敲低DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)抑制Bel7402/5-Fu耐药肝癌细胞的细胞周期及机制

目的研究DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对Bel7402/5-氟尿嘧啶(5-Fu)肝癌耐药细胞的细胞周期及机制的影响,探讨DNA-PKcs影响化疗敏感性的相关机制。方法采用MTT法检测Bel7402/5-Fu细胞转染siDNA-PKcs后,对5-Fu、阿霉素(ADM)的敏感性;采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs寡核苷酸片段转染Bel7402/5-Fu细胞;流式细胞术检测细胞周期;Western blot法检测细胞P21、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、细胞分裂周期蛋白2(CDC2)的蛋白表达情况;实时定量PCR检测细胞毛细血管扩张共济失调突变基因(ATM)、p53的mRNA水平,Western blot法检测细胞ATM、P53蛋白水平。结果敲低细胞DNA-PKcs水平后,siDNA-PKcs组5-Fu、ADM的半数抑制浓度(IC50)明显降低,S期细胞减少、G2/M期细胞增多,细胞周期抑制因子P21蛋白水平增加,cyclin B1、CDC2蛋白水平降低,ATM、p53的mRNA及蛋白水平增加。结论敲低DNA-PKcs水平,增加P21蛋白水平,同时抑制cyclin B1、CDC2蛋白水平,诱导Bel7402/5-Fu细胞G2/M期阻滞,其机制可能与ATM-p53信号途径有关。

慢性髓系白血病DNA依赖蛋白激酶催化亚基基因的研究

本研究旨在探讨髓系粒细胞白血病(CML)的DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)基因表达水平、调控机制及其在CML急性变中的作用。用半定量RT-PCR、Western blot方法分别检测62例CML患者及K562细胞的DNA-PKcs mRNA和DNA-PKcs蛋白表达,并与23例正常人作对照;对26例接受同种异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)及4例使用伊马替尼治疗的CML患者用RT-PCR、Western blot方法分别动态检测bcr-abl mRNA和DNA-PKcs蛋白表达水平;用伊马替尼体外作用CML患者的单个核细胞(MNC)及K562细胞后,用RT-PCR、Western blot方法分别检测DNA-PKcs mRNA和DNA-PKcs蛋白表达及bcr-abl融合蛋白的酪氨酸磷酸化水平。结果表明:与正常人比较,CML患者及K562细胞的DNA-PKcs蛋白表达量明显降低(P<0.05);26例allo-PBSCT及4例使用伊马替尼治疗的CML患者,DNA-PKcs蛋白表达量随着bcr-abl mRNA表达量的降低而升高;伊马替尼体外作用于CML患者MNC及K562细胞后,DNA-PKcs蛋白表达量随着bcr-abl融合蛋白酪氨酸磷酸化水平的降低而升高。结论:bcr-abl融合基因通过转录后机制下调DNA-PKcs蛋白的表达;DNA-PKcs蛋白表达下降可能是CML急性变的机制之一。

DNA依赖蛋白激酶催化亚基与细胞周期蛋白T2相互结合的鉴定

目的鉴定与DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNAPKcs)相互结合的蛋白,以深入探讨其生理功能。方法通过免疫共沉淀获得DNAPKcs的相互结合蛋白复合物,SDSPAGE电泳分离蛋白,肽质指纹分析和Western印迹鉴定蛋白。结果以DNAPKcs抗体进行免疫共沉淀从HeLa细胞中获得DNAPKcs的相互结合蛋白,对部分结合蛋白进行质谱分析和蛋白数据库检索,发现转录延伸因子PTEFb的亚基细胞周期蛋白(cyclin)T2是其中之一。其后,通过Western印迹检测,进一步证实DNAPKcs与cyclinT2相互结合作用。结论首次发现DNAPKcs与cyclinT2的相互结合,提示DNAPKcs参与基因转录调控或转录偶联修复反应的生物学功能。

DNA-蛋白激酶依赖蛋白激酶催化亚基在鼻咽癌中的表达及意义

目的探讨DNA-蛋白激酶依赖蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法选取2007年5月~2012年7月于广西壮族自治区人民医院肿瘤中心的83例鼻咽癌患者（鼻咽癌组）和32例鼻咽炎患者（鼻咽炎组）,通过免疫组织化学的研究方法分析DNA-PKcs的表达情况,并通过分层分析的方法评估DNA-PKcs与鼻咽癌临床病理学因素之间的联系,进一步分析DNA-PKcs的表达与鼻咽癌预后之间的相关性。结果鼻咽癌患者DNA-PKcs的表达明显高于鼻咽炎患者,差异有高度统计学意义（P〈0.01）;DNA-PKcs的表达水平与鼻咽癌的病理分型、临床分期、体力量表评分、年龄、性别无关（P〉0.05）;DNA-PKcs的表达水平与鼻咽癌患者的近期疗效无显著相关性（P〉0.05）;DNA-PKcs的表达水平越高,鼻咽癌患者的远期生存时间越长（P〈0.01）。结论 DNA-PKcs在鼻咽癌中高表达可以作为一个鼻咽癌预后的预测指标。

DNA依赖性蛋白激酶催化亚基在非同源末端连接修复中作用的研究进展

DNA的精确复制对维持基因组稳定性具有重要作用,而DNA双链断裂(DSB)损伤可能诱导细胞凋亡和染色质重排,在肿瘤的发生发展过程中发挥作用。DNA依赖性蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)是磷脂酰肌醇3-激酶样蛋白激酶(PIKK)家族中相对分子质量最大及表达量最高的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。与Ku70/80结合后,DNA-PKcs在离子辐射诱导DSB后的非同源末端连接(NHEJ)有效修复过程中,发挥非常重要的作用。DNA-PKcs或其他NHEJ修复因子的缺失会导致辐射敏感性和DSB的未修复,以及V(D)J重组缺陷和免疫缺陷。本文主要对DNA-PKcs的结构,在DSB位点的募集与激活,在NHEJ修复中的作用过程及其与疾病的关系进行总结与展望,希望能为DNA-PKcs的深入研究及临床应用提供理论基础。

硝普钠及SOD降低大鼠心肌细胞DNA蛋白激酶二聚体和Ku70/80表达

目的观察硝普钠(SNP)及自由基清除剂超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)对大鼠心肌细胞H9C2和心肌组织DNA-PKcs和Ku70/80表达的影响。方法体外培养H9C2心肌细胞按SNP浓度和加入的自由基清除剂SOD和CAT浓度分组;SD大鼠随机分为5组,每组8只,分别采用0.9%氯化钠溶液、SNP、SNP+SOD、SNP+CAT和SNP+SOD+CAT行腹腔注射,1周后收集心肌组织。用Western blot法检测各组细胞DNA-PKcs和Ku70/80表达,免疫组织化学法检测DNA-PKcs和Ku70/80表达。结果心肌细胞的DNA-PKcs和Ku70/80蛋白相对表达量均随SNP剂量增加呈递增趋势;加入SOD或CAT或二者合用,均显著降低DNA-PKcs和Ku70/80表达(P<0.05)。SNP组、SNP+SOD组、SNP+CAT组和SNP+SOD+CAT组大鼠心肌组织DNA-PKcs和Ku70/80表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。结论自由基清除剂SOD和CAT能够通过降低心肌细胞DNA-PKcs和Ku70/80的表达拮抗NO对心肌细胞的损伤。

猪带绦虫cAMP依赖性蛋白激酶催化亚基(PKA-C)基因的鉴定及表达

为鉴定猪带绦虫cAMP依赖性蛋白激酶催化亚基基因(Ts PKA-C),分析其作为诊断抗原的可行性,利用猪带绦虫基因组和转录组数据设计猪带绦虫Ts PKA-C特异引物,以猪带绦虫成虫总RNA为模板,通过RT-PCR扩增Ts PKA-C基因的完整ORF,并通过生物信息学分析进行鉴定。构建p ET-30a(+)-Ts PKA-C重组表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明,Ts PKA-C的ORF由1 032个核苷酸组成,编码343个氨基酸残基,与细粒棘球蚴和多房棘球蚴氨基酸序列的一致性分别达78.7%和98.0%;Ts PKA-C具有蛋白激酶A的结构域及其催化亚基特征性活性位点,且存在9个潜在的线性B淋巴细胞抗原表位。Ts PKA-C基因的表达产物主要以包涵体形式存在,且可与猪囊尾蚴病阳性血清发生反应,在42 ku处产生特异条带。本研究克隆并鉴定了Ts PKA-C基因,其表达产物可被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。

重组慢病毒介导RNA干扰抑制DNA依赖蛋白激酶催化亚基表达对肺癌细胞中C225诱导表皮生长因子受体核转位及敏感性的影响

目的 构建人DNA依赖蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）基因RNA干扰慢病毒载体,观察在非小细胞肺癌细胞株中沉默DNA-PKcs对C225诱导的表皮生长因子受体（EGFR）核转位及C225抑制细胞增殖的影响.方法 构建慢病毒干扰载体（LV-si-DNA-PKcs）感染A549细胞.荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测DNA-PKcs mRNA表达;Western blot检测DNA-PKcs和细胞核EGFR蛋白的表达.细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测C225对细胞的增殖抑制作用.结果 LV-si-DNA-PKcs感染的A549细胞见绿色荧光,感染率达95％以上;LV-si-DNA-PKcs有效干扰DNA-PKcs蛋白及mRNA表达水平（P＜0.05）.加C225前未见细胞核EGFR表达.C225处理1h,LV-si-DNA-PKcs细胞株见细胞核EGFR表达,持续用药4、24 h细胞核EGFR表达无明显增加;在LV-si-control细胞株及空白组,C225处理1、4、24h后细胞核EGFR表达逐渐增多.C225处理48 h后,LV-si-DNA-PKcs细胞株的细胞存活率开始低于其他2组细胞,72 h细胞存活率明显降低[（40.04±2.89）％比（55.82±7.11）％、（52.67±1.43）％,F=9.392,P＜0.01].结论 抑制A549细胞中DNA-PKcs表达,在一定程度上抑制了C225诱导的EGFR细胞核转位,增强C225对细胞的增殖抑制作用.

DNA依赖蛋白激酶催化亚基抑制剂NU7026对结肠癌HCT116癌干细胞的放射增敏作用

目的 以结肠癌细胞HCT116为研究对象,评价DNA依赖蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）抑制剂NU7026对癌干细胞的放射增敏作用及其机制。方法 以CD133＋/CD44＋为标志物,流式细胞术检测癌干细胞亚群。将HCT116细胞分为对照组、单纯药物（20 μmol/L NU7026）组、单纯照射（2 Gy γ射线）组和药物＋照射（20 μmol/L NU7026联合2 Gy γ射线）组,照射前2 h加入NU7026。细胞集落形成实验检测HCT116细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡, γ-H2AX foci的免疫荧光激光共聚焦分析DNA双链断裂损伤修复。结果 体外培养HCT116细胞中CD133＋/CD44＋癌干细胞亚群比例高达（88.14±0.47）%,HCT116细胞低密度接种无血清培养基中集落形成率为（84.75±1.35）%。与单纯照射组比较,药物＋照射组细胞存活率显著降低（t=7.22,P〈0.01）。受照后48 h,药物＋照射组的癌干细胞亚群比例较单纯照射组显著降低（t=9.55,P〈0.01）。受照后24 h,NU7026明显增加G2/M期阻滞（t=7.67,P〈0.01）,48 h细胞早期凋亡发生率也明显增加（t=8.24,P〈0.05）。药物＋照射组在照后2、4、8和24 h DNA双链断裂（γ-H2AX foci）残留比单纯照射组明显增多（t=19.58、11.95、7.01和9.45,P〈0.01）。结论 NU7026对癌干细胞为优势亚群的结肠癌HCT116细胞具有明显的放射增敏作用,显著增加对癌干细胞的杀伤效应,增敏机制包括抑制DNA修复,诱发不可逆G2/M期阻滞和增加细胞凋亡。

DNA依赖性蛋白激酶催化亚基在电离辐射诱发HeLa细胞自噬中的作用

目的了解DNA依赖性蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)在电离辐射诱发细胞自噬中的作用。方法通过慢病毒载体(p SicoR)构建DNA-PKcs短发夹RNA(shRNA)表达载体,并转染HeLa细胞敲低DNA-PKcs表达。CCK-8实验检测细胞增殖活性及细胞放射敏感性,免疫印迹检测自噬相关蛋白表达,免疫荧光实验检测自噬标志物GFP-LC3的表达。结果成功构建shRNA敲低DNA-PKcs表达的HeLa细胞模型,通过该细胞模型观察到抑制DNA-PKcs蛋白表达导致细胞增殖能力降低、放射敏感性增高。P62和LC3蛋白表达变化,以及细胞内绿色荧光蛋白(GFP)-LC3免疫荧光斑检测结果显示,DNA-PKcs基因敲低后,明显增加X射线诱发细胞自噬。抑制DNA-PKcs导致哺乳动物西罗莫司(雷帕霉素)靶蛋白(mTOR)第2481位丝氨酸磷酸化水平降低。结论抑制DNA-PKcs增强受照射宫颈癌HeLa细胞的自噬及放射敏感性,mTOR信号通路可能参与DNA-PKcs对自噬的调节作用。

DNA依赖型蛋白激酶催化亚单位在辐射诱导的DNA损伤应答中的作用

哺乳类细胞基因组DNA损伤会迅速引发DNA损伤反应（DNA damage response,DDR）,这一反应涉及一系列复杂DNA损伤信号传导、分子变化和细胞学应答.有些很重要的DNA损伤反应蛋白能参与多个细胞学反应的调控,发挥交叉耦联分子的作用.DNA依赖蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）是DNA双链断裂的非同源末端连接修复途径的关键组分,属于磷脂酰肌醇3-激酶家族成员,近年来的研究发现其在DNA损伤的早期信号过程、修复、细胞周期检查点、有丝分裂调节及凋亡等一系列DNA损伤应答反应中起重要作用.本文就DNA-PKcs在DNA损伤应答中的作用机制研究进展进行了综述.

NSCLC中DNA-PKcs的表达及其与凋亡相关蛋白关系的研究

目的 检测非小细胞肺癌 (NSCLC)中DNA依赖蛋白激酶催化亚基 (DNA PKcs)的表达 ,探讨其与凋亡相关蛋白表达之间的关系。方法 采用免疫组化SP法检测 113例NSCLC患者肿瘤组织中DNA PKcs、p5 3和bcl 2的表达。 结果 NSCLC中DNA PKcs、p5 3和bcl 2的检出率分别为 89.3 8%、61.95 %及5 9.2 9% ;DNA PKcs的表达顺序依次为细支气管肺泡癌 >腺癌 >腺鳞癌 >鳞癌 ,而且DNA PKcs表达水平随肿瘤分化程度的增高亦逐渐增高 ,差异均具有高度显著性 (P <0 .0 5 ) ,但其表达与淋巴结转移无明显关系 ;p5 3在不同临床病理类型NSCLC中的表达无明显差别 ;bcl 2在不同组织学类型NSCLC中的表达顺序依次为鳞癌 >腺鳞癌 >腺癌 >细支气管肺泡癌 ,差异具有高度显著性 (P <0 .0 1) ,但其表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移无关 ;DNA PKcs与 p5 3 (P <0 .0 1)、p5 3和bcl 2 (P <0 .0 5 )的表达之间有显著相关性。 结论 DNA PKcs高表达导致的DNA损伤修复系统活性增高以及突变型p5 3和bcl 2过表达导致的凋亡抑制相互影响、共同作用 。

c-Myc蛋白与DNA-PKcs作用位点的鉴定

DNA-PK复合物由Ku蛋白和DNA依赖蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）组成,DNA-PKcs属于PI3K相关激酶家族成员.我们前期工作发现,DNA-PKcs沉默后,c-Myc的稳定性下降,且二者存在相互作用.为进一步确定c-Myc蛋白与DNA-PKcs相互作用位点,本研究利用原核表达系统活动了c-Myc及其截短体蛋白,利用GSTpull-down技术结合Western印迹法,发现c-Myc蛋白294-370位氨基酸与DNA-PKcs存在相互作用.在细胞内表达GFP-c-Myc各截短体蛋白,发现294-370位氨基酸是c-Myc蛋白降解必需的.利用免疫荧光技术,发现DNA-PKcs与c-Myc蛋白有相同的细胞亚定位,进一步表明两者在生物学功能上具有相关性.有文献报道294-370位氨基酸是乙酰转移酶p300的底物,此位点的乙酰化导致c-Myc的降解.本实验结果提示,c-Myc蛋白的294-370位氨基酸与DNA-PKcs结合,可能阻止了乙酰转移酶p300的结合,从而达到提高c-Myc蛋白稳定性的作用.

琥珀酸脱氢酶B亚基对卵巢癌细胞线粒体DNA拷贝数影响的研究

目的:探讨琥珀酸脱氢酶B亚基(SDHB)对卵巢癌线粒体DNA(mtDNA)相对拷贝数的影响。方法:Real-time PCR法检测人卵巢良性肿瘤组织、卵巢癌组织中SDHB mRNA水平,检测mtDNA相对拷贝数(mtND2/HBB)和线粒体转录因子A(TFAM)水平。siRNA干扰SKOV3和A2780中SDHB表达,real-time PCR检测干扰前后mtND2/HBB、TFAM和DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs,也称作PRKDC)水平;CCK-8法检测癌细胞对顺铂的化疗耐药性。Western blot法检测p-p38和DNA损伤标记蛋白γ-H2AX蛋白水平。结果:人卵巢癌组织中SDHB表达低于卵巢良性肿瘤组织,mtND2/HBB和TFAM水平高于卵巢良性肿瘤组织。siRNA干扰SKOV3和A2780中SDHB表达后,mtND2/HBB和PRKDC显著升高,TFAM水平升高不显著。SDHB低表达显著上调p-p38蛋白水平,显著降低γ-H2AX蛋白水平。结论:SDHB在人卵巢癌组织中低表达,SDHB低表达显著增加卵巢癌细胞mtDNA相对拷贝数,提高卵巢癌细胞化疗耐药性,其机制可能与SDHB通过p38 MAPK通路影响DNA损伤修复相关。

DNA-PKcs蛋白表达对鼻咽癌预后影响的研究

目的：研究DNA-PKcs蛋白表达与鼻咽癌预后的关系。方法：收集2007年5月-2012年2月经广西壮族自治区人民医院病理学确诊为鼻咽癌且选择调强放疗的患者100例。其中13例失访。采用免疫组化SP法检测87例患者中DNA-PKcs蛋白在鼻咽癌组织中的表达,分析DNA-PKcs蛋白表达与患者近期疗效、总生存以及发生远处转移之间的关系。结果：87例患者DNA-PKcs高表达60.0%,低表达40%。DNA-PKcs的表达水平与患者的近期疗效无关（P=0.348）；但与患者生存时间呈正相关（r=0.234,P=0.048）,单因素分析显示DNA-PKcs低表达者较高表达者更容易发生远处转移（P=0.001）,而且生存时间更短（P=0.007）。结论：鼻咽癌组织中DNA-PKcs的表达水平与患者近期疗效无关,DNA-PKcs低表达可能作为预测鼻咽癌患者预后较差的一个指标。

细胞周期监控点蛋白Rad9与非同源末端连接修复蛋白Ku70的相互作用研究（英文）

Rad9是一种重要的细胞周期监控点调控蛋白.越来越多的证据显示,Rad9也可与多种DNA损伤修复通路中的蛋白质相互作用,并调节其功能,在DNA损伤修复中发挥重要作用.非同源末端连接修复是DNA双链断裂的一条重要修复途径.Ku70、Ku80和DNA依赖的蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)共同组成DNA依赖的蛋白激酶复合物(DNA-PK),在非同源末端修复连接中起重要作用.本研究中,检测到Rad9与Ku70有直接的物理相互作用和功能相互作用.我们在不同的细胞模型中发现,Rad9基因敲除、Rad9蛋白去除或Rad9表达降低会导致非同源末端连接效率明显下降.已有的研究表明,DNA损伤可导致细胞中Ku70与染色质结合增加及DNA-PKcs激酶活性增强.我们的结果显示,与野生小鼠细胞相比,Rad9基因敲除的小鼠细胞中, DNA损伤诱导的上述效应均减弱.综上所述,我们的研究首次报道了Rad9与非同源末端连接修复蛋白Ku70间有相互作用,并提示Rad9可通过调节Ku70/Ku80/DNA-PKcs复合物功能参与非同源末端连接修复.

DNA-PKcs影响肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu增殖及机制的研究

目的检测DNA-PKcs对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu增殖的影响及其相关机制,探讨DNA-PKcs在肝癌多药耐药的发生发展中的作用。方法采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs转染Bel-7402/5-Fu细胞,cck-8法检测细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期;Western blot检测DNA-PKcs、TS蛋白的表达情况。结果实验组与对照组比较,细胞增殖减少(P<0.05);实验组S期细胞与对照组比较,细胞数减少(P<0.05);DNA-PKcs、TS蛋白表达结果显示,实验组相比对照组蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DNA-PKcs的表达沉默能抑制肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的细胞增殖;其机制可能与沉默DNA-PKcs蛋白表达后,TS蛋白表达下调有关。

DNA-PKcs在胶质母细胞瘤的表达及意义

目的研究胶质母细胞瘤DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)的表达,探讨其与Ki-67的相互关系及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测30例胶质母细胞瘤病人瘤组织中DNA-PKcs及Ki-67表达情况,并结合病人临床及预后资料进行统计分析。结果 (1)30例胶质母细胞瘤病人瘤组织中,均有DNA-PKcs与Ki-67表达。(2)DNA-PKcs表达与生存期呈负相关(r=-0.915,P<0.05),强阳性组生存期短于弱阳性组,生存率低于弱阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)DNAPKcs表达与Ki-67表达呈正相关(r=0.832,P<0.05)。(4)DNA-PKcs表达高低在不同年龄、性别、肿块大小的胶质母细胞瘤病人中差异无统计学意义(P>0.05)。结论在胶质母细胞瘤病人中,DNA-PKcs对病人临床治疗及预后预测具有重要意义。

营养信号通路调节细胞自噬的研究进展

营养缺乏的主要细胞反应之一是自噬上调。营养相关信号如细胞内氨基酸、ATP和氧含量等与细胞内合成和分解代谢过程的平衡密切相关。关键营养敏感激酶雷帕霉素靶蛋白复合物1(m TORC1)和单磷酸腺苷依赖蛋白激酶(AMPK)是营养相关自噬的主要信号通路。细胞内的营养情况通过失调51样激酶(ULK)和磷脂酰肌醇3激酶3型催化亚基(VPS34)激酶复合物的协调调节自噬。m TORC1、AMPK、ULK和VPS34之间的广泛交叉和反馈环在自噬诱导和保持细胞稳态中具有重要作用。本文主要描述细胞内营养状态(氨基酸、糖和氧)发生改变时自噬调节的研究进展。

DNA-PKcs影响肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU耐药性的机制

目的利用RNA干扰技术探讨DNA-PKcs基因沉默影响肝癌细胞BEl7402/5-FU耐药性的机制。方法将靶向DNA-PKcs的干扰质粒shDNA-PKcs转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU,利用实时荧光定量PCR及Western blot法检测转染干扰质粒后DNA-PKcs基因的沉默效率;Western blot检测Artemis、磷酸化Artemis蛋白水平的表达。结果实时荧光定量PCR及Western blot检测结果显示转染shDNA-PKcs后,DNA-PKcs mRNA及蛋白水平表达均下调(P<0.05);Western blot检测结果显示shDNA-PKcs转染组Artemis蛋白表达水平与对照组相比均有所降低(P<0.05),磷酸化Artemis蛋白表达水平在转染前后无明显变化(P>0.05)。结论 ShDNA-PKs干扰质粒能抑制Bel-7402/5FU细胞中DNAPKcs、Artemis蛋白的表达、但对P-Artemis的表达无影响。