脱氧核糖核酸定量的潜在基准方法研究进展

脱氧核糖核酸定量分析是食品安全检验、医疗诊断、转基因检测与病原微生物鉴定等相关领域的基础。常见的定量方法种类繁多,如紫外分光光度法、荧光染料法和实时荧光定量PCR法等等,各有所长,但测量结果缺乏可靠性、可比性和一致性。随着研究的深入与应用要求的提高,基准方法成为了核酸分析以及核酸测量能力评估的关键。本文综述了近年来三种成为潜在脱氧核糖核酸定量基准方法的研究发展,评述了各种方法的技术优势、不足与应用潜力,以期为其相关研究和利用提供参考。

乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸载量与乙型肝炎病毒e抗原和抗体定量对数正相关

目的探讨乙型肝炎(乙肝)病毒(Hepatitis B Virus,HBV)脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid,DNA)载量与乙肝病毒e抗原(HBV e Antigen,HBeAg)和抗乙肝病毒e抗原抗体(Antibody to HBeAg,Anti-HBe)定量的相关关系。方法使用美国雅培公司Abbott Axsym System,采用微粒子捕捉免疫发光技术(Microparticle Enzyme Immunoassay,MEIA),对621份HBV阳性回访人群血清进行HBV五项血清标志物的定性和定量检测;采用美国应用生物技术公司的7500实时聚合酶链反应系统[Real Time Polymerase Chain Reaction(PCR)System],运用PCR荧光探针法检测血清中HBV DNA含量;并进行统计分析。结果 (1)HBeAg阳性组HBV DNA阳性率高于HBeAg阴性组(X^2=44.60,P<0.0001);(2)HBV DNA载量分别与HBeAg、Anti-HBe定量存在对数正相关关系(偏相关系数r=0.65,P<0.0001;r=0.71,P<0.0001)。结论 HBeAg阳性预示HBV复制活跃,血清转换后HBV复制下降,但HBeAg或Anti-HBe定量越高,HBV DNA载量均越高,传染性越强。

33945例宫颈病变的筛查结果分析及DNA倍体定量分析技术的应用价值

目的 分析33 945例宫颈病变的筛查结果,并探讨DNA倍体定量分析技术在宫颈病变筛查中的应用价值。方法 纳入2012年至2015年该院行宫颈病变筛查的妇女33 945例,年龄18~74岁,取宫颈细胞标本,同时进行常规细胞学检查诊断及DNA倍体定量分析,筛查结果阳性者再进一步行阴道镜下宫颈活检组织病理学诊断。结果 2012~2015年宫颈病变筛查阳性率呈降低趋势（P〈0.05）。DNA倍体分析系统筛查宫颈病变的阳性率为9.28%,高于常规细胞学的6.82%（P〈0.05）。DNA倍体分析的活检阳性率为30.52%,高于常规细胞学的18.22%（P〈0.05）;DNA定量分析的宫颈癌阳性检出率为0.144%,也高于常规细胞学的0.076%（P〈0.05）。结论 该院就诊妇女宫颈病变检出率有逐年下降趋势。DNA定量分析法可提高宫颈癌及癌前病变的早期筛查率及活检阳性率。

DNA定量分析技术行宫颈癌筛查的结果分析

目的:探讨采用脱氧核糖核酸(DNA)定量分析技术进行宫颈癌筛查的的临床价值。方法:选取2017年1月至2018年2月期间在深圳市龙岗区人民医院进行宫颈癌筛查的妇女4825例,采用DNA定量分析技术对其进行筛查。计算细胞核的DNA倍体情况,如果未发现非整倍体细胞,建议进行常规定期筛查;非整倍体细胞数目为1或者2时,建议6个月复查1次;数目≥3时建议做阴道镜下组织活检。结果:4825例妇女中建议定期筛查3867例(80.1 %);6个月复查864例(17.9 %);阴道镜下组织活检94例(1.9 %)。活检结果为癌前病变66例(1.7 %),其中宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级30例,CINⅡ24例,CINⅢ级12例;宫颈癌21例(0.5 %),其中早期癌16例,浸润癌5例。结论:采用DNA定量检测技术筛查宫颈癌,并根据检查结果制定随访计划或进行阴道镜下组织活检,对宫颈癌的防治有重要意义。

乙肝标志物定量检测指标与乙肝病毒DNA定量、ALT的关系

目的探讨乙型肝炎(乙肝)标志物定量检测指标与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)定量、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的关系,为临床治疗乙肝提供参考。方法 185例门诊、住院及体检者,抽取静脉血,血液标本采用PCR-荧光探针法进行HBV-DNA含量测定,同时采用时间分辨荧光免疫测定法(TRFIA)及酶法进行两对半指标及ALT检测,对比分析检测结果。结果 185例乙肝患者的血液标本中,大三阳45例;小三阳111例;1,5阳性模式22例;1,2,3,5阳性模式2例;1,2,4,5模式5例;HBV-DNA检测阳性率为73.5%(136/185)。结论在乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)均为阳性的情况下,乙型肝炎e抗原(HBe Ag)阳性率与HBV-DNA定量及ALT有关,为临床制定合理的乙肝治疗方素提供了依据,有利于抑制乙肝病毒的传染。

宫颈细胞DNA定量及高危型HPV检测在宫颈癌筛查中的应用

目的:观察宫颈细胞脱氧核糖核酸(DNA)定量分析及高危型人类乳头瘤病毒(HPV)检测在宫颈癌筛查中的应用,分析其临床价值。方法:选取重庆市江津区妇幼保健院2014年2月至2016年3月收治的146例无宫颈癌脱落细胞学禁忌症的患者。分别对这些患者实施DNA定量分析、高危型HPV检测,并根据DNA定量分析结果,将检测人员分成实验活检组和非活检组。结果:本次无宫颈癌脱落细胞学禁忌证146例患者的经过DNA定量分析、高危型HPV检测,按照宫颈活检病理结果为标准,计算出细胞DNA定量分析的灵敏度为89.6%,特异度为79.2%;高危型HPV检测的56例患者呈现阳性,22例呈现阴性;组织学阴性22例,阳性46例。高危型HPV检测的敏感性为95.7%,特异性为58.2%。常规细胞检测组敏感性为56.2%,特异性为43.6%。由此可见,DNA定量分析和高危型HPV检测与常规的细胞学相比,具有统计学意义(P<0.05)。结论:宫颈细胞DNA定量分析及高危型HPV检测在宫颈癌筛查中应用的可靠性较高,具有很高的临床研究价值。

慢性乙型肝炎患者中医证型与HBsAg、HBeAg及HBV DNA定量分析的关系

目的:研究慢性乙型肝炎患者HBsAg定量、HBeAg定量、HBV DNA载量与中医证型的关系。方法:采用电化学发光法检测HBsAg、HBeAg定量,荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测HBV DNA载量,然后做统计分析。结果:HBsAg定量值肝郁脾虚型>肝胆湿热型>瘀血阻络型>肝肾阴虚型>脾肾阳虚型;肝胆湿热型与瘀血阻络型比较P>0.05,其余各组间比较P<0.05;HBeAg定量值肝胆湿热型>瘀血阻络型>脾肾阳虚型>肝郁脾虚型>肝肾阴虚型,肝胆湿热型与瘀血阻络型比较P>0.05,其余各组间比较P<0.001;HBV DNA载量脾肾阳虚型与其余各组比较,P<0.001,其余各组间比较P>0.05。结论:慢性乙型肝炎患者HBsAg和HBeAg定量以及HBV DNA载量与中医证型具有一定的相关性。

HPV、TCT及DNA检测对早期宫颈癌诊断的意义

目的:分析人乳头状瘤病毒(HPV)基因分型、液基薄层细胞学检查(TCT)及脱氧核糖核酸(DNA)倍体定量检测对早期宫颈癌诊断的意义。方法:回顾性分析江门市妇幼保健院2019年1月至2020年10月期间收治的疑似宫颈癌患者257例,各患者均接受导流杂交HPV基因分型、TCT、DNA倍体定量检测以及病理检查,以病理检查为金标准分析结果。结果:三者联合检测的灵敏度、特异度均高于任一方法单独检测,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:临床检测早期宫颈癌可考虑采用HPV基因分型、TCT、DNA倍体定量检测三者联合的方式,所得检测效果理想,可提升筛查准确性。

HPV E6E7 mRNA检测和DNA倍体定量分析在不同宫颈组织病理学病变的应用

目的探讨HPV E6E7 mRNA检测和DNA倍体定量分析在不同宫颈组织病理学病变的应用。方法HPV E6E7 mRNA检测阳性或DNA倍体定量分析阳性的500例患者行宫颈活检,以病理学作为金标准,比较HPV E6E7 mRNA检测和DNA倍体定量分析在宫颈炎、宫颈低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)及宫颈癌中的结果,分析单独及联合检测对宫颈HSIL和宫颈癌的诊断效能。结果HPV E6E7 mRNA检测在宫颈LSIL的阳性率高于宫颈炎,在宫颈HSIL和宫颈癌的阳性率高于宫颈LSIL(P<0.05)。DNA倍体定量分析在宫颈LSIL、宫颈HSIL、宫颈癌的阳性率均高于宫颈炎,在宫颈HSIL和宫颈癌的阳性率高于宫颈LSIL(P<0.05)。单独HPV E6E7 mRNA检测或DNA倍体定量分析及二者联合检测诊断宫颈HSIL和宫颈癌的灵敏度为93.18%或70.45%及95.45%,特异度为13.60%或92.32%及12.94%,准确度为20.60%或90.40%及20.20%。结论HPV E6E7 mRNA和DNA倍体定量分析在不同宫颈组织病理学病变中的阳性率存在差异,单独检测和二者联合检测对宫颈HSIL和宫颈癌有一定的诊断效能。

肝苏片联合聚乙二醇化干扰素α-2a治疗慢性乙型病毒性肝炎的疗效观察

目的探讨肝苏片联合聚乙二醇化干扰素α-2a注射液治疗慢性乙型肝炎临床效果。方法选取2014年6月—2016年6月在乐东黎族自治县中医院治疗的乙型病毒性肝炎患者60例作为研究对象,所有患者随机分为对照组和治疗组,每组各30例。对照组患者臀部皮下注射聚乙二醇化干扰素α-2a注射液,180μg/次,1次/周。治疗组患者在对照组治疗的基础上口服肝苏片,5片/次,3次/d。两组患者均连续治疗48周。观察两组患者的临床疗效,比较治疗前后两组患者肝功能、肝纤维化指标、健康调查简表(SF-36)评分、乙肝病毒的脱氧核糖核酸(HBV-DNA)定量水平和不良反应。结果治疗后,对照组和治疗组临床有效率分别为70.00%、93.33%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸酶(HA)、层粘连蛋白(LN)水平均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组患者各指标明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的SF-36评分显著升高,HBV-DNA定量水平均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组这些指标改善程度明显优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,治疗组患者不良反应发生率为10.00%,显著低于对照组的36.67%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论肝苏片联合聚乙二醇化干扰素α-2a注射液治疗慢性乙型肝炎的临床疗效显著、不良反应发生率低,具有一定的临床推广应用价值。

恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎后病毒学反弹与HBsAg水平的关系

目的探讨HBsAg水平高低与慢性乙型肝炎抗病毒治疗结束后病毒学反弹的关系。方法 45例HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者,服用恩替卡韦0.5 mg/d治疗2～3年结束时,依HBsAg定量水平分为>250 IU/ml(A)组25例和<250 IU/ml(B)组20例,观察停药后12、24、36和48周HBV DNA定量和肝功能的变化。结果停药时,两组HBV DNA定量均<1000 copies/ml,肝功能均在正常范围,无统计学差异。停药后48周,A组中15例出现病毒学反弹,HBV DNA定量升高,伴肝功能异常10例;B组中1例出现病毒学反弹,HBV DNA定量升高,无肝功能异常发生(P<0.05)。结论 HBsAg水平越低,停药后其病毒学反弹可能性越小。