含未甲基化CpG寡脱氧核苷酸对人外周血树突状细胞抗肿瘤作用的影响

目的 :研究含未甲基化CpG寡脱氧核苷酸 (CpGODN)对人外周血树突状细胞 (dendriticcells ,DC)分化、成熟及其抗肿瘤作用的影响。方法 :分离正常人外周血DC ,透射电镜观察CpGODN刺激组和未刺激组DC的超微结构 ,流式细胞仪分析其表面HLA DR、CD86的表达 ,MTT法检测其对同种异体混合淋巴细胞反应 (mixed lymphocytereactor ,MLR)中T细胞增殖的影响及调节T细胞杀伤肿瘤的能力。结果 :与未刺激组相比 ,CpGODN刺激组DC表面突起细、长且规则 ,粗面内质网增多 ,空泡减少甚至消失 ;同时DC表面HLA DR、CD86的表达上调 ,能明显促进MLR中T细胞的增殖 ,增强DC调节T细胞杀伤肿瘤活性。结论 :CpGODN可诱导人外周血DC分化成熟 。

含非甲基化胞苷-磷酸盐-鸟苷寡脱氧核苷酸在非小细胞肺癌治疗中的应用进展

非甲基化胞苷-磷酸盐-鸟苷(CpG)寡脱氧核苷酸(ODN)属于Toll样受体9(TLR9)激动剂,其功能主要通过TLR9信号系统来体现。根据构效关系,共鉴别出K型、D型、C型和P型4个类别的CpG ODN,分别对B细胞和浆细胞样树状突细胞产生不同刺激作用。无论单独应用CpG ODN,抑或联合化疗、放疗,还是联合靶向药物或疫苗,对非小细胞肺癌的治疗均有一定的增效作用。该文也简述了CpG ODN的安全性。

甲基化SIM2、GNA12、CTGF在子痫前期孕妇中表达水平及其对疾病的预测价值

目的 探究子痫前期孕妇血浆中甲基化DNA的表达水平及对子痫前期发生的预测价值。方法 纳入2022年1-12月在该院确诊的82例子痫前期孕妇作为观察组,另外纳入82例健康孕妇作为对照组。提取患者游离总DNA,经过DNA亚硫酸氢盐修饰后通过实时荧光定量PCR反应(qRT-PCR)检测患者血浆中甲基化单意同源物2(SIM2)、结缔组织生长因子(CTGF)及鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(GNA12)基因的相对表达水平,并采用相关性分析及受试者工作特征(ROC)曲线对各甲基化DNA预测子痫前期发生的价值进行评估。结果 观察组血浆甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平均高于对照组(P<0.05),且重度子痫前期孕妇各甲基化DNA相对表达水平更高(P<0.05)。相关性分析结果表明,血浆甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平与孕妇发生子痫前期均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果表明,血浆甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平单独及联合检测对预测孕妇子痫前期的效能均较好,且三者联合检测的预测效能最高(曲线下面积为0.888,95%CI:0.827~0.949)。结论 相较于健康孕妇,子痫前期孕妇血浆中甲基化SIM2、GNA12、CTGF相对表达水平均较高,且其与孕妇子痫前期的发生率呈正相关,血浆甲基化SIM2、GNA12及CTGF相对表达水平有望成为判断子痫前期是否发生的重要指标。

DNA甲基化与高同型半胱氨酸血症

DNA甲基化是一种调控基因表达的表观遗传机制,由Hcy代谢相关底物S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosyl-L-homocysteine,SAH)依赖性的DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)催化,对维持细胞稳态至关重要。多项研究表明,高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)可能通过调节甲硫氨酸-同型半胱氨酸循环(methionine-homocysteine cycle,M-H cycle)调控DNA甲基化状态,参与动脉粥样硬化形成过程中的血管内皮细胞功能障碍、损伤后平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)的增殖和转移、脂质代谢等病理过程,从而影响心血管疾病的发生和预后。

甲基化寡聚核苷酸作为靶基因抑制剂的研究进展

反义RNA对靶基因的抑制作用近来越来越受到人们的重视,这是因为反义RNA能在分子水平上有效地抑制有害的靶基因表达,为发展新一代治疗药物提供了可靠的理论基础。当反义RNA和靶mRNA的起始编码区(initiation coding region)互补结合或和一个靶mRNA前体的拼接区(splicing junction)互补结合形成三螺旋结构(triple stranded complexes),则这个mRNA的翻译或mRNA前体的拼接加工将被抑制,最后阻断这些靶基因正常表达。故反义RNA既可作为遗传分析的强有力的工具又可促进发展新一代基因型治疗试剂。因此,

用甲基化的寡聚核苷酸作反义制剂

在含甲基磷酸根的寡核苷酸中,核苷酸之间含有非离子键,能抵抗细胞核酸酶的降解。一这种寡聚物能被培养的哺乳动物细胞完全吸收,它们能与细胞或病毒mRNA的启始密码或编码区或前体RNA的拼接位点有效的结合,特异性地抑制mRNA在细胞中表达。在甲基磷酸根寡核苷酸上衍生与靶mRNA共价交联的功能团,可以增强这种反义寡聚物的效率。这种寡聚核苷酸类似物是研究和控制基因表达的有用工具,并有希望开发成为治疗制剂。 最近。

泛癌症DNA甲基化位点聚类分析

当前对脱氧核糖核苷酸甲基化的研究大多局限在单一疾病中单个基因或者某个较小的区域.针对这一局限,提出了一种基于聚类的甲基化分析方法,从泛癌症角度、在全基因组水平上挖掘甲基化模式.首先对多种癌症进行差异甲基化位点筛选;然后对差异甲基化位点进行聚类;最后进行生物富集分析.在泛癌症项目提供的6种癌症上进行了实验研究,通过筛选得到2 184个差异甲基化位点,通过聚类得到9个甲基化簇.在甲基化簇中进行的模式分析结果显示,不同类型的癌症在甲基化模式上存在共性,甲基化和基因表达之间关系较为复杂,不是单纯的正负相关关系.富集分析结果表明,该项研究得到的基因集合在多个癌症的通路中存在显著富集.

含CpG元件的寡脱氧核苷酸可在体外抑制乙肝病毒复制

据医学空间网9月6日报道（原载Immunol Lett 2005 Aug 13），在特定位点含有非甲基化的胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸（CpG元件）的寡脱氧核苷酸（ODNs）是有力的免疫激活剂，还可诱导若干Th1类免疫调节因子的生成。动物试验提示，CpG ODNs有望作为疫苗佐剂及免疫保护因子。

胃癌患者外周血与胃癌组织中ERCC1基因甲基化的关系及其意义

背景与目的:胃癌的发生基于基因和表观遗传学机制,表观遗传学的改变在胃癌的发展中起到重要作用。DNA甲基化是目前研究最多、最为深入的一种表观遗传学表达机制。DNA甲基化是一个可逆性过程。核苷酸切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementing gene 1,ERCC1)是一种DNA损伤修复基因。本研究检测胃癌患者外周血与胃癌组织中ERCC1基因启动子CpG岛甲基化状态,探讨两者的关系及其意义。方法:采用甲基化特异性PCR技术,检测30例胃癌患者外周血、胃癌组织中ERCC1基因启动子CpG岛甲基化状态。结果:胃癌组织中ERCC1基因启动子CpG岛甲基化率为76.7%(23/30),外周血中ERCC1基因启动子CpG岛甲基化率为63.3%(19/30),差异无统计学意义。结论:胃癌患者外周血中的ERCC1基因启动子CpG岛甲基化率与胃癌组织中相似,检测胃癌患者外周血中的ERCC1基因启动子CpG岛甲基化状态为治疗胃癌提供一个简便、快捷、可靠的途径,同时也为以ERCC1基因启动子CpG岛甲基化作为靶点治疗胃癌提供了可靠的理论依据。

GNA12基因甲基化与子痫前期的相关性分析

目的探讨鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(GNA12)基因启动子各位点甲基化水平、基因表达与子痫前期之间的关系。方法选取分娩孕妇中子痫前期患者(病例组)和正常孕妇(对照组)胎盘各50例,外周血各25例,采用甲基化特异性PCR技术和real-time PCR技术分析GNA12基因启动子区Cp G岛甲基化状态和mRNA的表达。结果病例组的胎盘组织及孕母外周血的GNA12 63位点的甲基化程度均低于对照组(P=0.003,P=0.004 3);病例组mRNA表达量高于对照组(P=0.013);胎盘组织甲基化率与外周血甲基化率具有相关性(P<0.000 1)。结论 GNA12基因启动子的甲基化水平与子痫前期的发病存在相关性。通过检测孕母外周血GNA12基因,可能可预测子痫前期的发生。

DNA甲基化在肾癌诊治的应用

肾癌的发生与形成是多基因改变的复杂过程,而参与其中的机制主要有2类:①遗传学机制,即通过DNA核苷酸序列改变而形成突变,引起肿瘤形成;②表观遗传学机制,即在DNA核苷酸序列不变的情况下,通过碱基修饰而引起基因水平的变化。作为表观遗传学家族中的重要成员,DNA甲基化程度的异常变化可影响肾癌相关基因的转录,从而影响肾癌的发生。现对DNA甲基化在肾细胞癌中的早期诊断、治疗靶点、预后监测和病理分期等临床应用作一综述。

子痫前期与GNA12启动子甲基化的相关性分析

目的探讨鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(GNA12)启动子甲基化程度与子痫前期(pre-eclampsia,PE)的关系。方法选取2016年8月至2017年7月宝鸡市妇幼保健院收治的PE患者共50例作为研究组,另取同期行正常孕检的孕妇50例作为对照组,通过Massar Ray核酸质谱分析系统分析两组胎盘外周血DNA样本中GNA12启动子8个Cp G位点的甲基化水平及m RNA表达情况。结果研究组胎盘DNA样品中,73位点、109位点、185位点及204位点的GNA12甲基化程度显著小于对照组(P<0.05),外周血样品中73位点和185位点的GNA12甲基化程度显著小于对照组(P<0.05)。研究组GNA12基因的m RNA表达水平显著高于对照组(P<0.05)。结论 PE与GNA12启动子的甲基化水平降低相关,可对胎盘和外周血进行基因检测,且外周血检测更加便捷,对PE的早期诊断有一定的临床意义。

胃癌ERCC1基因甲基化的研究

目的检测胃癌组织、相应癌旁组织及正常胃组织中ERCC1基因甲基化状态。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测ERCC1基因甲基化。结果胃癌组织中ERCC1基因完全甲基化率为46.7%(14/30),部分甲基化率为30.0%(9/30),总甲基化率为76.7%(23/30),显著高于相应的癌旁组织中该基因的甲基化率13.3%(4/30)。10例正常胃组织中该基因未发生甲基化。结论胃癌组织中存在高比例的ERCC1基因甲基化。

DNA异常甲基化与胃癌

DNA甲基化是具有可逆性与遗传性的一种基因修饰方式,在哺乳动物中,DNA甲基化主要发生在CpG二核苷酸胞嘧啶核苷的嘧啶环5位碳原子上,且双链对称出现.胞嘧啶核苷的嘧啶环第5位碳原子在DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases）介导下以S-腺苷蛋氨酸作为甲基供体而发生甲基化.DNA甲基化可以抑制基因表达,DNA异常甲基化表现为高甲基化和低甲基化.在肿瘤组织中,基因异常甲基化主要表现为某些特殊基因高甲基化和全基因组整体低甲基化.高甲基化一方面引起基因突变率增加,另一方面在肿瘤发生过程中抑癌基因的高甲基化导致肿瘤的发生和转移.全基因组的低甲基化容易引起基因突变[1]、染色体杂合性丢失[2]、原癌基因活化[3]等从而导致肿瘤的发生.甲基化可以作为肿瘤特异性标志物在肿瘤的诊断、预防以及治疗方面发挥一定的作用.胃癌是世界范围内发病率仅次于肺癌的恶性肿瘤,其发生发展与基因甲基化有密切的关系.本文就胃癌发生发展过程中伴随的基因甲基化改变作一综述.

CpG寡聚核苷酸的免疫激活机理及生物学活性

脊椎动物能够识别入侵的微生物是基于病原体的特定分子结构，这些被认为是病原体相关分子模式（pathogen—associated molecular pattern，PAMP）的结构能够被宿主体内模式识别受体（pattern recognition receptor，PRR）所识别，从而产生免疫应答。细菌和病毒基因组中所携带的非甲基化CpG（胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸）至少是脊椎动物中的20倍，并且脊椎动物的DNA甲基化程度比较高。细菌和脊椎动物这种在DNA上的显著差别使得细菌基因组在进化过程中成为PAMP从而被脊椎动物识别为“危险的入侵信号”，并做出相应的免疫应答。

DNA甲基化与肿瘤诊断

DNA甲基化异常是人类肿瘤中常见的表观遗传变化之一,伴随着肿瘤的发生和发展,且该异常现象在肿瘤患者的外周循环血清、血浆和尿液等体液中都可检测到。因此,利用DNA甲基化分析技术检测体液中特定分子DNA甲基化水平是肿瘤早期诊断、病程监控和疗效评估的潜在手段,对临床肿瘤的诊治意义重大。

CpG岛甲基化与胃癌的关系

表观遗传学的研究表明,肿瘤的形成往往伴随着抑癌基因启动子区域CpG岛的异常甲基化修饰。胃癌也是如此。CpG岛是指CpG二核苷酸聚集区域,呈不连续分布,长度〉200kb[1]。在整个基因组中,CpG岛通常位于基因的启动子区域,其次CpG岛还位于第一外显子区域,故又称5′-CpG岛[2]。CpG岛甲基化在肿瘤发生、

未甲基化寡聚脱氧核苷酸对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠Toll样受体9和核转录因子B的影响

目的 观察未甲基化寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN）对链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病大鼠Toll样受体9（TLR9）、核转录因子B（NF-κB）及血清辅助性T细胞1型（Th1）、2型（Th2）炎症因子的影响.方法 取5～6周龄雄性SD大鼠40只,随机分为4组：正常对照组（Ⅰ组）、1型糖尿病组（Ⅱ组）、低剂量CpG-ODN（Ⅲ组）和高剂量CpG-ODN 1型糖尿病组（Ⅳ组）.STZ诱导建立1型糖尿病模型,分别给Ⅲ、Ⅳ组皮下注射不同浓度的CpG-ODN,免疫印迹和荧光定量PCR法检测大鼠脾脏和胰腺TLR9和NF-κB的表达;ELISA法测定各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-6（IL-6）水平.结果 4组大鼠TLR9蛋白在脾脏的表达均明显高于在胰腺中的表达;脾脏组织中,Ⅲ和Ⅳ组TLR9和NF-κB的mRNA和蛋白的表达较Ⅰ组和Ⅱ组明显升高,Ⅳ组TLR9和NF-κB的mRNA和蛋白表达较Ⅲ组升高;胰腺组织中,Ⅲ组和Ⅳ组TLR9和NF-κB（p65）蛋白的表达较Ⅱ组升高,Ⅳ组TLR9和NF-κB（p65）蛋白表达较Ⅲ组升高;Ⅲ组和Ⅳ组血清TNF-α和IFN-γ水平较Ⅰ和Ⅱ组升高,Ⅳ组血清TNF-α和IFN-γ水平高于Ⅲ组.结论 CpG-ODN激活STZ诱导糖尿病大鼠TLR9通路,胰腺和脾脏NF-κB的表达在一定范围内呈剂量依赖性增加.

含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响与ATM激酶的关系

目的探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸（unmethylatedcytosine-phosphate．guanineoligodeo。ynucleotides，CpGODN）7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响及毛细血管扩张共济失调突变（ATM）激酶磷酸化在这一过程中的作用。方法人肺腺癌A549细胞用随机表法分为5组，对照组、CpG组、单纯照射组、CpG＋x射线组和ATMsiRNA＋CpG＋x射线组。采用集落形成法观察细胞存活率。流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。Westernblot检测ATM激酶及其下游底物周期检测点激酶2（checkpointkinase2，Chk2）和P53蛋白的表达。结果A549细胞经CpGODN7909预处理后，在x射线照射下生长缓慢，集落形成明显减少，与单纯照射组比较，差异有统计学意义（t=13．41，P〈0．05）；增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞G2／M期阻滞和凋亡，与单纯照射组比较，差异有统计学意义（t=17．32和7．71，P〈0．05）；明显增加了X射线诱导的ATM、Chk2及P53蛋白磷酸化水平；小分子干扰RNA暂时性抑制ATM的表达后，CpGODN7909对x射线诱导G2／M期阻滞及凋亡的作用减弱，与CpG＋X射线组比较，差异有统计学意义（f=26．84和2．98，P〈0．05）。结论CpGODN7909在体外增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞ATM激酶磷酸化，这一作用可能参与G2／M期阻滞和凋亡的调节。