成分脱氢紫堇碱（DHC）对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞（CFs）增殖和胶原分泌的影响,为延胡索的临床应用提供实验依据。方法采用体外高糖培养的CFs模型进行实验。以胶原酶与胰蛋白酶联合消化分离出生24 h内乳鼠CFs,取2～4代细胞高浓度葡萄糖（25 mmol/L）培养,分别加入100、50、25 mg/L DHC干预,24、48 h后镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,ELISA测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量。结果 CFs种植3 h后开始贴壁生长,高浓度葡萄糖培养液培养24、48 h后细胞增殖明显增加（P〈0.05,P〈0.01）,48 h后S＋G2＋M期细胞的百分率明显增加（P〈0.01）,细胞分泌Ⅰ型、Ⅲ型胶原量明显升高（P〈0.01）;DHC干预后可显著抑制CFs增殖（P〈0.01）,降低S＋G2＋M期细胞百分率（P〈0.01）,减少Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌（P〈0.05,P〈0.01）。结论 DHC能抑制高糖培养的CFs的增殖,减少胶原分泌,DHC具有潜在的抗心肌纤维化作用。

脱氢紫堇碱对高糖培养心肌成纤维细胞Wnt信号通路的影响

目的采用体外高糖培养心肌成纤维细胞(CFs)的方法,观察脱氢紫堇碱(DHC)对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞Wnt信号通路的影响。方法采用体外高糖诱导心肌成纤维细胞增殖模型,western blot法检测β-catenin,GSK-3β以及P-GSK-3β的蛋白表达水平;ELISA法观察细胞分泌TGF-β1蛋白的能力。结果脱氢紫堇碱可以抑制β-catenin的表达(P<0.01),上调P-GSK-3β的表达(P<0.05),减少TGF-β1的合成(P<0.01)。结论脱氢紫堇碱能抑制Wnt信号通路的异常表达,具有潜在的抗心肌纤维化作用。

脱氢紫堇碱体外对兔血小板中环核苷酸含量的影响

目的:研究脱氢紫堇碱(DHC)对兔血小板中cAMP和cGMP含量的影响以探讨其抑制血小板聚集的作用机制。方法:应用放射免疫分析方法。结果:DHC显著增加兔血小板中cAMP的含量,而降低兔血小板中cGMP的含量。结论:DHC可能通过增加血小板中cAMP的含量和降低血小板中cGMP的含量而产生血小板抑制作用。

HPLC-双波长切换法同时测定双参通冠胶囊中脱氢紫堇碱、丹酚酸B的含量

目的:建立同时测定双参通冠胶囊中脱氢紫堇碱和丹酚酸B含量的方法。方法:采用HPLC-双波长切换法。色谱柱为Waters symmetry C18,以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为286 nm(丹酚酸B)、336 nm(脱氢紫堇碱),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,进样量为10μL。结果:在建立的检测条件下,脱氢紫堇碱和丹酚酸B均能达到基线分离,二者进样量线性范围分别为0.157～1.259μg、0.391～3.131μg(r均为0.999 9);精密度、重复性和稳定性试验(24 h内)的RSD均小于2.00%(n=6～10);平均加样回收率分别为101.61%、102.85%(RSD分别为3.59%、2.85%,n=6)。结论:建立的HPLC-双波长切换法可同时测定双参通冠胶囊中脱氢紫堇碱和丹酚酸B含量,且方法操作简便、快速,可用于双参通冠胶囊的质量控制。

真心平冲剂中原儿茶醛和脱氢紫堇碱含量测定

本文报道真心平冲剂中丹参有效成分原儿茶醛的薄层扫描测定法和元胡有效成分脱氢紫堇碱的纸层析-紫外分光测定法。原儿茶醛量在0.5～2.5μg范围内与斑点面积积分值呈线性关系,变异系数2.69%,加样回收率95.81%.脱氢紫堇碱浓度在1～5μg/ml内与吸收度呈线性关系,加样回收率101.5%。

脱氢紫堇碱的药理作用研究现状与展望

延胡索作为活血行气止痛的经典中药,在临床中被广泛使用。对延胡索主要活性成分脱氢紫堇碱(DHC)的药理作用研究发现,其有镇痛、抗肿瘤、抑制乙酰胆碱酯酶、抗血小板、抗胃肠溃疡、抗过敏、抗菌和抗炎等功效。文章对近年来涉及DHC药理作用的文献进行综合分析,归纳了其当前药理作用研究热点与现状,旨在为DHC新药的进一步研究开发和临床应用奠定基础。

高速逆流色谱-UPLC-Q-TOF-MS/MS法分离制备延胡索中脱氢紫堇碱和海罂粟碱

目的采用高速逆流色谱(HSCCC)快速分离延胡索提取物中脱氢紫堇碱和海罂粟碱。方法以氯仿-正丁醇-甲醇-水(4∶1∶2∶5)混合溶剂作为两相溶剂体系,正转,转速为800 r/min,体积流量为10.0 m L/min,洗脱时间30 min;反转,转速为800 r/min,体积流量10.0 m L/min,洗脱时间30 min,检测波长282 nm,1次进样量50 mg;HPLC-UV法分析目标产物纯度;超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)法对目标产物进行结构鉴定。结果制备得到7.1 mg和3.4 mg 2种单体,收率分别为81.43%和91.11%,利用HPLC法测得其质量分数分别为98.9%和94.3%;经HPLC、紫外光谱和UPLC-Q-TOF-MS/MS鉴定,分别为脱氢紫堇碱和海罂粟碱。结论该方法快速、简便,可以作为对延胡索中脱氢紫堇碱和海罂粟碱的分离制备方法。

脱氢紫堇碱和巴马汀协同l-THP抗吗啡成瘾药效初探

目的初步探寻延胡索中1-2种与左旋延胡索乙素（l-THP）协同抗吗啡成瘾的有效成分。方法小鼠吗啡50 mg·kg^-1腹腔1次注射,至3 h纳洛酮注射建立小鼠吗啡依赖纳洛酮催促戒断跳跃反应模型。按l-THP、脱氢紫堇碱和巴马汀各自在延胡索中自然存在比例（l-THP∶脱氢紫堇碱：巴马汀=1∶2.31∶0.46）配置成＂l-THP-脱氢紫堇碱-巴马汀＂混合液,分别观察l-THP 3 mg·kg^-1单体、混合液（混合液内所含l-THP的量等同l-THP单体治疗组的剂量）灌胃治疗后,对模型小鼠戒断10 min内跳跃反应发生率和每鼠跳跃次数,以及1 h体重改变的影响。结果模型组较生理盐水对照组小鼠跳跃次数和跳跃反应百分率明显增加（P〈0.01）,体重下降（P〈0.01）;l-THP 3 mg·kg^-1组与模型组各指标数据接近（P〉0.05）;混合液组跳跃次数和跳跃反应百分率比模型组均显著减少（P〈0.05）,而体重下降幅度减轻（P〈0.05）。结论从行为学方面初步表明,延胡索水提液中的脱氢紫堇碱和巴马汀成分具有协同l-THP抗吗啡成瘾的药效作用。

脱氢紫堇碱在心肌细胞钙调控中的作用

背景已有动物实验表明脱氢紫堇碱(DHC)可能通过阻止心肌细胞内钙超载,提高心肌细胞的自我保护作用,但还没有相关实验阐明DHC调控心肌细胞保护的分子机制。目的探讨DHC对心肌细胞内Ca2+超负荷及Ca2+调控相关蛋白的表达变化。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对心肌细胞Ca2+调控相关蛋白,包括钙三磷酸腺苷酶(Ca2+-ATPase)、磷酸受钠蛋白(PLB)、斯里兰卡肉桂碱受体2(RYR2)、L型钙通道和肌集钙蛋白(CASQ)的mRNA在转录水平的改变进行了检测,在此基础上,又用western blot法做蛋白表达水平的检测。结果缺氧导致心肌细胞的Ca2+-ATPase、PLB、L型钙通道和CASQ的mRNA转录水平明显减低(P<0.01),而RYR2的mRNA转录水平却升高了(P<0.05)。DHC能使正常、缺氧心肌细胞的RYR2转录表达水平明显减低40%、10%,但CASQ却明显增加36%、82%(P<0.01)。结论心肌细胞的Ca2+-ATPase、CASQ、L型钙通道、PLB和RYR2的表达异常可能是缺氧引起心肌细胞内Ca2+超负荷的分子机制;DHC对缺氧心肌细胞的保护作用与其降低正常和缺氧心肌细胞RYR2及增加CASQ基因转录和蛋白表达有关。

UPLC-MS/MS法测定不同产地延胡索中原阿片碱、盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素和延胡索甲素

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定不同产地延胡索药材中原阿片碱、盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素和延胡索甲素。方法采用Waters UPLC HSS T3 C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈–0.1%醋酸铵为流动相,梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,柱温40℃,进样量5μL。ESI正离子模式采集,采集模式:MRM(多反应检测),离子源温度150℃,毛细管电压3.0 kV,锥孔电压50 V,脱溶剂气流量800 L/h,脱溶剂气温度400℃。结果原阿片碱、盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素和延胡索甲素分别在0.20~10.12、0.25~12.58、1.02~51.20、0.85~42.64、0.39~19.44 ng线性关系良好;平均回收率分别为97.48%、100.16%、101.61%、96.05%、104.17%,RSD值分别为1.70%、2.05%、2.55%、0.74%、3.24%。不同产地的延胡索药材中5种生物碱的含量有明显差异,浙江产地延胡索药材中5种生物碱的含量相对其他产地较高,5种生物碱中脱氢紫堇碱的含量最高。结论UPLC-MS/MS法灵敏度高、测定速度快、准确度高,可用于延胡索药材中5种成分的快速测定。

不同初加工方法对延胡索5种生物碱含量的影响

以延胡索药材中5种生物碱的含量作为评价指标分析水煮、水蒸、醋煮和盐煮4种初加工方法的效果。采用甲醇加热回流法提取,采用高效液相色谱法检测含量。以乙腈-0.01%磷酸水溶液为流动相,按22∶78的比例进行等度洗脱,流速1.0 mL/min,色谱柱(Inertsil ODS-3)温度30℃,检测波长为283 nm。结果表明,原阿片碱、延胡索乙素、掌叶防己碱、小檗碱、脱氢紫堇碱5种生物碱线性范围分别为1.568~78.400、3.444~172.200、0.720~36.000、0.780~39.000、2.632~131.600μg/mL(r≥0.9993);平均回收率(n=6)为94.89%、97.13%、102.39%、98.06%、100.23%,相对标准偏差≤2.10%;4种延胡索加工方法中有效成分含量由高到低依次为水蒸>水煮>醋煮>盐煮,其中以蒸制5 min最佳。该方法简单、准确性高,可为延胡索产地初加工提供科学依据与技术支持。