脱氧核糖核酸变性和损伤的原子力显微镜液相观察

脱氧核糖核酸(DNA)的变性和损伤很大程度地阻碍DNA的复制和转录,所以研究DNA在生理环境下损伤和变性的机理能更好地研究其理化性质,并对基因治疗具有重要意义.首先使用原子力显微镜(AFM)对气相和液相环境下DNA进行对比,发现液相环境中获得的DNA图像比在气相环境中的更清晰,并且液相中的DNA更柔韧、松弛.其次研究在液相环境下二甲基亚砜(DMSO)、过氧亚硝酸盐(PN)对DNA形态的影响.研究发现,随着DMSO浓度增加,DNA的变性程度增强,环状DNA分子由没有缠绕的结构扭转为重叠螺旋的结构.同时随着PN浓度的增加,线状DNA从自然拉伸变为更加弯曲的状态,而且会断裂成较短的DNA片段.最后使用模型图加以解释,DMSO和PN使DNA的结构发生变化,变得不稳定后发生损伤和变性.

高效液相色谱-电化学检测法测定脱氧核糖核酸分子氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷

采用螯合剂 Fe2 + H2 O2 作为Fenton型反应的氧化源 ,与小牛胸腺脱氧核糖核酸反应生成 8 羟基脱氧鸟苷 ( 8 OhdG) ,建立脱氧核糖核酸 (DNA)分子氧化损伤的体外反应模型 ,用高效液相色谱 电化学检测方法对 8 OhdG进行定量。建立的方法灵敏度高 ,最低检出限 30fmol,线性范围宽 ,从 0 .32pmol到3.2nmol,相关系数达 0 .9996,方法能够适用于生物体与细胞脱氧核糖核酸分子低水平氧化损伤的检测。

羟基自由基引起的脱氧核糖核酸损伤研究

以鲱鱼精脱氧核糖核酸(Herring sperm DNA)为研究对象,利用紫外光(UV,200～275 nm,66.4 Lx)激发纳米TiO2发生光催化作用介导产生羟基自由基(Hydroxyl radical,.OH),探讨.OH引发DNA氧化损伤特性。采用凝胶电泳和高效液相色谱(HPLC)分析法跟踪DNA损伤历程;应用电子自旋共振(Electron spinresonance,ESR)及分光光度法跟踪损伤过程氧化物种及H2O2相对浓度的变化;运用生物标准样8-羟基脱氧鸟苷(8-Hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG)为内标物,通过HPLC分析DNA损伤产物,研究DNA损伤机理。结果表明,较单纯UV辐照或暗光(Dark)催化条件,DNA浓度10 mg/L,TiO2浓度1.5 g/L、pH 7～8,紫外光激发纳米TiO2介导产生.OH引发DNA损伤程度最大;DNA损伤为.OH氧化历程,并伴随有深度氧化过程;DNA结构中鸟嘌呤最易氧化损伤,8-OHdG为DNA氧化损伤中间产物及鸟嘌呤氧化损伤的特异产物。

脱氧核糖核酸变性和损伤的吸附伏安法研究

本文用汞电极（HMDE）二次导数阴极吸附伏安（SD－AdCSV）和碳电极（GCE、CPE）导数循环伏安（FD－CV）法研究了核酸受热、紫外线、超声波和丝裂霉素C（MMC）作用下的变性作用。在0．1mol／L（K2HPO4＋KH2PO4）-0．1mol／LNaCl（pH7．0）废液中，吸附的单股（ss-）和双螺旋（ds-）DNA分别在HMDE上得到特征还原峰P3（-1.56V）和P2（－1.37V，vs.Ag／Agcl），和在碳电极之得到氧化峰A（＋1.08V）及G（+0.78V）。物理和化学因素改变DNA的构型或使它变性时，反映在氧化还原峰形和参数有明显的变化。MMC优先结合ss－DNA，并能插入ds－DNA起交链作用。

高频超声照射下血卟啉镓配合物对脱氧核糖核酸的损伤

用紫外-可见(UV-Vis)光谱和荧光(FL)光谱研究了高频超声波激活血卟啉镓(HP-Ga)配合物对脱氧核糖核酸(DNA)的损伤,并探讨了超声波照射时间、HP-Ga浓度、溶液酸度和离子强度等因素对DNA损伤的影响。结果表明,在一定条件下,DNA的损伤程度随着超声波照射时间的增加和HP-Ga浓度的增大而加剧,而溶液酸度和离子强度的影响则较为复杂。

甲型H1N1流感病毒致宿主细胞脱氧核糖核酸氧化损伤的研究

目的:通过检测DNA损伤标志物8-氧鸟嘌呤脱氧核苷(8-oxo-dG)在甲型H1N1型流感病毒感染MDCK细胞中的表达,初步探讨甲型H1N1型流感病毒诱导细胞凋亡的脱氧核糖核酸(DNA)损伤机制。方法:MDCK细胞培养后,甲型H1N1流感病毒感染继续培养0h、1h、3h、6h、12h、24h、48h,细胞爬片免疫组织化学方法检测各时间点DNA损伤标志物8-oxo-dG的表达。结果:甲型H1N1流感病毒感染后各时间点实验组MDCK细胞8-oxo-dG的表达均显著高于相应的正常对照组(P<0.05),病毒感染各组间两两比较发现各组间差异显著。结论:甲型H1N1流感病毒感染能造成宿主细胞DNA氧化损伤。

线粒体脱氧核糖核酸缺失与病毒性心肌疾病患者心功能损伤的关系

目的：探讨不同心功能状态病毒性心肌疾病患者外周淋巴细胞线粒体脱氧核糖核酸（ｍｔＤＮＡ）缺失率，为进一步 明确ｍｔＤＮＡ损伤在病毒性心肌疾病发病中的作用提供分子依据。 方法：将８３例病毒性心肌疾病患者分为病毒性心肌炎组（ＶＭＣ组，ｎ＝５０）和扩张型心肌病组（ＤＣＭ组，ｎ＝３３）， ２３例健康献血者为对照组。用定量多聚酶链反应（ＰＣＲ）法检测患者外周淋巴细胞ｍｔＤＮＡ９７７碱基对（ｍｔＤＮＡ４９７７）和 ｍｔＤＮＡ７４３６碱基对（ｍｔＤＮＡ７４３６）缺失率，并分析ｍｔＤＮＡ缺失程度与心脏扩大及心功能状态的关系。 结果：ＶＭＣ组和ＤＣＭ组外周淋巴细胞ｍｔＤＮＡ缺失率显著高于对照组（Ｐ＜０．００１）；ｍｔＤＮＡ缺失率的高低与心 功能损害呈一致性改变，ＮＹＨＡ心功能 Ｉ级与Ⅳ级者 ｍｔＤＮＡ缺失率分别比对照组高 １２．４倍和 １１０．３倍；ｍｔＤＮＡ缺 失率与心功能分级、心胸比率及心腔内径呈正相关，与左心室射血分数（ＬＶＥＦ）呈负相关；ｍｔＤＮＡ４９７７和ｍｔＤＮＡ７４３６缺 失率与 ＬＶＥＦ的相关系数分别为－０．６８１和－０．６７５（Ｐ均＜０．０５）。 结论：ｍｔＤＮＡ缺失突变与病毒性心肌疾病患者心功能的损伤密切相关，可能在该病?

不同晶型二氧化钛(TiO_2)催化超声波损伤脱氧核糖核酸(DNA)的研究

利用紫外-可见(UV-Vis)光谱和荧光光谱研究了二氧化钛(TiO2)催化超声波照射对脱氧核糖核酸(DNA)的损伤作用,同时对金红石型和锐钛矿型TiO2催化性能进行了比较。此外,还探讨了超声波照射时间,TiO2加入量,溶液酸度,超声波功率和离子的种类及强度等因素对DNA损伤的影响。结果表明,金红石型TiO2的催化效果明显好于锐钛矿型TiO2。在一定条件下,DNA的损伤程度随着超声波照射时间,功率和TiO2加入量的增加而增大,随着溶液酸度的增加而减少。而离子的种类和强度对DNA的损伤作用则表现出不同的影响。这一结果对TiO2催化超声波照射治疗肿瘤应用于临床肯有一定的意义。

高频超声波协同血卟啉锌配合物对脱氧核糖核酸损伤研究

通过紫外-可见(UV-Vis)光谱和荧光光谱研究了高频超声波激活血卟啉锌(HP-Zn)配合物对脱氧核糖核酸(DNA)的损伤,探讨了超声波照射时间、HP-Zn浓度、溶液酸度、离子种类对DNA损伤的影响.结果表明,在一定条件下,DNA的损伤程度随着超声波照射时间的增加和HP-Zn浓度的增大而增加,且中性环境有利于DNA的损伤,而溶液离子强度的影响则较为复杂.研究结果对分子水平的声动力学(SDT)疗法应用于临床具有一定的指导意义.

高频超声照射下血卟啉(HP)对脱氧核糖核酸(DNA)结构的影响

采用紫外-可见(UV-Vis)光谱和荧光(FL)光谱研究了超声波照射激活光敏性化合物-血卟啉(HP)对脱氧核糖核酸(DNA)的损伤作用。在超声波和HP的协同作用下,在UV-Vis光谱中DNA溶液的吸光度表现出明显的增色效应,在FL光谱中DNA-EB溶液的荧光强度表现出明显的猝灭现象。考察了在超声波照射和HP存在的条件下,各种因素(如超声波照射时间,HP浓度和溶液酸度等)对DNA损伤程度的影响。结果表明,在一定条件下,DNA的损伤程度随着超声波照射时间的增长和HP浓度的增加而增大。溶液酸度对DNA损伤程度的影响较为复杂。当溶液为弱酸性和中性时对DNA的损伤较为明显,弱碱性时对DNA的损伤程度则又呈下降趋势。另外,在超声波损伤DNA的同时,溶液中的HP浓度也呈现出明显的下降趋势,说明HP也遭到了破坏。同时还探讨了超声波照射激活HP对DNA损伤的可能机理,认为对DNA损伤的现象可以采用"声致发光"和"热点"形成的机理进行解释。

褶合光谱法作抗脱氧核糖核酸突变药物筛选的初步研究

采用褶合光谱法考察紫外线致脱氧核糖核酸 (DNA)突变 ,并以褶合光谱差谱值δ的形式量化地表达DNA细微突变的程度 ,其灵敏度远高于二阶导数光谱法。DNA中添加二甲亚砜后表现的褶合光谱差谱变化与高效毛细管电泳指纹图谱的结果一致。褶合光谱法分析过程简单快速 ,可以用于抗紫外线损伤。

脱氧核糖核酸电化学传感器的原理及其应用

对电化学DNA传感器的组成及其在DNA损伤研究、环境污染监控、病原基因检测、基因疾病诊断和药物机理分析等方面的应用进行了总结 ,并对其发展趋势进行了评述。

羟基自由基引起的脱氧核糖核酸损伤分析

目的:羟基自由基引起的脱氧核糖核酸损伤分析。方法:以鲱鱼精脱氧核糖核酸(Herring sperm DNA)为观察对象,通过紫外光激发纳米TiO_2的光催化作用介导产生的-OH,着重利用凝胶电泳、高效液相色谱测定DNA损伤严重程度,以电子自旋共振、分光光度法对损伤过程氧化物种、H_2O_2相对浓度的变化状况进行动态跟踪观察,并且将生物标准样8-羟基脱氧鸟苷作用内标物,进一步分析-OH攻击DNA结构损伤位点情况,以便明确-OH引起DNA损伤的作用原理。结果:条件为DNA、TiO_2浓度分别为10mg/L、1.5g/L且TiO_2PH为7~8,通过紫外光激发TiO_2的光催化作用介导产生-OH,会引起较重的DNA损伤,其中DNA结构的鸟嘌呤最易氧化损伤,以8-羟基脱氧鸟苷为损伤产物。结论:脱氧核糖核酸损伤属于羟基自由基氧化历程。

碳纳米管原子力显微镜针尖对脱氧核糖核酸高分辨率成像研究

运用自制的碳纳米管原子力显微镜针尖,在液体中观察了脱氧核糖核酸(DNA)分子的精细结构。结果表明,运用碳纳米管针尖获得的DNA分子的高度与电子显微镜的结果非常接近,且没有造成样品的变形损伤;碳纳米管针尖得到的DNA分子的宽度与真实值相近,减小了原子力显微镜成像的增宽效应,这是用传统的硅针尖无法获得的。DNA分子精细结构的高分辨率图像的获得为研究其功能提供了有价值的信息。

肝脱氧核糖核酸蛋白(DNP)的滞后环研究

目的利用低、中、高三个不同的三角波切变率(0 s^(-1)-2.4 s^(-1)-0 s^(-1)、0 s^(-1)-24 s^(-1)-0 s^(-1)和0 s^(-1)-60 s^(-1)-0 s^(-1))的滞后环技术,研究猪肝脱氧核糖核酸蛋白(DNP)悬浮液在三个不同NaCl浓度(在生理盐水基础上加0、1.5、3 mol/L)下的黏弹性与触变性的变化。方法从猪肝制备DNP,采用美国Brookfield公司的程序性DVⅡ流变仪测定DNP样品的滞后环,在Windows下应用该公司的软件,编制自动采样程序,作各种数据(切应力、切变率、温度、时间等)的自动采集、贮存与数据处理。结果在低切变率三角波(0 s^(-1)-2.4 s^(-1)-0 s^(-1))条件下,NaCl浓度提高促使DNP悬浮液具有较高的屈服应力,明显的逆时针滞后环,展示其主要向高黏弹性体方向变化的情景:在中、高切变率三角波(0 s^(-1)-24 s^(-1)-0 s^(-1)和0 s^(-1)-60 s^(-1)-0 s^(-1))条件下,除了上述的性质存在以外,NaCl浓度还促使DNP悬浮液具有较高的触变性,并具有明显的顺时针滞后环。结论NaCl浓度的增高,具有促进DNP水化作用,同时切变率的增高,也是促进DNP水化作用的因素,此两个因素增加了DNP的水化度,致使DNP分子膨胀与改变构型,使之具有较高的黏弹性与触变性。

创伤性颈脊髓损伤患者华勒氏变性的磁共振成像研究

目的探讨创伤性颈脊髓损伤患者脊髓华勒氏变性(WD)的磁共振成像(MRI)信号特点。方法回顾性分析2015年1月至2021年12月在北京博爱医院脊髓损伤康复科住院康复的191例创伤性颈脊髓损伤患者的临床资料,对常规颈椎MRI的矢状位及轴位T2加权像(T2WI)进行影像学评估,将其分为WD组和非WD组。比较两组性别、年龄、损伤机制、美国脊柱损伤协会残损分级(AIS)、神经平面、伤后获得MRI的时间差等,并分析WD在脊髓的背柱区(DC)、外侧脊髓丘脑束区(ST)和外侧皮质脊髓束区(CS)的信号特点。结果115例(60.2%)出现WD。WD组与非WD组年龄、损伤机制、AIS的等级分布和伤后获得MRI时间差有显著性差异(Z>3.820,χ2>9.104,P<0.05)。WD组中,在损伤部位的上方,DC、ST的WD发生率分别为100%和87%;在损伤部位的下方,CS的WD发生率为35.7%。根据WD信号出现的方式将其分为3组,只出现DC变化的15例(13%),DC合并ST发生变化为59例(51.3%),DC、ST、CS 3个位置均有变化的41例(35.7%)。3组间伤后获得MRI的时间差有显著性差异(H=90.794,P<0.05),3组间AIS等级分布无显著性差异(P>0.05)。结论创伤性颈脊髓损伤患者的常规MRI检查T2WI可检测到WD信号,且WD的发生与伤后时间存在关联。

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对碘酸钠诱导的干性年龄相关性黄斑变性模型大鼠视网膜氧化损伤的抑制作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对碘酸钠诱导的干性年龄相关性黄斑变性(AMD)模型大鼠视网膜氧化损伤的抑制作用。方法取SPF级雄性SD大鼠36只随机分为空白对照组、碘酸钠组、碘酸钠+EGCG组,每组12只。碘酸钠组和碘酸钠+EGCG组大鼠按体质量尾静脉注射50 mg·kg-1碘酸钠,建立干性AMD模型,空白对照组大鼠给予等量生理盐水。造模后碘酸钠+EGCG组大鼠右眼玻璃体内注射4μL 0.5 g·L^(-1) EGCG,空白对照组、碘酸钠组大鼠右眼给予等量生理盐水,21 d后将大鼠处死、取材并检测指标。HE染色观察各组大鼠视网膜组织病理形态变化,检测大鼠视网膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量,Western blot检测大鼠视网膜Nrf2、NADPH氧化还原酶(NQO1)、Ⅰ型血红素氧化酶(HO-1)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测大鼠视网膜Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA相对表达量。结果HE染色结果显示,与空白对照组相比,碘酸钠组大鼠视网膜全层均损伤,视网膜色素上皮层细胞损伤明显,外核层排列紊乱,呈波浪状改变;与碘酸钠组相比,碘酸钠+EGCG组大鼠视网膜各层损伤得到改善。与空白对照组相比,碘酸钠组大鼠视网膜组织SOD、GSH-Px含量均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.01),MDA含量升高,差异有统计学意义(P<0.01);与碘酸钠组相比,碘酸钠+EGCG组大鼠视网膜组织SOD、GSH-Px含量均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.01),MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测结果显示,与空白对照组相比,碘酸钠组大鼠视网膜Nrf2、NQO1、HO-1蛋白相对表达量均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.01);与碘酸钠组相比,碘酸钠+EGCG组大鼠视网膜Nrf2、NQO1、HO-1蛋白相对表达量均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。实时荧光定量PCR检测结果显示,与空白对照组相比,碘酸钠组大鼠视网膜Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA相对表达量均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与碘酸钠组相比,碘酸钠+EGCG组大鼠视网膜Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA相对表达量均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论EGCG主要是通过上调Nrf2表达,进而激活下游产物NQO1、HO-1表达,提高SOD、GSH-Px含量,降低MDA含量,从而增强机体清除氧自由基的能力,抑制碘酸钠诱导的干性AMD大鼠视网膜氧化损伤。

心脏淀粉样变性合并脑栓塞、急性肾损伤1例

淀粉样变性是一种复杂的多系统疾病,当错误折叠的蛋白质片段沉积在心脏,所引起的心脏淀粉样变性,一方面缺乏特异性临床表现,另一方面常因合并其他疾病而被掩盖症状,因此易被漏诊误诊,从而延误治疗时机。本文报道了1例心脏淀粉样变性合并脑栓塞、急性肾损伤致死亡的病例,旨在提高临床对心脏淀粉样变性的认识。